武装的塞尼卡谷病毒溶瘤性治疗组合物及其方法与流程

所公开的发明涉及用于治疗癌症的组合物和方法。更具体地，所公开的发明涉及在对象中使用溶瘤病毒特别是塞尼卡谷病毒(seneca valley virus)治疗癌症的领域，所述病毒已被改造成编码有助于治疗癌症的治疗剂。

背景技术：

1、癌症是美国第二大常见死亡原因。每四个人中就有一个人死于癌症，并且每年有超过一百万的新癌症诊断。该疾病始于异常的经转化细胞的不受控制的增殖和生长。然而，该定义并不仅限于对一种疾病的描述，而是对数百种不同疾病的描述。没有两种癌症是相同的，其也不是克隆性(clonal)的。在细胞转化期间驱动和带来的突变可能相似，但它们绝不相同。这个难题提高了患者发展的病理状况的复杂性和异质性。当前的癌症治疗，包括化学治疗和放射治疗，当与创造和增强抗肿瘤微环境的免疫调节剂结合时是最有效的。许多恶性肿瘤可能对通过这些传统方法进行的治疗有抗性。

2、溶瘤病毒显示出作为抗癌剂的巨大潜力。小rna病毒塞尼卡谷病毒(senecavalley virus，svv)是单链(+)rna病毒，其已作为溶瘤治疗进行了研究。已经表明，svv可靶向许多难治性恶性肿瘤并促进其消退，所述难治性恶性肿瘤包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌以及儿童实体瘤。通常，这些溶瘤病毒与另一种用于治疗癌症的化合物联合使用。这样的组合治疗可需要通过不同的途径施用不同的化合物。

3、因此，为了治疗癌症，需要一种改进的使用溶瘤病毒(特别是svv)与另一种药剂组合的治疗方法。

技术实现思路

1、本文提供了武装的(armed)塞尼卡谷病毒，其已被遗传改造成表达用于治疗癌症的药剂。在某些实施方案中，药剂是抗pd-1抗体的结合片段、cxcl9、tgfβ受体诱饵、il-2突变体或硝基还原酶。在某些实施方案中，本公开内容提供了武装的塞尼卡谷病毒，其包含塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段和编码治疗性目的蛋白质的核酸，所述治疗性蛋白质例如白介素、趋化因子，或者充当检查点抑制剂的纳米抗体。在某些实施方案中，武装的塞尼卡谷病毒包含塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段，所述塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段中已插入编码治疗性目的蛋白质的核酸。

2、武装的塞尼卡谷病毒可包含塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段的序列，所述塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段的序列中已插入与seq id no：1、3、5、7、9、11、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49或51的核酸具有至少85％、95％、99％或100％同一性的核酸。或者，武装的塞尼卡谷病毒包含塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段的序列，所述塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段的序列中已插入编码与seq id no：2、4、6、8、10、12、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50或52的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的蛋白质的核酸。

3、或者，武装的塞尼卡谷病毒包含与以下具有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列：seq id no：13的核苷酸第1至7762位；seq id no：14的核苷酸第1至7783位；seq id no：15的核苷酸第1至7759位；seq id no：16的核苷酸第1至7984位；seq id no：17的核苷酸第1至8140位；或seq id no：18的核苷酸第1至7738位。

4、本公开内容还提供了包含武装的塞尼卡谷病毒的载体例如质粒。在某些实施方案中，质粒包含seq id no：13至18或53至64或者其片段。

5、本文还提供了使用武装的塞尼卡谷病毒来治疗癌症的改进的方法、组合物、药盒和药物组合物，所述武装的塞尼卡谷病毒已被遗传改造成表达用于治疗癌症的药剂。

6、特别地，所述癌症包括三阴性乳腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、非小细胞鳞状细胞癌、腺癌、胶质母细胞瘤、皮肤癌、肝细胞癌、结肠癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、神经内分泌癌、胰腺癌、甲状腺癌、肾癌、骨癌、食管癌或软组织癌。癌症也可以是神经母细胞瘤、黑素瘤、神经内分泌癌或小细胞肺癌(small cell lung cancer，sclc)肿瘤。

