淀粉酶变体的制作方法

本发明提供新的淀粉酶。更具体而言，提供遗传改造的淀粉酶、包含该酶的组合物以及制备和使用该酶或包含该酶的组合物的方法。

背景技术：

1、酶作为石油化工的可持续替代品越来越多地用于多种应用。酶可生物降解，并且在较低的温度下已经可以具有催化活性，这导致能量消耗减少。尤其是，在洗涤剂产业中，在洗涤制剂中酶被用于改善清洁效率以及降低洗涤步骤中的能量消耗。

2、淀粉酶是能够水解淀粉的酶。因此，淀粉酶已用于去除淀粉污渍，并已为此目的添加到清洁组合物中。在这些洗涤剂应用中，淀粉酶应在高温和/或洗涤剂和洗涤液的变性条件下保持稳定。因此，需要具有改善的特性、尤其是具有改善的稳定性和改善的性能的新淀粉酶。

技术实现思路

0、发明概述

1、本发明涉及亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体，其中该变体包含：

2、(i)根据seq id no:3所示氨基酸序列的编号，在对应于选自以下的位置的一个或多个位置处的氨基酸改变，优选插入、缺失、取代或其组合，优选取代：1、2、3、4、5、6、7、8、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、45、47、48、51、54、59、60、63、70、71、72、73、75、76、81、82、83、86、87、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、103、106、108、109、113、114、115、116、117、119、120、123、125、126、128、129、131、132、133、134、135、136、139、141、142、143、144、145、146、147、149、150、151、154、155、156、158、160、161、162、163、164、165、169、170、172、173、174、175、176、177、178、180、182、184、185、187、188、189、191、192、193、203、208、210、211、212、213、214、215、216、218、219、221、222、223、224、225、226、227、230、231、233、234、235、236、237、238、240、242、243、245、249、250、251、252、253、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、279、280、281、282、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、301、302、303、304、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、317、318、319、320、321、322、323、324、326、327、333、334、336、337、338、341、342、343、344、345、346、348、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、360、362、363、364、365、366、367、368、370、372、375、376、378、379、381、382、383、384、385、387、388、389、390、391、392、393、394、395、396、397、398、399、400、401、403、405、406、407、408、410、413、414、415、416、418、421、424、426、427、429、431、432、434、436、438、439、440、442、443、445、446、447、448、449、451、453、455、456、457、458、459、460、461、462、463、465、467、468、470、471、474、478、480和482；

3、(ii)该变体与seq id no:1、3、4或seq id no 15-41中任一个、优选seq id no:1中所示的氨基酸序列具有至少80％但小于100％的序列同一性，以及

4、(iii)该变体具有α-淀粉酶活性。

5、此外，本发明涉及编码该α-淀粉酶变体的多核苷酸和包含该多核苷酸的核酸构建体或表达载体，以及包含该多核苷酸、该核酸构建体或该表达载体的宿主细胞。

6、此外，本发明涉及包含该α-淀粉酶变体和至少一种其他成分的组合物，优选洗涤剂组合物(例如衣物洗涤剂组合物或自动餐具洗涤(adw)洗涤剂组合物)，以及该α-淀粉酶变体在这种组合物中的用途。

