一种全自动外周血分离方法及装置与流程

本发明涉及生物，具体的，涉及一种全自动外周血分离方法及装置。

背景技术：

1、细胞治疗是指利用某些具有特定功能的细胞的特性，采用生物工程方法获取和/或通过体外扩增、特殊培养等处理后，使细胞具有增强免疫、杀死病原体和肿瘤细胞、促进组织器官再生和机体康复等治疗功效，进而可以治疗各种疾病。

2、目前，分离外周血单个核细胞的方法主要有黏附法、免疫磁珠分离法、流式细胞分离以及经典的ficoll-hypaque密度梯度离心法。黏附法操作麻烦、回收率低，分离纯度不高，免疫磁珠法虽然分离纯度较高，回收率也高，但其成本过高，流式细胞分离成本较高，ficoll-hypaque密度梯度离心法所得到的细胞虽然纯度较好，但是样本量不能过多，样本量多的话也会影响其分离的效果，而且对操作人员的要求比较高，产品的一致性较差，且生产效率不高。

3、中国专利cn112251404a公开了一种外周血单个核细胞的分离方法，结合了羟乙基淀粉沉淀以及ficoll密度梯度离心法，实现对单个核细胞的进一步纯化，纯度和活力较高，但其都为人工操作，生产速率较慢，产品一致性较差，并未解决回收率较差的问题。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明的第一个方面提供了一种全自动外周血分离方法，包括如下步骤：将样本袋中的外周血样本液和梯度液加入离心杯中，离心后收集目标细胞液到中间袋中；将中间袋中的目标细胞液和洗涤液加入离心杯内进行洗涤置换后得到预产品；将预产品和细胞稀释液混合得到终产品。

2、进一步优选的，该方法具体包括：分离前处理、设置分离参数、启动分离、结束流程；

3、进一步优选的，所述分离前处理步骤具体为，在全自动外周血分离装置上安装耗材，接入外周血样本液(本申请指外周血)、梯度液、洗涤液(置换液)、细胞稀释液。

4、进一步优选的，将所述样本袋中的外周血样本液经样本液排气后，再加入离心杯，此时的进液速度为18-22ml/min。

5、进一步优选的，所述进液速度为20ml/min。

6、优选的，所述离心后产生分层现象，之后，将管路中残留的所述样本液回排到所述样本袋中。

7、优选的，当所述外周血样本液的量大于一次离心杯的分离量时，则需要将所述样本液进行多次进液分离。

8、优选的，所述收集目标细胞液后，清洗离心杯和管路。

9、优选的，所述目标细胞液和洗涤液加入离心杯的顺序为，先将中间袋内的目标细胞液排空至离心杯，再加入洗涤液至中间袋内后排入离心杯。

10、优选的，所述洗涤置换的次数为1-3次。

11、进一步优选的，所述洗涤置换的次数为3次。

12、优选的，在所述得到终产品后，将所述终产品排入产品袋中，用所述细胞稀释液清洗所述离心杯，并将清洗后的液体排入到所述产品袋中，清洗离心杯的次数为1-20次。

13、进一步优选的，所述清洗离心杯的次数为3次。

14、优选的，所述清洗离心杯结束后，对所述产品袋中的终产品进行分装。

15、进一步优选的，对所述产品袋中的终产品进行分装后，进行残余收集。

16、本发明第二方面提供了一种全自动外周血分离装置，所述的全自动外周血分离方法应用于所述装置中。

17、进一步优选的，所述全自动外周血分离装置包括样本秤、置换液2秤、置换液1秤、离心机、中间秤、产品秤、触摸显示屏、急停按钮、气泡检测器、离心机压力监测器、蠕动泵、旋压阀和报警系统，所述样本秤用于称量外周血样本液的进液量；所述置换液1秤和置换液2秤用于称量置换液(洗涤液)的进液量；所述离心机用于对离心杯提供旋转动力以分离细胞液；所述中间秤用于称量中间袋中目标细胞液的重量；所述产品秤用于称量终产品的重量；所述触摸显示屏用于设置分离参数；所述急停按钮用于停止离心机的转动；所述气泡检测器用于检测管路中是否存在气泡；所述离心机压力监测器用于监测离心机内部的压力情况，用以确保离心过程的安全性，如果离心机压力过高，报警系统就会启动，立即按压急停按钮停止离心机的运行；所述蠕动泵用于向离心杯泵入液体或从离心杯内泵出液体；所述旋压阀用于控制管路的开闭。

