一种使用T细胞表位肽制备结核检测试剂的方法与流程

本发明涉及结核检测试剂，尤其涉及一种使用t细胞表位肽制备结核检测试剂的方法。

背景技术：

1、调查结果显示全世界有三分之一的人口处于潜伏感染，而每个未经治疗的活动性肺结核病人能够传染10～15人，故而有5％～10％在未来的生活中将可能发展为活动性结核病，因此，早期诊断和预防治疗对结核病的控制至关重要。人体感染结核杆菌后，结核杆菌被体内的抗原加工细胞加工，并提呈给体内本来就存在的、但数量极少的抗结核特异性t淋巴细胞，t淋巴细胞受到刺激而复制扩增，此时，人循环外周血中的抗结核特异性t淋巴细胞就能被检测到，而未经结核感染的人血液中很难检测到抗结核特异性t淋巴细胞，因此根据循环外周血中抗结核特异性t淋巴细胞的数量，可以判断是否感染结核杆菌，用于结核感染的临床辅助诊断。

2、目前对结核的检测方法包括以下几种：①临床上的检测方法是细菌学方法痰涂片镜检和痰培养，痰涂片镜检的灵敏度不高，隐性患者不能及时被发现；痰培养的价格昂贵、污染率高。②人群筛查的检测方法是皮肤结核菌素实验，其特异性差，不能有效区分结核分枝杆菌感染与卡介苗接种。③结核的影像学检查方式包括x线检查、ct检查、mri检查、超声检查等，价格昂贵，且对身体造成一定伤害，特异性低。上述方法对结核感染的检测试剂盒存在制备方法复杂、价格昂贵等问题，基于此，我们提出了一种使用t细胞表位肽制备结核检测试剂的方法。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种使用t细胞表位肽制备结核检测试剂的方法。

2、为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

3、一种使用t细胞表位肽制备结核检测试剂的方法，包括如下步骤：

4、s1：对结核分枝杆菌抗原蛋白编码基因上t细胞抗原表位进行预测；

5、s2：利用固态合成法合成t细胞表位肽，并将t细胞表位肽引入结核检测试剂盒中；

6、所述结核分枝杆菌抗原蛋白为rv1798、rv1705c中的一种，抗原蛋白rv1798的氨基酸序列为添加一个或几个氨基酸形成的具有相同免疫原性和相同抗原性的氨基酸序列；抗原蛋白rv1705c为序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

7、所述抗原蛋白rv1798的t细胞表位肽选自seq id no：1或2所示的氨基酸序列；

8、所述抗原蛋白rv1705c的t细胞表位肽选自序列表中序列1自n端起第1至25位所示的氨基酸序列。

9、优选地：所述t细胞表位肽为中性(不带电荷的)或盐形式。

10、优选地：所述结核检测试剂盒包括捕获抗体、检测抗体、阳性对照孔板、阴性对照孔板和培养板；

11、所述捕获抗体、检测抗体为识别ifn-γ不同抗原表位的单克隆抗体。

12、优选地：所述捕获抗体固定于培养板上。

13、优选地：所述捕获抗体为浓度为20～50μg/ml的抗人或动物ifn-γ的一种小鼠单克隆抗体；

14、所述检测抗体为浓度为20～50μg/ml的抗人或动物ifn-γ不同表位的另一小鼠单克隆抗体。

15、优选地：所述阳性对照孔板的内部设有植物血凝素pha；

16、所述阴性对照孔板的内部设有无抗原的细胞培养液。

17、优选地：所述培养板为含有硝酸纤维素膜的96孔微孔反应板。

18、优选地：所述s2之后，还包括利用结核检测试剂盒对宿主的特异性t淋巴细胞进行检测。

19、本发明的有益效果为：

20、1.本发明，采用固相合成的方法合成表位多肽，有利于质量控制，且成本较低，纯度高，制备方法简单，适合大规模商业化生产，抗原蛋白引发了有效的th1型体液和细胞免疫应答，能够降低由于抗原不纯造成的假阳性，有利于对结核病的控制。

21、2.本发明，抗原蛋白可以保护机体免受结核分枝杆菌的侵害，t细胞表位肽可以活化和诱导抗原蛋白细胞增殖和分泌ifn-γ，与hla-a*1101分子亲和力高，对结核病的防治具有重大意义。

22、3.本发明，利用t细胞表位肽制备的结核检测试剂盒对结核患者、肺部疾病患者、健康人体内的特异性t淋巴细胞进行检测，获得的结果误差小，可以保护宿主免受结核分枝杆菌的侵害，成本相对较低。

技术特征：

1.一种使用t细胞表位肽制备结核检测试剂的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种使用t细胞表位肽制备结核检测试剂的方法，其特征在于，所述t细胞表位肽为中性(不带电荷的)或盐形式。

3.根据权利要求1所述的一种使用t细胞表位肽制备结核检测试剂的方法，其特征在于，所述结核检测试剂盒包括捕获抗体、检测抗体、阳性对照孔板、阴性对照孔板和培养板；

4.根据权利要求3所述的一种使用t细胞表位肽制备结核检测试剂的方法，其特征在于，所述捕获抗体固定于培养板上。

5.根据权利要求4所述的一种使用t细胞表位肽制备结核检测试剂的方法，其特征在于，所述捕获抗体为浓度为20～50μg/ml的抗人或动物ifn-γ的一种小鼠单克隆抗体；

6.根据权利要求5所述的一种使用t细胞表位肽制备结核检测试剂的方法，其特征在于，所述阳性对照孔板的内部设有植物血凝素pha；

7.根据权利要求6所述的一种使用t细胞表位肽制备结核检测试剂的方法，其特征在于，所述培养板为含有硝酸纤维素膜的96孔微孔反应板。

8.根据权利要求1所述的一种使用t细胞表位肽制备结核检测试剂的方法，其特征在于，所述s2之后，还包括利用结核检测试剂盒对宿主的特异性t淋巴细胞进行检测。

技术总结
本发明公开了一种使用T细胞表位肽制备结核检测试剂的方法，涉及结核检测试剂技术领域；为了解决制备方法复杂问题；具体包括如下步骤：对结核分枝杆菌抗原蛋白编码基因上T细胞抗原表位进行预测；利用固态合成法合成T细胞表位肽，并将T细胞表位肽引入结核检测试剂盒中；所述结核分枝杆菌抗原蛋白为Rv1798、Rv1705C中的一种，抗原蛋白Rv1798的氨基酸序列为添加一个或几个氨基酸形成的具有相同免疫原性和相同抗原性的氨基酸序列。本发明成本较低，纯度高，制备方法简单，适合大规模商业化生产，抗原蛋白引发了有效的Th1型体液和细胞免疫应答，能够降低由于抗原不纯造成的假阳性，有利于对结核病的控制。

技术研发人员：刘永红
受保护的技术使用者：东莞兰卫医学检验实验室有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12