7、本发明的一个实施方案是在有需要的对象中治疗癌症的方法，所述方法包括向对象施用有效量的武装的塞尼卡谷病毒，其中所述病毒已被遗传改造成表达用于治疗癌症的药剂。

8、本发明的另一个实施方案是提高溶瘤性癌症病毒治疗成功率的方法，所述方法包括施用有效量的武装的塞尼卡谷病毒，其中所述病毒已被遗传改造成表达用于治疗癌症的药剂。

9、本文还提供了用于在对象中治疗癌症的药物组合物，所述药物组合物包含武装的svv以及可药用载体，其中所述武装的svv已被遗传改造成表达用于治疗癌症的药剂。

10、本文还提供了用于在对象中治疗癌症的药盒，所述药盒包含武装的塞尼卡谷病毒，其中所述武装的svv已被改变以表达用于治疗癌症的药剂。

11、另外，本文提供了武装的塞尼卡谷病毒(svv)用于制备用于治疗癌症的药物，其中所述武装的svv编码用于治疗癌症的药剂。

12、本发明的另一个实施方案是武装的svv。又一个实施方案是产生武装的svv的方法。所述武装的svv已被改变以携带编码用于治疗癌症的药剂的核酸。

13、本发明的其他特征和优点将从以下详细说明和实施例中变得明显。

技术特征：

1.武装的塞尼卡谷病毒，其中所述武装的塞尼卡谷病毒包含塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段以及编码治疗性目的蛋白质的核酸。

2.权利要求1所述的武装的塞尼卡谷病毒，其中所述目的蛋白质包含白介素、趋化因子，或者充当检查点抑制剂的纳米抗体。

3.权利要求2所述的武装的塞尼卡谷病毒，其中所述治疗性目的蛋白质包含抗pd-l1纳米抗体、il-2或其突变体、cxcl9、il-15、il-2/il-15(neoleukin 2-15)、tgf-β诱饵或其突变体、nfsa或其突变体、抗ctla4纳米抗体、抗cd3纳米抗体、抗ctla-4+抗pdli-1纳米抗体、抗clta4+抗pld-1纳米抗体，或胞嘧啶脱氨酶。

4.权利要求3所述的武装的塞尼卡谷病毒，其中所述治疗性目的蛋白质包含il-2、cxcl-9或il-2/il-15。

5.权利要求1所述的武装的塞尼卡谷病毒，其中所述武装的塞尼卡谷病毒包含塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段，所述塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段中已插入所述编码治疗性目的蛋白质的核酸。

6.权利要求5所述的武装的塞尼卡谷病毒，其中所述武装的塞尼卡谷病毒包含塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段的序列，所述塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段的序列中已插入seq id no：1、3、5、7、9、11、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49或51的核酸序列的核酸。

7.权利要求5所述的武装的塞尼卡谷病毒，其中所述武装的塞尼卡谷病毒包含塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段的序列，所述塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段的序列中已插入编码seq idno：2、4、6、8、10、12、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50或52的氨基酸序列的核酸。

8.权利要求5所述的武装的塞尼卡谷病毒，其中所述武装的塞尼卡谷病毒包含塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段的序列，所述塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段的序列中已插入编码与seqid no：2、4、6、8、10、12、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50或52的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％或99％同一性的蛋白质的核酸。

9.权利要求5所述的武装的塞尼卡谷病毒，其中所述武装的塞尼卡谷病毒包含塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段的序列，所述塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段的序列中已插入seq id no：13的核苷酸第3508至3885位、seq id no：14的核苷酸第3505至3906位、seq id no：15的核苷酸第3508至3882位、seq id no：15的核苷酸第3508至4107位、seq id no：16的核苷酸第3508至4107位、seq id no：17的核苷酸第3508至4263位或seq id no：18的核苷酸第3508至3861位。

10.权利要求5所述的武装的塞尼卡谷病毒，其中所述武装的塞尼卡谷病毒包含塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段的序列，所述塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段的序列中已插入seq id no：13的核苷酸第3508至3885位、seq id no：14的核苷酸第3505至3906位、seq id no：15的核苷酸第3508至3882位、seq id no：15的核苷酸第3508至4107位、seq id no：16的核苷酸第3508至4107位、seq id no：17的核苷酸第3508至4263位或seq id no：18的核苷酸第3508至3861位。

