细胞团块形成构件、培养容器、培养细胞的生产方法、带有细胞团块形成构件的培养细胞

本发明涉及细胞团块形成构件、培养容器、培养细胞的生产方法、带有细胞团块形成构件的培养细胞。本申请基于2021年3月30日向日本特许厅申请的日本特愿2021-058013号主张优先权，在此引用其内容。

背景技术：

1、近年来，细胞的培养技术在各种产业领域中得以利用(例如专利文献1、专利文献2)。专利文献1中提出了一种细胞培养容器，其能够良好地应用于生物化学实验、临床实验、药剂的开发研究等。

2、专利文献2中提出了一种细胞培养基材，其用于形成具备在生物体内的癌组织中可观察到这样的形态学极性和组织运动特性的细胞团块。

3、现有技术文献

4、专利文献

5、专利文献1：国际公开第2007/125894号

6、专利文献2：国际公开第2018/182044号

技术实现思路

1、[技术问题]

2、在专利文献1的细胞培养容器的孔(well)的底面设有图案形成有点状的洞的亲水性覆膜。通过该亲水性覆膜抑制细胞的非特异性粘附，从而细胞粘附于点状的洞部分。但是，点状的洞分散配置于图案形成的结果孔内，因此无法以形成细胞团块的方式培养细胞。

3、在专利文献2的细胞培养基材中，在未被生物相容性聚合物层覆盖的粗糙面部分培养细胞而形成细胞团块。但是，选择性地涂布生物相容性聚合物的工序使用光刻的方法，不适于大量生产，因此在制造时的工业上的量产性方面存在改进的余地。

4、本发明提供：能够容易地形成细胞团块且工业上的量产性优异的细胞团块形成构件；具备所述细胞团块形成构件的培养容器；使用所述细胞团块形成构件的培养细胞的生产方法；以及具备所述细胞团块形成构件的带有细胞团块形成构件的培养细胞。

5、[技术方案]

6、本发明具有下述方式。

7、[1]一种细胞团块形成构件，具有基材，其中，在所述基材的表面形成有至少1个以上的附着抑制区域和至少1个以上的细胞附着区域，在所述细胞附着区域的至少一部分形成有包含多个凸部或多个凹部的微细凹凸结构区域，在所述附着抑制区域和所述细胞附着区域这两者形成有亲水性涂层。

8、[2]一种细胞团块形成构件，具有基材，其中，在所述基材的表面形成有至少1个以上的附着抑制区域和至少1个以上的细胞附着区域，在所述细胞附着区域的至少一部分形成有包含多个凸部或多个凹部的微细凹凸结构区域，在所述附着抑制区域和所述细胞附着区域中的所述附着抑制区域这一者形成有亲水性涂层。

9、[3]根据[1]或[2]所述的细胞团块形成构件，其中，所述多个凸部的平均高度或所述多个凹部的平均深度为250nm以上。

10、[4]根据[1]～[3]中任一项所述的细胞团块形成构件，其中，所述多个凸部的平均高度与所述多个凸部的平均直径的长径比、或者所述多个凹部的平均深度与所述多个凹部的平均直径的长径比为0.5～5.0。

11、[5]根据[1]～[4]中任一项所述的细胞团块形成构件，其中，所述多个凸部间或所述多个凹部间的平均间距为50nm～1μm。

12、[6]根据[1]～[5]中任一项所述的细胞团块形成构件，其中，所述细胞附着区域在所述基材的厚度方向上位于相对于所述附着抑制区域设有高低差的位置。

13、[7]根据[1]～[5]中任一项所述的细胞团块形成构件，其中，所述细胞附着区域与所述基材的所述表面之间的高低差为0～3μm。

14、[8]根据[1]～[7]中任一项所述的细胞团块形成构件，其中，在所述微细凹凸结构区域的所述多个凸部之间的凹部或者所述多个凸部之间的凹部的底部形成有亲水性层。

15、[9]根据[1]～[8]中任一项所述的细胞团块形成构件，其中，所述基材包含选自聚对苯二甲酸乙二醇酯、三乙酰纤维素、聚碳酸酯、环烯烃聚合物、环烯烃共聚物、丙烯酸树脂、聚苯乙烯和二甲基聚硅氧烷中的至少1种以上的树脂。

