线纹海马C型溶菌酶基因和编码蛋白及其克隆方法

本发明属于生物，具体涉及线纹海马c型溶菌酶基因和编码蛋白及其克隆方法。

背景技术：

1、海马隶属海龙科，是一种海洋小型硬骨鱼类，具有非常高的经济和药用价值。随着海马养殖的迅速发展，养殖规模不断扩大，伴随病害频发，造成巨大的经济损失。抗生素的使用在预防和治疗海马病害中起着重要作用，有效缓解遏制海马疾病的流行，提高了海马产量。但随之引发的耐药性细菌的产生和水质污染，危害渔业和人体健康，从而寻求新型药物的需要日趋迫切。

2、抗菌肽是先天系统中一种重要的效应因子，对细菌、真菌和病毒等具有广泛的抑制作用。与传统抗生素不同，抗菌肽因其对微生物不具有特异性，很难产生耐药性，使其成为抗生素的理想替代品。并且抗生素杀灭细菌，通常会引起细菌死亡导致内毒素的大量释放，而抗菌肽除了具有抗菌作用，还能中和内毒素，减少细菌毒力。

3、溶菌酶是鱼类种主要的抗菌肽之一，又称粘肽n-乙酰基胞壁酰水解酶，能水解细菌细胞壁引起细菌裂解。人和动物细胞无细胞壁结构亦无肽聚糖，故溶菌酶对人体细胞无毒性作用。溶菌酶广泛存在于动植物中，在机体免疫防御中发挥重要作用。因其对微生物具有非常好的抑制和杀灭作用，无论在工业还是医学上都具有重要的应用价值。例如，溶菌酶可作为临床药物，具抗菌、清除局部坏死组织、止血、消肿、消炎及恢复组织功能等作用，在医学上可用来制消炎药等。在食品工业上可用作防腐剂，还可添加在牙膏中作为防治龋齿的药用牙膏。在发酵工业上是一种重要的溶菌剂，用于存作细胞壁，制备无菌体提取液。

4、基于上述问题，我们急需发现新的，安全无毒性的抗菌药物，以满足实际应用的需求。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种新型抗菌肽-线纹海马c型溶菌酶，为新型药物的开发提供备选，以及提供该溶菌酶在抗菌药物中的应用。

2、本发明的第一个目的是提供一种线纹海马溶菌酶helyzc，其氨基酸序列如seqidno.1所示。

3、本发明的第二个目的是提供一种核酸，所述核酸编码上述的线纹海马溶菌酶helyzc。具体的，所述核酸的核苷酸序列如seq id no.2所示。

4、本发明的第三个目的是提供一种含有上述的核酸的生物材料。

5、优选的，所述生物材料为重组dna、表达盒、转座子、载体或宿主细胞。

6、本发明的第四个目的是提供上述的线纹海马溶菌酶helyzc、上述的核酸或上述的生物材料在制备抗菌产品中的应用。

7、优选的，所述的产品为饲料添加剂、防腐剂或药品。

8、本发明的第五个目的是提供一种抗菌产品，其包含上述的线纹海马溶菌酶helyzc。

9、本发明的第六个目的是提供上述的线纹海马溶菌酶helyzc、上述的核酸或上述的生物材料在海马遗传选育中的应用。

10、本发明的第七个目的是提供一种线纹海马溶菌酶helyzc基因的克隆方法，包括以下步骤：

11、(1)提取成年雄性线纹海马的育儿袋组织的rna，反转录得到cdna；

12、(2)以cdna为模板，使用引物f:5'-atgaggccgacatccgccctg-3'；r:5'

13、-tcagttgcactggccgaagaa-3'进行pcr扩增，回收并纯化pcr产物，并测序。

14、本发明的溶菌酶来自线纹海马，是一种新型溶菌酶，可应用于水产养殖业和医药产品。因此，本发明的溶菌酶helyzc可应用于制备抗菌产品，所述的抗菌产品包括饲料添加剂、防腐剂和药品等。

技术特征：

1.一种线纹海马溶菌酶helyzc，其特征在于，其氨基酸序列如seq id no.1所示。

2.一种核酸，其特征在于，所述核酸编码权利要求1所述的线纹海马溶菌酶helyzc。

3.根据权利要求2所述的核酸，其特征在于，所述核酸的核苷酸序列如seq id no.2所示。

4.一种含有权利要求2所述的核酸的生物材料。

5.根据权利要求4所述的生物材料，其特征在于，所述生物材料为重组dna、表达盒、转座子、载体或宿主细胞。

6.权利要求1所述的线纹海马溶菌酶helyzc、权利要求2所述的核酸或权利要求4所述的生物材料在制备抗菌产品中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的产品为饲料添加剂、防腐剂或药品。

8.一种抗菌产品，其特征在于，包含权利要求1所述的线纹海马溶菌酶helyzc。

9.权利要求1所述的线纹海马溶菌酶helyzc、权利要求2所述的核酸或权利要求4所述的生物材料在海马遗传选育中的应用。

10.一种线纹海马溶菌酶helyzc基因的克隆方法，其特征在于，包括以下步骤：

技术总结
本发明公开了线纹海马C型溶菌酶基因和编码蛋白及其克隆方法。所述的线纹海马C型溶菌酶HeLyzC的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码该溶菌酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明的线纹海马C型溶菌酶HeLyzC来自线纹海马，是一种新型溶菌酶，可应用于制备抗菌产品。

技术研发人员：林强,肖旺红,秦耿,张艳红
受保护的技术使用者：中国科学院南海海洋研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13