11.权利要求5所述的武装的塞尼卡谷病毒，其中所述武装的塞尼卡谷病毒包含：

12.权利要求5所述的武装的塞尼卡谷病毒，其中所述武装的塞尼卡谷病毒是通过将编码治疗性蛋白质的核酸序列插入到塞尼卡谷病毒的基因组中蛋白2a与2b的编码序列之间而产生的，其中编码所述治疗性蛋白质的核酸包含：

13.权利要求1所述的武装的塞尼卡谷病毒，其中所述塞尼卡谷病毒是svv-001。

14.权利要求13所述的武装的塞尼卡谷病毒，其中所述武装的塞尼卡谷病毒包含：

15.武装的塞尼卡谷病毒，其中所述武装的塞尼卡谷病毒包含塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段的序列，所述塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段的序列中已插入与seq id no：19的核苷酸第1至7891位具有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核酸。

16.权利要求1至10中任一项所述的武装的塞尼卡谷病毒，其中所述武装的塞尼卡谷病毒是溶瘤性的，并且其中所述武装的塞尼卡谷病毒表达能够治疗癌症的治疗剂或其功能片段。

17.载体，其包含权利要求1至10中任一项所述的武装的塞尼卡谷病毒。

18.质粒，其包含权利要求1至10中任一项所述的武装的塞尼卡谷病毒。

19.权利要求18所述的质粒，其中所述质粒包含seq id no：13至18或53至64的核酸序列。

20.权利要求18所述的质粒，其中所述质粒包含与seq id no：13至18或53至64的核酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性的核酸。

21.权利要求18所述的质粒，其中所述质粒包含与seq id no：13至18或53至64的任一核酸序列中的核苷酸677至8050位具有至少85％或至少90％同一性的核酸。

22.产生武装的塞尼卡谷病毒的方法，其包括将编码治疗性目的蛋白质的核酸插入到塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段中。

23.权利要求22所述的方法，其中所述目的蛋白质包含白介素、趋化因子，或者充当检查点抑制剂的纳米抗体。

24.权利要求23所述的方法，其中所述治疗性目的蛋白质包含抗pd-l1纳米抗体、il-2、cxcl9、il-15、il-2/il-15、tgf-β诱饵、nfsa。

25.权利要求24所述的方法，其中所述治疗性目的蛋白质包含il-2、cxcl-9或il-2/il-15。

26.权利要求22所述的方法，其中所述方法包括：

27.权利要求22所述的方法，其中所述方法包括：

28.权利要求27所述的方法，其还包括构建包含所述塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段和所述编码治疗性目的蛋白质的核酸的质粒。

29.权利要求28的方法，其还包括产生经线性化的武装的svv质粒。

30.权利要求22所述的方法，其中所述核酸被插入到塞尼卡谷病毒的基因组中蛋白2a与2b的编码序列之间。

31.权利要求22所述的方法，其中所述塞尼卡谷病毒是svv-001。

32.权利要求22所述的方法，其中所述武装的塞尼卡谷病毒是溶瘤性的，并且其中所述武装的塞尼卡谷病毒表达能够治疗癌症的治疗剂或其功能片段。

33.权利要求22至32中任一项所述的方法，其中所述方法包括将seq id no：1、3、5、7、9、11、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49或51的核酸或者编码seq id no：2、4、6、8、10、12、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50或52的氨基酸序列的核酸插入到塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段中。

34.权利要求22至32中任一项所述的方法，其中所述方法包括将核酸插入到塞尼卡谷病毒或其溶瘤片段中，其中所述核酸与以下具有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性：seq id no：13的核苷酸第1至7762位；seq id no：14的核苷酸第1至7783位；seq id no：15的核苷酸第1至7759位；seq id no：16的核苷酸第1至7984位；seq id no：17的核苷酸第1至8140位；或seq id no：18的核苷酸第1至7738位。

35.在有此需要的对象中治疗癌症的方法，其包括向所述对象施用有效量的权利要求1至10中任一项所述的武装的塞尼卡谷病毒。

36.权利要求35所述的方法，其中向所述对象施用至少一种选自以下的抗癌治疗剂：检查点抑制剂、pd-1抑制剂、pd-l1抑制剂、ctla-4抑制剂、细胞因子、生长因子、光敏剂、毒素、sirna分子、信号传导调节剂、抗癌抗生素、抗癌抗体、血管生成抑制剂、化学治疗化合物、抗转移化合物、免疫治疗化合物、car治疗、基于树突细胞的治疗、癌症疫苗、溶瘤病毒、ifn-i抑制剂、经改造的抗癌病毒或病毒衍生物、及其任意组合。

