一株乳酸乳球菌PZ1及其在制备富硒低聚肽中的应用的制作方法

本发明涉及微生物，更具体的说是涉及一株乳酸乳球菌pz1及其在制备富硒低聚肽中的应用。

背景技术：

1、硒(se)是人和动物的必需微量营养元素，具有重要的生理功能，大量资料证实或提示，硒具有广泛的生物学作用，在预防克山病、某些癌症治疗和延缓衰老中发挥着重要作用。

2、但是，自然界中硒的形态多样，只有科学的补硒才能促进人体健康。在生物体内，硒的生物学功能主要是以硒蛋白形式和无机硒形式表现，有机硒主要以硒代胱氨酸、硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸等形式存在，无机硒则主要以硒酸盐、亚硒酸盐等形式存在。不同硒化合物在人体内利用率也不一样，硒代蛋氨酸最高，其次是硒代半胱氨酸和硒代胱氨酸，再次为亚硒酸盐。可见，以硒蛋白为代表的有机硒是人体补硒的最佳来源。与无机硒相比，有机硒尤其是蛋白硒及氨基酸硒具有毒性小、吸收利用率高、生物活性强及安全性高等优点，目前日本、美国等国家已经禁止在食品中添加亚硒酸钠等无机硒。另外富硒食品多是通过施硒肥种植富硒植物，硒肥特别是无机硒肥的使用容易造成环境污染，并且生产周期较长，产品硒含量不均衡，探索高效生产富硒产品的新途径显得尤为迫切。因此，开发以蛋白硒为有机硒源的功能产品是补硒最佳选择。

3、我国是世界大豆主产国，大豆具有很高的营养价值，蛋白含量在豆类中居前列，大豆也成为了富硒效果较好的农产品。大豆蛋白肽是大豆蛋白质经酸法或酶水解作用后，经分离、精制等特殊过程处理而得到的蛋白质水解产物，通常是由3～6个氨基酸组成的相对分子质量低于1000的低肽混合物。大豆蛋白肽的氨基酸组成几乎与大豆蛋白质完全一样，但在体内的消化吸收却要明显优于游离氨基酸，它不仅营养丰富，而且还具有调整血糖浓度、降低血压和抑制胆固醇、抗氧化、抗血栓、调节免疫功能等生物活性和生理功能。

4、目前，大豆蛋白肽在生产上普遍应用酶水解法，但微生物发酵法要比酶水解法的成本低，而且通过微生物发酵法生产的大豆蛋白肽在溶解性和口感方面也要优于酶水解法。而富硒大豆低聚肽主要采用两种方法生产，一是对富硒大豆进行酶解后，进行分离提纯，获得富硒大豆低聚肽。二是采用化学反应合成富硒低聚肽，福州大学张馨元等以大豆分离蛋白为原料，对蛋白酶解获得蛋白肽后，与亚硒酸钠进行螯合反应，制备出富硒大豆蛋白肽。但酶解工艺中的低聚肽水解度的严格控制条件和水解时的苦味不能完全抑制，化学合成工艺的硒还是无机硒形式，毒性较大。

5、因此，如何实现大豆蛋白肽的安全富硒是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提供了一株乳酸乳球菌pz1及其在制备富硒低聚肽中的应用。

2、为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、一株乳酸乳球菌pz1，所述乳酸乳球菌pz1的保藏编号为cctccno：m2022398。该菌株分类命名为lactococcuslactis，于2022年04月08日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为武汉市武昌珞珈山武汉大学，邮编：430072。

4、本发明乳酸乳球菌pz1，包含了多种肽酶、蛋白酶，酶活高，可以快速的分解大豆分离蛋白，并对硒具有很好的耐受和转化能力，可用于高效生产健康、安全、高效的富硒大豆低聚肽功能产品。

5、本发明的又一目的是，提供一种工程菌株，以上述乳酸乳球菌pz1为初发菌株构建而得。

6、本发明的又一目的是，提供一种微生物菌剂，包含上述乳酸乳球菌pz1和/或上述工程菌株。

7、本发明的又一目的是，提供上述乳酸乳球菌pz1或上述工程菌株或上述微生物菌剂在制备富硒低聚肽中的应用。

8、本发明的又一目的是，提供一种制备富硒低聚肽的方法，以大豆分离蛋白和无机硒为原料，利用上述乳酸乳球菌pz1或上述工程菌株或上述微生物菌剂发酵培养，所得发酵液冷冻、解冻后超声破壁，离心取上清液，进一步超滤收集300～1000da的组分，得富硒低聚肽。

