本申请涉及生物检测，特别是涉及一种核酸质谱仪器性能检测校准品、制备方法、校准方法及其应用。
背景技术：
1、在生物检测技术领域中，质谱分析通常先通过各种方法使样品离子化，例如通过基质辅助激光解吸电离方式使样品离子化。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱，即maldi-tof ms，由基质辅助激光解吸电离与飞行时间离子分离技术组成，首先将处于液体溶液体系中分析物分子与有机酸类物质(基质)在基因芯片上形成共结晶体，将包含基质和分析物的基因芯片放到质谱仪的离子源中，通过短激光脉冲使基质气化，从而将分析物分子以非破碎态传输到气相中，分析物分子通过与同时产生的基质离子碰撞并反应而离子化，施加电压，加快离子进入无场飞行管中。由于离子的质量不同，离子源中的离子得到不同的速度的加速，较小的离子比较大的离子更早的到达检测器，最后将不同的飞行时间转换为不同的离子质量，从而实现不同分析物的质谱分离。
2、在核酸质谱检测体系中，由于检测结果是直接依据分子量来判定，需要对仪器进行调试校准，保证仪器稳定准确，从而能在snp基因分型检测和甲基化定量检测等领域精准应用。核酸质谱仪器在组装过程中，由于核酸质谱仪器硬件精度、软件算法、样本处理等各种因素会导致检测目标物质的质量存在偏差，因此需要校准品对核酸质谱仪器的检测质量进行校准。
3、传统技术中，核酸质谱应用中存在4000da-10000da质量范围内对核酸质谱仪器校准的标准品，用于基因分型检测领域，但是传统技术中心的标准品难以应用于更宽质量范围且能够同时应用于基因甲基化定量分析。
技术实现思路
1、基于此，有必要提供一种核酸质谱仪器性能检测校准品。本发明的核酸质谱仪器性能检测校准品能够对核酸质谱进行校准，保证在核酸质谱仪器的检测质量在预设范围内，提高检测结果的准确性和特异性，提高仪器稳定性以及可靠性，保证了核酸质谱仪器在基因分型和甲基化定量中结果的可靠、准确。
2、本申请一实施例提供了一种核酸质谱仪器性能检测校准品。
3、一种核酸质谱仪器性能检测校准品，包括多条寡核苷酸以及多条甲基化寡核苷酸，至少一条所述寡核苷酸为单磷酸脱氧核糖核苷酸。
4、在其中一些实施例中，所述寡核苷酸的分子量为2000da-10000da，所述甲基化寡核苷酸的分子量为4000da-10000da。
5、在其中一些实施例中，多条所述寡核苷酸的分子量由低至高排列时，相邻的两条所述寡核苷酸的分子量的差异不大于1000da。
6、在其中一些实施例中，所述寡核苷酸的基因组序列如seq id no.1、seq idno.2、seq id no.3、seq id no.4、seq id no.5、seq id no.6、seq id no.7、seq id no.8、seqid no.9所示。
7、在其中一些实施例中，所述甲基化寡核苷酸的基因组序列如seq id no.10、seqid no.11、seq id no.12、seq id no.13、seq id no.14、seq id no.15所示。
8、在其中一些实施例中，多条所述甲基化寡核苷酸中两两构成一组作为引物对；
9、所述甲基化寡核苷酸的终浓度为0.25-1μm。
10、在其中一些实施例中，所述寡核苷酸的终浓度为0.5-15μm。
11、本申请一实施例还提供了一种所述核酸质谱仪器性能检测校准品的制备方法。
12、一种所述核酸质谱仪器性能检测校准品的制备方法，包括如下步骤：
13、(1)获得多条寡核苷酸以及多条甲基化寡核苷酸；
14、(2)将多条所述寡核苷酸以及多条所述甲基化寡核苷酸的序列信息分别导入合成仪，进行对应的序列合成，对多条合成序列分别进行分离、回收、纯化和沉淀，得到多份引物干粉；
15、(3)对各个所述引物干粉分别加预定量的水进行稀释，计算各个寡核苷酸片段的浓度以及各个甲基化寡核苷酸片段的浓度；
16、(4)将不同浓度的寡核苷酸序列按照预定体积比例混合，得到核酸质谱仪器性能检测校准品，该校准品可应用于基因snp分型检验；
17、将不同浓度的甲基化寡核苷酸序列分成多组引物对，每组引物对按照预定体积比例混合，得到核酸质谱仪器性能检测校准品，该校准品可应用于基因甲基化定量检验。
18、在其中一些实施例中，步骤(2)中合成的寡核苷酸纯化方式为hplc纯化、c18脱盐纯化、rpc纯化、epage纯化或者sds-page纯化。