37.权利要求35所述的方法，其中所述至少一种抗癌治疗剂在施用所述武装的塞尼卡谷病毒之前、与其同时或在其之后施用。

38.权利要求35所述的方法，其中还向所述对象施用选自以下的至少一种另外的ifn-i抑制剂：hdac抑制剂、jak/stat抑制剂、ifn抑制剂、ifn抗体、ifn-α受体1抗体、ifn-α受体2抗体和病毒肽、及其任意组合。

39.权利要求35所述的方法，其中所述hdac抑制剂是曲古抑菌素a。

40.权利要求35所述的方法，其中所述jak/stat抑制剂是星形孢菌素。

41.权利要求35所述的方法，其中所述癌症包括三阴性乳腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、非小细胞鳞状细胞癌、腺癌、胶质母细胞瘤、皮肤癌、肝细胞癌、结肠癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、神经内分泌癌、胰腺癌、甲状腺癌、肾癌、骨癌、食管癌或软组织癌。

42.权利要求35所述的方法，其中与使用未经武装的塞尼卡谷病毒的治疗相比，癌症治疗的成功率提高。

43.药物组合物，其用于在有此需要的对象中治疗癌症，所述药物组合物包含权利要求1至10中任一项所述的武装的塞尼卡谷病毒以及可药用载体。

44.权利要求43所述的药物组合物，其中所述组合物还包含检查点抑制剂、pd-1抑制剂、pd-l1抑制剂、ctla-4抑制剂、细胞因子、生长因子、光敏剂、毒素、sirna分子、信号传导调节剂、抗癌抗生素、抗癌抗体、血管生成抑制剂、化学治疗化合物、抗转移化合物、免疫治疗化合物、car治疗、基于树突细胞的治疗、癌症疫苗、溶瘤病毒、ifn-i抑制剂、经改造的抗癌病毒或病毒衍生物、及其任意组合。

45.权利要求43所述的药物组合物，其中所述癌症包括三阴性乳腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、非小细胞鳞状细胞癌、腺癌、胶质母细胞瘤、皮肤癌、肝细胞癌、结肠癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、神经内分泌癌、胰腺癌、甲状腺癌、肾癌、骨癌、食管癌或软组织癌。

46.权利要求1至10中任一项所述的武装的塞尼卡谷病毒，其用于制备用于治疗癌症的药物。

47.权利要求46所述的用途，其中所述癌症包括三阴性乳腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、非小细胞鳞状细胞癌、腺癌、胶质母细胞瘤、皮肤癌、肝细胞癌、结肠癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、神经内分泌癌、胰腺癌、甲状腺癌、肾癌、骨癌、食管癌或软组织癌。

48.权利要求1至10中任一项所述的武装的塞尼卡谷病毒用于治疗癌症的用途。

49.权利要求48所述的用途，其中所述癌症包括三阴性乳腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、非小细胞鳞状细胞癌、腺癌、胶质母细胞瘤、皮肤癌、肝细胞癌、结肠癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、神经内分泌癌、胰腺癌、甲状腺癌、肾癌、骨癌、食管癌或软组织癌。

50.武装的塞尼卡谷病毒，其包含seq id no：19的核苷酸第1至7891位。

51.武装的塞尼卡谷病毒，其是通过将核酸序列插入到塞尼卡谷病毒的基因组中蛋白2a与2b的编码序列之间而产生的，其中所述核酸序列包含：seq id no：19的核苷酸第3508至4014位；或与seq id no：19的核苷酸第3508至4014位具有至少85％、至少95％或至少99％同一性的核酸序列。

52.载体或质粒，其包含seq id no：19的核苷酸第1至7891位。

技术总结
本文提供了武装的塞尼卡谷病毒，其已被改变成携带治疗性载荷，即已被改变成编码用于治疗癌症的药剂。这些武装的塞尼卡谷病毒是溶瘤性的并且表达癌症治疗剂。本文还提供了在对象中使用武装的塞尼卡谷病毒来治疗癌症的组合物和方法。

技术研发人员：保罗·L·哈伦贝克,苏尼尔·哈达
受保护的技术使用者：塞内卡治疗公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15