一种靶向LILRB4的单克隆抗体的制作方法

本发明涉及生物医药，特别涉及一种靶向lilrb4的单克隆抗体。

背景技术：

1、急性髓系白血病(aml)是一种造血干细胞恶性肿瘤，是最常见的白血病类型，在欧洲的5年相对生存率为19％。慢性粒细胞白血病(cml)是一种缓慢进展的克隆性恶性疾病，是一种源自双相造血干细胞但由祖细胞驱动的骨髓增殖性疾病。cml后的aml很常见，这可能是由先前的髓系恶性肿瘤、致白血病治疗或没有可识别的前驱症状或暴露于细胞毒性药物引起的。

2、在最近研究中发现，lilrb家族的几个成员在aml细胞上高度表达，并且表达与人aml患者的总体存活呈负相关，其中，白细胞免疫球蛋白样受体亚家族b成员4(lilrb4)作为lilrb家族成员，其特异性高表达在m4和m5型aml细胞上，并且高表达lilrb4的病人生存率显著降低。载脂蛋白e(apoe)结合并激活lilrb4，募集shp-2，调控核因子κb(nf-κb)信号通路，从而刺激尿激酶受体(upar)和精氨酸酶1(arg1)的表达，进一步抑制t细胞增殖，促进组织浸润。抗lilrb4抗体能够阻断lilrb4与apoe的相互作用，抑制nf-κb信号通路，降低arg1表达，从而促进t细胞增殖并减少组织浸润。为此，抗lilrb4单克隆抗体的研究作为首款有望用于aml的t细胞激活剂，将为全球aml和慢性粒单核细胞白血病(cmml)病患带来创新治疗方案，具有非常大的市场潜力。为此，本发明提供了一种靶向lilrb4的单克隆抗体。

技术实现思路

1、通过对免疫文库的筛选，得到了可以与lilrb4特异性结合，且具有较高生物学活性的靶向lilrb4的单克隆抗体。

2、本发明具体技术方案如下：

3、本发明提供了一种靶向lilrb4的单克隆抗体，包括：

4、(1)氨基酸序列如seq id no:1所示的重链互补决定区hcdr1；

5、(2)氨基酸序列如seq id no:2所示的重链互补决定区hcdr2；

6、(3)氨基酸序列如seq id no:3所示的重链互补决定区hcdr3；

7、(4)氨基酸序列如seq id no:4所示的轻链互补决定区lcdr1；

8、(5)氨基酸序列如seq id no:5所示的轻链互补决定区lcdr2；

9、(6)氨基酸序列如seq id no:6所示的轻链互补决定区lcdr3。

10、进一步的，靶向lilrb4的单克隆抗体包括氨基酸序列如seq id no:7所示的重链可变区和氨基酸序列如seq id no:8所示的轻链可变区。

11、进一步的，靶向lilrb4的单克隆抗体还包括重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区选自鼠的igg1型、igg2a型、igg2b型或igg3型的恒定区的一种，所述轻链恒定区为氨基酸序列如seq id no:13所示的鼠源ck型的恒定区；所述igg1型的恒定区的氨基酸序列如seq id no:9所示，所述igg2a型的恒定区的氨基酸序列如seq id no:10所示，所述igg2b型的恒定区的氨基酸序列如seq id no:11所示，所述igg3型的恒定区的氨基酸序列如seq idno:12所示。

12、优选的，所述单克隆抗体为fab、f(ab)2、fv或scfv中的一种或几种组合。

13、本发明还提供了一种蛋白，所述蛋白包含所述的靶向lilrb4的单克隆抗体。

14、本发明还提供了一种核苷酸分子，所述核苷酸分子编码所述的靶向lilrb4的单克隆抗体。

15、本发明还提供了一种重组dna表达载体，所述重组dna表达载体包含所述的核苷酸分子。

16、本发明还提供了一种转染所述的重组dna表达载体的宿主细胞，所述宿主细胞包括原核细胞、酵母细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞；

17、优选的，所述宿主细胞为哺乳动物细胞，所述哺乳动物细胞为hek293细胞、cho细胞或ns0细胞。

18、还提供了一种药物，所述药物包含所述的靶向lilrb4的单克隆抗体。

19、本发明还提供了所述的靶向lilrb4的单克隆抗体在制备治疗癌症药物中的应用；

20、所述癌症包括急性髓系白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤、母细胞性浆细胞样树状突细胞肿瘤、乳腺癌、肺癌或前列腺癌中的一种或多种。

21、本发明的有益效果如下：本发明提供的靶向lilrb4的单克隆抗体与lilrb4抗原具有较高的结合能力，能够有效抑制lilrb4抗原与其配体复合物的结合，从而阻断下游nf-κb信号通路的激活和arg1的释放，促进t细胞增殖，及抑制组织浸润。此外，本发明筛选得到的单克隆抗体能够用于治疗癌症，癌症包括但不限于急性髓系白血病(aml)、急性成淋巴细胞性白血病(all)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、多发性骨髓瘤(mm)、母细胞性浆细胞样树状突细胞肿瘤(bpdcn)、乳腺癌、肺癌或前列腺癌。

技术特征：

1.一种靶向lilrb4的单克隆抗体，其特征在于，包括：

2.如权利要求1所述的靶向lilrb4的单克隆抗体，其特征在于，包括氨基酸序列如seqid no:7所示的重链可变区和氨基酸序列如seq id no:8所示的轻链可变区。

3.如权利要求2所述的靶向lilrb4的单克隆抗体，其特征在于，还包括重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区选自鼠的igg1型、igg2a型、igg2b型或igg3型的恒定区的一种，所述轻链恒定区为氨基酸序列如seq id no:13所示的鼠源ck型的恒定区；所述igg1型的恒定区的氨基酸序列如seq id no:9所示，所述igg2a型的恒定区的氨基酸序列如seq id no:10所示，所述igg2b型的恒定区的氨基酸序列如seq id no:11所示，所述igg3型的恒定区的氨基酸序列如seq id no:12所示。

4.如权利要求1所述的靶向lilrb4的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为fab、f(ab)2、fv或scfv中的一种或几种组合。

5.一种蛋白，其特征在于，所述蛋白包含权利要求1-4任一项所述的靶向lilrb4的单克隆抗体。

6.一种核苷酸分子，其特征在于，所述核苷酸分子编码权利要求1-4任一项所述的靶向lilrb4的单克隆抗体。

7.一种重组dna表达载体，其特征在于，所述重组dna表达载体包含权利要求6所述的核苷酸分子。

8.一种转染权利要求7所述的重组dna表达载体的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括原核细胞、酵母细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞；

9.一种药物，其特征在于，所述药物包含权利要求1-4任一项所述的靶向lilrb4的单克隆抗体。

10.权利要求1-4任一项所述的靶向lilrb4的单克隆抗体在制备治疗癌症药物中的应用；

技术总结
本发明涉及生物医药领域，具体提供了一种靶向LILRB4的单克隆抗体，HCDR1、HCDR2和HCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID No:1、SEQ ID No:2和SEQ ID No:3所示，LCDR1、LCDR2和LCDR3的氨基酸序列分别如SEQ IDNo:4、SEQ ID No:5和SEQ ID No:6所示，本发明提供的单克隆抗体与LILRB4抗原具有较高的结合能力，能够有效抑制LILRB4抗原与其配体复合物的结合，从而阻断下游NF‑κB信号通路的激活和ARG1的释放，促进T细胞增殖，及抑制组织浸润，有效用于治疗癌症。

技术研发人员：白义
受保护的技术使用者：北京东方百泰生物科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13