一种RT-PCR预混液的制作方法

本发明涉及生物，具体地涉及一种rt-pcr预混液。

背景技术：

1、随着pcr技术的快速发展，市场上出现了各种体外诊断用的pcr试剂盒。为了方便操作，可以将taq酶加入pcr试剂中，组成pcr预混液。pcr预混液通常包括dntp、taq酶和缓冲液等必要成分。现有的pcr预混液在常温下仅能在5-6小时内进行有效扩增，超过6小时的常温放置之后，灵敏度、特异性等性能会变得很差。

2、反转录pcr(rt-pcr)以rna为模板进行扩增，在基因表达水平的检测、rna病毒含量检测以及直接克隆特定基因cdna等方面有着广泛的应用。反转录pcr分为两个步骤，首先在反转录酶的作用下将rna反转录为单链的cdna，然后在dna聚合酶的作用下将单链cdna扩增为双链的dna分子。当反转录酶和dna聚合酶在一管中进行反应时会相互干扰，引起rt-pcr灵敏度的降低。

3、一些rt-pcr试剂往往会添加bsa、明胶、甘油、多聚糖等添加剂可以提高反应体系的稳定性，例如专利cn114480589a公开了一种pcr反应体系稳定剂及其应用，通过添加蔗糖、海藻糖、聚乙烯亚胺、二硫苏糖醇和二甲基亚砜制备的pcr预混液可以使其在室温条件下存放至少6个月，然而该专利提到的pcr反应体系只含有dna聚合酶，不包含逆转录酶，逆转录酶对温度等条件较为敏感，这些物质的添加不一定能保证逆转录酶也能在室温下稳定存放。

4、因此，希望有一种rt-pcr预混试剂，可以室温或者更高温度下稳定放置更长的时间，既能够延长试剂的存储，操作更加方便，又能减少因试剂在-20℃和常温下频繁转换，反复冻融带来的性能损失。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种保存时间长、灵敏度优异且特异性强的rt-pcr预混液。

2、本发明的第一方面，提供了一种rt-pcr预混液，包含如下组分：

3、

4、其中，重量比按所述预混液的总重量计。

5、在另一优选例中，所述反转录酶为mmlv逆转录酶。

6、在另一优选例中，所述dna聚合酶为热启动taq dna聚合酶。

7、在另一优选例中，所述rt-pcr预混液的ph为7.5-10。

8、在另一优选例中，所述rt-pcr预混液的ph为8.1-9.2。

9、在另一优选例中，包含如下组分：

10、

11、其中，重量比按所述预混液的总重量计。

12、在另一优选例中，包含如下组分：

13、

14、其中，重量比按所述预混液的总重量计。

15、在另一优选例中，醋酸锰和乙腈的摩尔比为200-8000。

16、在另一优选例中，醋酸锰和乙腈的摩尔比为200-1000。

17、本发明的第二方面，提供了一种本发明第一方面所述rt-pcr预混液的用途，用于制备核酸检测试剂盒。

18、应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

1.一种rt-pcr预混液，其特征在于，包含如下组分：

2.如权利要求1所述rt-pcr预混液，其特征在于，所述反转录酶为mmlv逆转录酶。

3.如权利要求1所述rt-pcr预混液，其特征在于，所述dna聚合酶为热启动taq dna聚合酶。

4.如权利要求1所述rt-pcr预混液，其特征在于，所述rt-pcr预混液的ph为7.5-10。

5.如权利要求1所述rt-pcr预混液，其特征在于，所述rt-pcr预混液的ph为8.1-9.2。

6.如权利要求1所述rt-pcr预混液，其特征在于，包含如下组分：

7.如权利要求1所述rt-pcr预混液，其特征在于，包含如下组分：

8.如权利要求1所述rt-pcr预混液，其特征在于，醋酸锰和乙腈的摩尔比为200-8000。

9.如权利要求1所述rt-pcr预混液，其特征在于，醋酸锰和乙腈的摩尔比为200-1000。

10.一种权利要求1所述rt-pcr预混液的用途，其特征在于，用于制备核酸检测试剂盒。