一种黑曲霉及其应用的制作方法

本申请涉及微生物，具体涉及一种黑曲霉及其应用。

背景技术：

1、磷是植物生长发育不可或缺的营养元素，它是植物体内许多有机化合物的重要组分，并且磷能够以各种方式参与植物体内的多种代谢过程。然而，磷在土壤中极易被固定，使得土壤中的有效磷含量极低，易造成植物对磷的吸收量不足导致缺磷的问题。针对这一问题，最常用的解决措施是加大对磷素的投入，从而提高有效磷的含量；然而，我国磷矿资源相对匮乏、磷属于不可再生资源，并且加大磷素投入也会造成种植成本增加，故上述解决措施并非是长久之计。因此，通过绿色、经济、高效的生物途径活化土壤中的难溶磷并将其转化为有效磷进而提高土壤有效磷含量，以降低化肥投入和减少种植成本成为目前亟待解决的问题。

2、土壤微生物是农业生态系统中重要的组成部分，土壤中的解磷微生物对磷的高效利用和植物生长发育有着重要作用。同时，土壤微生物能够代谢产生铁载体和酶类螯合根际自由铁离子、产生胞外酶水解真菌细胞壁以及和其它生物，从而可以间接促生作物生长。因此，通过微生物活化土壤难溶无机磷和有机磷，提高土壤有效磷含量和作物对磷素的吸收利用效率，促进作物生长提升作物产量，减少作物土传病害，对环境保护和降低种植成本有重要的意义。因此，急需提供一种使用效果优异的、能够活化土壤中难溶磷的土壤微生物。

技术实现思路

1、为了活化土壤中的难溶磷、提高农作物的产量，本申请提供一种黑曲霉及其应用。

2、第一方面，本申请提供一种黑曲霉。

3、一种黑曲霉，所述黑曲霉为黑曲霉(aspergillus niger)jp01；保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)，保藏编号为cgmcc no.40231，保藏时间为2022年6月23日。

4、本申请提供一种黑曲霉jp01。第一方面，该黑曲霉jp01能够活化土壤中难溶的有机磷、无机磷和磷矿粉，使土壤中的有效磷含量升高，进而提高农作物对磷素的利用率、促进农作物生长；第二方面，该黑曲霉jp01代谢还能产生铁载体、纤维素酶和蛋白酶等活性物质，能够促进作物生长及有机物料腐殖化；第三方面，该黑曲霉jp01对多种病原菌有很好的抑制效果，能够侵占病原菌的生长空间，进而减少作物的病害发病率。本申请提供的黑曲霉与相关技术中的土壤微生物相比，其溶磷效果更优、活性物质产量更高、病原菌抑制效果更好。

5、第二方面，本申请提供一种黑曲霉的分离、筛选方法。

6、一种黑曲霉的分离、筛选方法，包括以下步骤：

7、取样：将收集的土壤置于水中，充分震荡并静置，取上清液；

8、培养：将所述上清液稀释，然后在无机磷固体培养基上进行培养，获得多种菌株；

9、划线纯化：在所述多种菌株中挑选产生透明圈的菌落，经过多次划线培养、纯化，获得黑曲霉。

10、本申请通过采用上述黑曲霉的分离、筛选方法，能够获得三株具备溶磷效果的菌株，分别命名为jp01、jp03、pg62；经鉴定jp01属于黑曲霉、jp03属于杰氏假单胞菌、pg62属于苍白杆菌。其中，黑曲霉jp01的解磷效果和产载体酶、蛋白酶、纤维素酶能力最好，在解磷应用上具有较大的潜力。

11、第三方面，本申请提供一种包括所述黑曲霉jp01的发酵物。

12、第四方面，本申请提供一种发酵上清液，所述发酵上清液是所述发酵物经离心后获得的上层澄清液。

13、第五方面，本申请提供一种包括所述黑曲霉jp01的菌悬液。

14、第六方面，本申请提供一种包括所述黑曲霉jp01的菌剂。

15、第七方面，本申请提供一种包含所述菌剂的粉体菌剂，所述粉体菌剂中还包括海藻酸钠和载体；所述载体选自草炭土和高岭土；所述海藻酸钠在发酵液中的质量百分比为0.5-1.0％；所述发酵液与载体的体积比为1：(2-10)。

