构建鼠类皮肤类器官的方法与流程

本发明涉及类器官，具体涉及一种构建鼠类皮肤类器官的方法。

背景技术：

1、类器官属于三维(3d)细胞培养物，与对应的人体器官具有高度相似的组织学特征，能重现器官的部分生理功能。这些3d系统可复制出已分化组织的复杂空间形态，并能够表现出细胞与细胞、细胞与基质之间的相互作用。类器官去除了动物模型可能引入的混淆变量，但与均一化的2d细胞培养物相比，则提供更高度的复杂性。通过结合高水平的生理相关性与体外操作的便宜性，在许多情况下，类器官具有辅助或替代体外使用原代细胞或永生化细胞系和动物实验的潜力。另外，类器官在培养中具有高度基因稳定性，维持了来源组织的基因型与表型。因此，类器官在干细胞与发育、再生医学、疾病研究、药物开发和精准医疗等多个领域拥有广泛的应用前景。

2、皮肤是人体最大的器官，皮肤病的种类不但繁多，而且引起皮肤病的原因很多，而且许多内脏疾病在皮肤上也有相应的表征体现，因此动物模型在皮肤病的研究上由于其混淆变量较多而难以提供较为准确的结论。而且，许多皮肤病，比如感染因素引起的皮肤病，如麻风、疥疮、真菌病、皮肤细菌感染等常常有一定的传染性，不但影响身体健康，而且引起恐慌与社会歧视。目前已有研究人员采用人体皮肤组织(例如病人自身提供的皮肤组织等)进行类器官培养，并进行针对性的治疗方案研究和药物研发等工作。但是，人源样本的获取途径较少，其使用也存在许多伦理学方面的限制，因此，对动物源的皮肤类器官开发对于研究工作的开展能够提供更多的便利性。然而，目前暂未有任何关于动物皮肤类器官构建的方法报道。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了克服现有技术存在的人类皮肤类器官构建过程中样本来源少，且使用过程中受到伦理约束多，限制了研究工作的开展等问题，提供一种构建鼠类皮肤类器官的方法，该方法能够实现鼠类皮肤类器官的高效构建、传代和扩增。

2、为了实现上述目的，本发明一方面提供一种构建鼠类皮肤类器官的方法，所述方法包括将鼠类皮肤原代细胞置于鼠类皮肤类器官培养液中进行类器官培养，其中，所述鼠类皮肤类器官培养液中含有烟酰胺、地塞米松和y27632。

3、本发明第二方面提供第一方面所述的方法中采用的鼠类皮肤类器官培养液。

4、通过上述技术方案，本发明至少能够取得如下有益效果：

5、(1)本发明提供的方法采用鼠类皮肤组织(或其原代细胞)为原料，来源广泛，也避免了人源实验材料带来的伦理问题限制。而且能够根据不同的研究需要选择特定的鼠类皮肤进行皮肤类器官制备，具有产品适用性广的优点。

6、(2)本发明提供的方法制备鼠类皮肤类器官的流程简单，快速，高效，能够有效提高实验效率。而且，本发明提供的方法中，鼠类皮肤类器官的构建、传代和扩增均采用同一种培养液，降低了目前大多数类器官培养方法中因不同阶段使用不同培养液造成实验失误的可能性。

7、(3)本发明提供的方法用于鼠类皮肤类器官制备时具有较高的成功率。

技术特征：

1.一种构建鼠类皮肤类器官的方法，其特征在于，所述方法包括将鼠类皮肤原代细胞置于鼠类皮肤类器官培养液中进行类器官培养，其中，所述鼠类皮肤类器官培养液中含有烟酰胺、地塞米松和y-27632。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述鼠类皮肤类器官培养液的成分包括基础培养基和添加剂，优选所述基础培养基为advanced dmem/f12培养基；

3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述鼠类皮肤类器官培养液中，添加剂的用量使得：

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法还包括制备鼠类皮肤原代细胞的步骤；该步骤优选包括采用消化液a将鼠类皮肤组织碎片进行消化；

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述消化液a包括胶原酶iv、胶原酶nb4和脱氧核糖核酸酶i；

6.根据权利要求4所述的方法，其中，所述消化的条件包括：消化液a与鼠类皮肤组织碎片的体积比为5-15∶1，消化温度35-38℃，消化时间40-80min，优选在100-200rpm的震荡条件下进行消化；

7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述类器官培养的方式包括：将鼠类皮肤原代细胞采用基质胶包被后，置于鼠类皮肤类器官培养液中进行培养；

8.根据权利要求7所述的方法，其中，采用基质胶包被鼠类皮肤原代细胞的方式包括：将在冰上冷却过的鼠类皮肤原代细胞悬液与基质胶混合，并将获得的混悬液加入培养容器中，在36-38℃条件下使混悬液凝固；

9.根据权利要求1-8中任意一项所述的方法，其中，所述方法还包括对鼠类皮肤类器官的传代，优选所述传代依次包括类器官收集、类器官消化、类器官传代后继续培养的步骤；

10.权利要求1-9中任意一项所述的方法中采用的鼠类皮肤类器官培养液。

技术总结
本发明涉及类器官技术领域领域，公开了一种构建鼠类皮肤类器官的方法。所述方法包括将鼠类皮肤原代细胞置于鼠类皮肤类器官培养液中进行类器官培养，其中，所述鼠类皮肤类器官培养液中含有烟酰胺、地塞米松和Y‑27632。该方法能够实现鼠类皮肤类器官的高效构建、传代和扩增。而且，通过采用本发明优选的培养基，在鼠类皮肤类器官构建、扩增和传代过程中均可采用同一种培养基，极大简化了实验流程，大幅降低了因不同阶段需使用不同培养基导致实验失误的可能性。

技术研发人员：郑乐民,何萌萌,郭志英,宫晓艳,张乾,王承志
受保护的技术使用者：郑乐民
技术研发日：
技术公布日：2024/1/11