18、有益效果：

19、(1)本发明提供了一种全自动外周血分离方法，该方法为自动化操作，将配套一次性耗材，分离、洗涤置换、制剂分装整合在一个设备上，不仅降低了操作人员的工作强度，还使得生产速率也能得到提高，产品一致性提高。

20、(2)本发明提供了一种全自动外周血分离方法，该方法中通过梯度液排气、缓慢加入样本液和样本液回排，减少了样本液损失，提高了回收率，除此之外，排浓缩废液这个步骤减少了红细胞的混入，提高了产品的纯度，在分离杯冲洗残留步骤中，将管路和离心杯内残留红细胞去除，进一步提高了产品纯度。

21、(3)本发明提供了一种全自动外周血分离方法，该方法中一次性能添加大量样本液，克服了ficoll密度梯度离心法的样本量过多的缺点，且本方法使用的是一次性全密封耗材，降低了污染的风险。

技术特征：

1.一种全自动外周血分离方法，其特征在于，包括如下步骤：将样本袋中的外周血样本液和梯度液加入离心杯中，离心后收集目标细胞液到中间袋中；将中间袋中的目标细胞液和洗涤液加入离心杯内进行洗涤置换后得到预产品；将预产品和细胞稀释液混合得到终产品。

2.根据权利要求1所述的一种全自动外周血分离方法，其特征在于，将所述样本袋中的外周血样本液经样本液排气后，再加入离心杯，此时的进液速度为18-22ml/min。

3.根据权利要求1所述的一种全自动外周血分离方法，其特征在于，所述离心后产生分层现象，之后，将管路中残留的所述样本液回排到所述样本袋中。

4.根据权利要求1所述的一种全自动外周血分离方法，其特征在于，当所述外周血样本液的量大于一次离心杯的分离量时，则需要将所述样本液进行多次进液分离。

5.根据权利要求4所述的一种全自动外周血分离方法，其特征在于，所述收集目标细胞液后，清洗离心杯和管路。

6.根据权利要求1所述的一种全自动外周血分离方法，其特征在于，所述目标细胞液和洗涤液加入离心杯的顺序为，先将中间袋内的目标细胞液排空至离心杯，再加入洗涤液至中间袋内后排入离心杯。

7.根据权利要求1所述的一种全自动外周血分离方法，其特征在于，所述洗涤置换的次数为1-3次。

8.根据权利要求1所述的一种全自动外周血分离方法，其特征在于，在所述得到终产品后，将所述终产品排入产品袋中，用所述细胞稀释液清洗所述离心杯，并将清洗后的液体排入到所述产品袋中，清洗离心杯的次数为1-20次。

9.根据权利要求8所述的一种全自动外周血分离方法，其特征在于，所述清洗离心杯结束后，对所述产品袋中的终产品进行分装。

10.一种全自动外周血分离装置，其特征在于，所述权利要求1-9任一项所述的全自动外周血分离方法应用于所述装置中。

技术总结
本发明公开了一种全自动外周血分离方法及装置，该方法包括如下步骤：将样本袋中的外周血样本液和梯度液加入离心杯中，离心后收集目标细胞液到中间袋中；将中间袋中的目标细胞液和洗涤液加入离心杯内进行洗涤置换后得到预产品；将预产品和细胞稀释液混合得到终产品。该方法为自动化操作，不仅降低了操作人员的工作强度，还使得生产速率也能得到提高，提高了产品的回收率和纯度，该方法中一次性能添加大量样本液，克服了Ficoll密度梯度离心法的样本量过多的缺点，且本方法使用的是一次性全密封耗材，降低了污染的风险。

技术研发人员：魏东兵
受保护的技术使用者：中博瑞康（上海）生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12