19、在其中一些实施例中，步骤(2)中分离方式采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。
20、本申请一实施例还提供了一种核酸质谱仪器性能检测校准品。
21、一种核酸质谱仪器性能检测校准品采用所述制备方法制备得到。
22、本申请一实施例还提供了一种核酸质谱仪器性能检测校准品的应用。
23、所述核酸质谱仪器性能检测校准品的应用于包含进行基因snp分型检验和甲基化定量检验。
24、本申请一实施例还提供了一种检测核酸质谱仪器性能的校准方法。
25、一种检测核酸质谱仪器性能的校准方法，包括如下步骤：
26、(1)将权利要求11所述的核酸质谱仪器性能检测校准品转移至含有预制基质的芯片靶板上；
27、(2)室温下完全干燥核酸质谱仪器性能检测校准品，使用maldi-tof质谱仪器检测，校准仪器质量偏差，生成质谱峰图谱；
28、(3)根据所述质谱峰图谱，对核酸质谱进行校准。
29、在其中一些实施例中，检测核酸质谱仪器性能的校准方法中，步骤(3)中，根据多条所述寡核苷酸的标准品检测的所述质谱峰图谱，对核酸质谱进行校准后，用于基因snp分型检验；
30、根据多条所述甲基化寡核苷酸的标准品检测的所述质谱峰图谱，对核酸质谱进行校准后，用于基因甲基化定量检验。
31、上述核酸质谱仪器性能检测校准品，可以对核酸质谱仪器进行校准，实现通过在2000da-10000da质量范围内对低浓度寡核苷酸序列和高浓度寡核苷酸序列的测定，来模拟核酸质谱仪器对不同浓度样本的响应，保证核酸质谱仪器检测的准确和可靠，同时根据已知的不同浓度序列模拟不同甲基化程度的真实样本来对核酸质谱仪器进行校准，实现基因snp分型和甲基化定量领域的应用。
1.一种核酸质谱仪器性能检测校准品，其特征在于，包括多条寡核苷酸以及多条甲基化寡核苷酸，至少一条所述寡核苷酸为单磷酸脱氧核糖核苷酸。
2.根据权利要求1所述的核酸质谱仪器性能检测校准品，其特征在于，所述寡核苷酸的分子量为2000da-10000da，所述甲基化寡核苷酸的分子量为4000da-10000da。
3.根据权利要求2所述的核酸质谱仪器性能检测校准品，其特征在于，多条所述寡核苷酸的分子量由低至高排列时，相邻的两条所述寡核苷酸的分子量的差异不大于1000da。
4.根据权利要求1所述的核酸质谱仪器性能检测校准品，其特征在于，所述寡核苷酸的基因组序列如seq id no.1、seq id no.2、seq id no.3、seq idno.4、seq id no.5、seq idno.6、seq id no.7、seq id no.8、seq id no.9所示。
5.根据权利要求1所述的核酸质谱仪器性能检测校准品，其特征在于，所述甲基化寡核苷酸的基因组序列如seq id no.10、seq id no.11、seq idno.12、seq id no.13、seq idno.14、seq id no.15所示。
6.根据权利要求5所述的核酸质谱仪器性能检测校准品，其特征在于，
7.根据权利要求1-6任意一项所述的核酸质谱仪器性能检测校准品，其特征在于，所述寡核苷酸的终浓度为0.5-15μm。
8.一种权利要求1-7任意一项所述的核酸质谱仪器性能检测校准品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
9.根据权利要求8所述的核酸质谱仪器性能检测校准品的制备方法，其特征在于，步骤(2)中合成的寡核苷酸纯化方式为hplc纯化、c18脱盐纯化、rpc纯化、epage纯化或者sds-page纯化。
10.根据权利要求8所述的核酸质谱仪器性能检测校准品的制备方法，其特征在于，步骤(2)中分离方式采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。
11.一种核酸质谱仪器性能检测校准品，其特征在于，所述核酸质谱仪器性能检测校准品采用权利要求8-10任意一项所述的制备方法制备得到。
12.一种权利要求11所述的核酸质谱仪器性能检测校准品的应用，其特征在于，所述核酸质谱仪器性能检测校准品应用于包含进行基因snp分型检验和甲基化定量检验。
13.一种检测核酸质谱仪器性能的校准方法，其特征在于，包括如下步骤：
14.根据权利要求13所述的检测核酸质谱仪器性能的校准方法，其特征在于，步骤(3)中，根据多条所述寡核苷酸的标准品检测的所述质谱峰图谱，对核酸质谱进行校准后，用于基因snp分型检验；