16、在一个具体的实施方案中，所述海藻酸钠在发酵液中的质量百分比为1.0％，所述发酵液与载体的体积比为1：5。

17、第八方面，本申请提供一种包含粉体菌剂的固体菌剂，所述固体菌剂还包括腐殖酸；所述粉体菌剂的添加量为腐植酸添加量的0.1-10％。

18、在一个具体的实施方案中，所述粉体菌剂的添加量为腐植酸添加量的5％。

19、第九方面，本申请提供的黑曲霉、发酵物、发酵上清液、菌悬液、菌剂、粉体菌剂、固体菌剂在土壤、肥料、栽培基质中的应用。

20、综上所述，本申请具有以下有益效果：

21、1.本申请提供一种黑曲霉(aspergillus niger)jp01；该黑曲霉jp01保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)，保藏编号为cgmcc no.40231，保藏时间为2022年6月23日。

22、2.本申请提供的黑曲霉jp01菌株能溶解、活化土壤中难溶解的无机磷、有机磷和磷矿粉，进而提高土壤有效磷和磷素利用效率。

23、3.本申请提供的黑曲霉jp01菌株能够代谢铁载体、纤维素酶和蛋白酶等多种活性物质，进而能够促进作物生长和有机物料的腐殖化。

24、4.本申请提供的黑曲霉jp01菌株对番茄枯萎病病原菌、番茄灰霉病病原菌、烟草赤星病病原菌、草莓炭疽病病原菌、葡萄灰霉等病原菌具有抑制效果，能够侵占病原菌的生长空间，减少作物病害发病率。

25、5.本申请提供的黑曲霉jp01菌株安全且满足常规生产工艺需求，能够适合工业化生产，在活化土壤养分、促进作物生长及减少作物病害发病率上具有显著的效果，在农业健康安全种植方面具有较大的应用潜力。

技术特征：

1.一种黑曲霉，其特征在于，所述黑曲霉为黑曲霉（aspergillus niger）jp01；保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（cgmcc），保藏编号为cgmcc no.40231，保藏时间为2022年6月23日。

2.如权利要求1所述的黑曲霉的分离、筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.一种发酵物，其特征在于，所述发酵物包括权利要求1所述的黑曲霉jp01。

4.一种发酵上清液，其特征在于，所述发酵上清液是权利要求3所述的发酵物经离心后获得的上层澄清液。

5.一种菌悬液，其特征在于，所述菌悬液包括权利要求1所述的黑曲霉jp01。

6.一种菌剂，其特征在于，所述菌剂包括权利要求1所述的黑曲霉jp01。

7.一种包含权利要求6所述菌剂的粉体菌剂，其特征在于，所述粉体菌剂中还包括海藻酸钠和载体；所述载体选自草炭土和高岭土；所述海藻酸钠在发酵液中的质量百分比为0.5-1.0%；所述发酵液与载体的体积比为1：（2-10）。

8.一种包含权利要求7所述的粉体菌剂的固体菌剂，其特征在于，所述固体菌剂还包括腐殖酸；所述粉体菌剂的添加量为腐植酸添加量的0.1-10%。

9.如权利要求1所述的黑曲霉、权利要求3所述的发酵物、权利要求4所述的发酵上清液、权利要求5所述的菌悬液、权利要求6所述的菌剂、权利要求7所述的粉体菌剂、权利要求8所述的固体菌剂在土壤、肥料、栽培基质中的应用。

技术总结
本申请涉及微生物技术领域，具体公开了一种黑曲霉及其应用。本申请提供的黑曲霉（Aspergillus niger）JP01保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏编号为CGMCC NO.40231，保藏时间为2022年6月23日；本申请还提供了利用上述黑曲霉制备的发酵物、发酵上清液、菌悬液和菌剂；以及上述发酵物、发酵上清液、菌悬液、菌剂在土壤、肥料、栽培基质中的应用。本申请提供的黑曲霉不仅能溶解有机磷、无机磷和磷矿粉，还能产生铁载体、蛋白酶、纤维素酶等活性物质，并且能有效抑制病原菌生长，进而间接促进作物生长。

技术研发人员：彭启超,张志鹏,魏浩,车欣宇,李俊,张鑫鹏,黄德龙,邓祖科,金晶,王莹,吴书凤
受保护的技术使用者：北京世纪阿姆斯生物工程有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12