9、本发明方法以无机硒和大豆蛋白为原料，通过微生物发酵同时实现对硒元素的生物富集和大豆蛋白的酶解，进行生物转化，一步法生产富硒低聚肽。制备的富硒低聚肽，具有生产周期短、无污染、富硒量高等优点。富硒低聚肽既有补硒的功效，也发挥了低聚肽的生理功能，具有很好的抗氧化性作用，是理想的补硒产品。

10、作为优选的技术方案，所述大豆分离蛋白的初始浓度为2～5％，所述无机硒的初始浓度为10～30mg/l。。

11、作为优选的技术方案，所述发酵培养的温度为32～35℃，时间为36～48h。

12、作为优选的技术方案，所述离心10000r/min，10min。

13、作为优选的技术方案，还包括将所述发酵液在离心前进行冷冻-解冻-超声破壁步骤；所述冷冻温度为-18～-20℃，时间12-24h，所述解冻为室温解冻，所述超声破壁超声功率为800w，超声时间15min。

14、本发明的又一目的是，提供一种富硒低聚肽，由上述方法制备而得。

15、本发明富硒低聚肽既有补硒的功效，也发挥了低聚肽的生理功能，具有很好的抗氧化性作用，是理想的补硒产品。

16、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一株乳酸乳球菌pz1，利用该菌株发酵大豆分离蛋白和无机硒，可以同时实现对硒元素的生物富集和大豆蛋白的酶解；且制备所得富硒低聚肽既有补硒的功效，也发挥了低聚肽的生理功能，具有很好的抗氧化性作用，是理想的补硒产品。

技术特征：

1.一株乳酸乳球菌pz1，其特征在于，所述乳酸乳球菌pz1的保藏编号为cctccno：m2022398。

2.一种工程菌株，其特征在于，以权利要求1所述乳酸乳球菌pz1为初发菌株构建而得。

3.一种微生物菌剂，其特征在于，包含权利要求1所述乳酸乳球菌pz1和/或权利要求2所述工程菌株。

4.权利要求1所述乳酸乳球菌pz1或权利要求2所述工程菌株或权利要求3所述微生物菌剂在制备富硒低聚肽中的应用。

5.一种制备富硒低聚肽的方法，其特征在于，以大豆分离蛋白和无机硒为原料，利用权利要求1所述乳酸乳球菌pz1或权利要求2所述工程菌株或权利要求3所述微生物菌剂发酵培养，所得发酵液离心取上清液，进一步超滤收集300～1000da的组分，得富硒低聚肽。

6.根据权利要求5所述的制备富硒低聚肽的方法，其特征在于，所述大豆分离蛋白初始浓度为2～5％，所述无机硒初始浓度为10～30mg/l。

7.根据权利要求5所述的制备富硒低聚肽的方法，其特征在于，所述发酵培养的温度为32～35℃，时间为36～48h。

8.根据权利要求5所述的制备富硒低聚肽的方法，其特征在于，所述离心10000r/min，10min。

9.根据权利要求5-8任一所述的制备富硒低聚肽的方法，其特征在于，还包括将所述发酵液在离心前进行冷冻-解冻-超声破壁步骤；

10.一种富硒低聚肽，其特征在于，由权利要求5-9任一所述方法制备而得。

技术总结
本发明公开了一株乳酸乳球菌PZ1及其在制备富硒低聚肽中的应用，涉及微生物技术领域，所述乳酸乳球菌PZ1的保藏编号为CCTCCNO：M2022398。本发明以无机硒和大豆蛋白为原料，利用该菌株，通过微生物发酵同时实现对硒元素的生物富集和大豆蛋白的酶解，进行生物转化，一步法生产富硒低聚肽。制备的富硒低聚肽，具有生产周期短、无污染、富硒量高等优点。富硒低聚肽既有补硒的功效，也发挥了低聚肽的生理功能，具有很好的抗氧化性作用，是理想的补硒产品。

技术研发人员：卢美欢,仝泽方,马英辉,李利军
受保护的技术使用者：陕西省微生物研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13