16、[10]根据[1]～[9]中任一项所述的细胞团块形成构件，其中，外接于所述细胞附着区域的最小面积的椭圆的长轴与所述椭圆的短轴之比为1～3。

17、[11]根据[1]～[10]中任一项所述的细胞团块形成构件，其中，在俯视所述细胞团块形成构件时，所述细胞附着区域形成为由外径圆和内径圆包围的环状区域，所述外径圆的直径为10～100μm，所述外径圆的直径与所述内径圆的直径之差为200nm～30μm，并且，在所述环状区域的至少一部分形成有包含多个凸部或多个凹部的微细凹凸结构，在所述附着抑制区域和所述细胞附着区域这两者形成有亲水性涂层。

18、[12]一种培养容器，其具备[1]～[11]中任一项所述的细胞团块形成构件。

19、[13]一种培养细胞的生产方法，其使用[1]～[11]中任一项所述的细胞团块形成构件培养细胞，接着从所述细胞团块形成构件剥离培养细胞。

20、[14]一种带有细胞团块形成构件的培养细胞，其具备：[1]～[11]中任一项所述的细胞团块形成构件；以及附着于所述细胞团块形成构件的培养细胞。

21、[15]根据[14]所述的带有细胞团块形成构件的培养细胞，其中，包含所述细胞的细胞团块形成三维结构。

22、[技术效果]

23、根据本发明提供：能够容易地形成细胞团块且工业上的量产性优异的细胞团块形成构件；具备所述细胞团块形成构件的培养容器；使用所述细胞团块形成构件的培养细胞的生产方法；以及具备所述细胞团块形成构件的带有细胞团块形成构件的培养细胞。

技术特征：

1.一种细胞团块形成构件，具有基材，其中，

2.一种细胞团块形成构件，具有基材，其中，

3.根据权利要求1或2所述的细胞团块形成构件，其中，

4.根据权利要求1～3中任一项所述的细胞团块形成构件，其中，

5.根据权利要求1～4中任一项所述的细胞团块形成构件，其中，

6.根据权利要求1～5中任一项所述的细胞团块形成构件，其中，

7.根据权利要求1～5中任一项所述的细胞团块形成构件，其中，

8.根据权利要求1～7中任一项所述的细胞团块形成构件，其中，

9.根据权利要求1～8中任一项所述的细胞团块形成构件，其中，

10.根据权利要求1～9中任一项所述的细胞团块形成构件，其中，

11.根据权利要求1所述的细胞团块形成构件，其中，

12.一种培养容器，其具备权利要求1～11中任一项所述的细胞团块形成构件。

13.一种培养细胞的生产方法，其使用权利要求1～11中任一项所述的细胞团块形成构件来培养细胞，接着从所述细胞团块形成构件剥离培养细胞。

14.一种带有细胞团块形成构件的培养细胞，具备：

15.根据权利要求14所述的带有细胞团块形成构件的培养细胞，其中，

技术总结
本发明的一个方式提供：能够容易地形成细胞团块且工业上的量产性优异的细胞团块形成构件；具备所述细胞团块形成构件的培养容器；使用所述细胞团块形成构件的培养细胞的生产方法；以及具备所述细胞团块形成构件的带有细胞团块形成构件的培养细胞。本发明的一例的细胞团块形成构件(1B)具有基材(2)，在基材(2)的表面(2a)形成有附着抑制区域(3A)和细胞附着区域(4B)，在细胞附着区域(4B)形成有包含多个凸部(7)的微细凹凸结构区域(6)，在附着抑制区域(3A)和细胞附着区域(4B)这两者形成有亲水性涂层(5)。一例的培养容器和带有细胞团块形成构件的培养细胞具备细胞团块形成构件(1B)。一例的培养细胞的生产方法中使用细胞团块形成构件(1B)。

技术研发人员：宫武由甲子,繁富香织,得能寿子,大纮太郎,筱冢启
受保护的技术使用者：国立大学法人北海道大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15