7、本发明还涉及产生α-淀粉酶变体的方法，其包括在适合表达该α-淀粉酶突变体的条件下培养宿主细胞；并回收该α-淀粉酶变体。

技术特征：

1.亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体，其中该变体包含：

2.权利要求1的α-淀粉酶变体，其中该变体包含一个或多个氨基酸取代，其中，根据seqid no:3所示氨基酸序列的编号，所述一个或多个氨基酸取代选自由以下组成的氨基酸取代组：x25h、x25a、x25c、x25d、x25f、x25g、x25k、x25l、x25m、x25q、x25s、x25w、x25y、x100d、x100f、x100k、x100l、x103a、x106d、x108a、x109a、x10a、x10c、x10e、x10f、x10l、x10w、x10y、x113f、x113h、x113m、x113r、x113v、x113w、x113y、x114a、x114c、x114d、x114e、x114f、x114g、x114h、x114i、x114k、x114l、x114m、x114n、x114q、x114r、x114s、x114v、x114w、x114y、x115c、x115d、x115k、x115m、x115n、x115q、x115r、x115s、x115t、x115v、x116i、x116k、x116l、x116m、x116r、x116t、x117a、x117c、x117d、x117f、x117i、x117n、x117p、x117r、x117w、x117y、x118a、x118d、x118e、x119h、x119p、x119r、x119s、x119y、x120e、x120g、x120m、x120s、x120w、x120y、x123d、x123s、x125a、x125d、x125e、x125f、x125g、x125h、x125k、x125l、x125m、x125n、x125q、x125r、x125t、x125v、x125w、x125y、x126d、x128c、x128e、x128l、x128m、x128w、x128y、x129e、x12n、x12s、x131c、x131i、x131l、x131q、x131w、x132t、x133a、x133c、x133d、x133e、x133h、x133k、x133n、x133p、x133q、x133s、x134c、x134e、x134f、x134i、x134l、x134m、x134p、x134t、x134v、x134w、x134y、x135d、x135e、x135g、x135m、x135n、x135p、x135s、x135t、x135w、x136a、x136c、x136d、x136e、x136f、x136h、x136l、x136m、x136n、x136p、x136w、x139c、x139s、x13a、x13y、x141v、x142c、x142e、x142f、x142l、x142m、x142q、x142r、x142w、x142y、x143f、x144c、x144e、x144g、x144k、x144n、x144q、x144r、x144s、x144t、x144v、x144y、x145a、x146c、x146d、x146e、x146f、x146g、x146h、x146k、x146l、x146s、x146t、x146w、x147m、x149e、x14n、x150c、x150e、x150q、x151c、x151e、x154a、x154y、x155y、x156e、x156v、x158h、x158n、x158y、x15r、x160d、x160e、x160w、x161t、x162v、x163a、x163q、x163t、x164v、x165s、x165t、x165w、x169a、x169d、x169e、x169s、x169v、x16f、x16r、x170c、x170f、x172a、x172c、x172d、x172k、x172n、x173i、x173y、x174d、x174e、x174g、x174h、x174m、x174n、x174p、x174s、x174t、x175a、x175g、x175h、x175q、x176k、x176s、x176t、x177a、x177g、x177k、x177n、x177p、x177r、x177s、x177w、x178f、x17k、x17v、x180m、x180n、x180t、x180w、x182d、x182e、x182n、x182q、x182s、x185e、x185m、x185n、x187a、x187d、x187m、x187v、x188h、x188t、x188v、x189i、x18f、x18i、x18k、x18m、x18r、x18t、x191f、x191h、x191k、x191m、x191w、x191y、x192a、x192t、x193d、x193e、x193g、x193v、x19a、x19c、x19d、x19f、x19g、x19h、x19i、x19k、x19l、x19m、x19p、x19q、x19s、x19t、x19y、x1r、x1v、x203e、x203r、x208f、x208i、x208y、x20a、x20c、x20d、x20e、x20f、x20g、x20h、x20k、x20l、x20m、x20n、x20p、x20q、x20s、x20t、x20v、x20w、x20y、x210a、x210c、x210d、x210e、x210f、x210m、x210n、x210q、x210s、x210y、x211a、x211c、x211d、x211e、x211g、x211h、x211l、x211n、x211q、x211s、x211t、x211v、x212c、x212d、x212i、x212l、x212w、x213a、x213c、x213m、x213r、x213s、x214e、x214p、x215a、x215d、x215e、x215h、x215w、x216g、x216h、x218a、x218c、x218d、x218e、x218f、x218g、x218h、x218i、x218k、x218l、x218n、x218q、x218s、x218t、x218v、x218w、x218y、x219a、x219c、x219d、x219e、x219f、x219g、x219h、x219k、x219m、x219q、x219r、x219s、x219t、x219w、x219y、x21e、x21s、x221f、x221n、x222d、x222k、x222s、x222t、x223c、x223l、x223v、x223y、x224f、x224v、x225a、x225c、x225e、x225f、x225h、x225i、x225n、x225r、x225s、x225y、x226a、x226c、x226d、x226e、x226g、x226h、x226i、x226l、x226m、x226q、x226r、x226s、x226t、x226v、x226w、x226y、x227c、x227f、x227g、x227h、x227i、x227k、x227l、x227m、x227r、x227t、x227v、x227w、x227y、x22a、x22d、x22e、x22f、x22g、x22k、x22l、x22m、x22q、x22r、x22t、x22w、x22y、x230a、x230f、x231c、x231d、x231n、x233c、x233h、x233i、x233m、x233t、x233w、x233y、x234c、x235l、x235m、x235v、x236y、x237c、x237i、x238a、x238f、x238t、x23n、x23q、x23w、x240m、x242m、x242n、x243d、x243f、x245e、x245h、x245m、x249d、x249i、x24g、x250v、x251a、x251e、x251f、x251l、x251m、x251s、x251t、x252c、x252i、x252s、x253c、x253g、x253y、x255d、x255f、x255i、x255t、x255v、x256c、x257l、x257v、x257y、x258f、x258q、x258r、x259l、x260h、x261r、x262c、x262d、x262e、x262h、x262p、x262y、x263i、x264h、x264t、x264w、x265s、x268f、x268g、x269m、x26a、x26d、x26e、x26f、x26l、x26m、x26p、x26s、x26v、x26y、x270a、x270q、x270y、x271s、x272f、x272g、x272l、x272s、x273a、x273c、x273d、x273e、x273f、x273h、x273i、x273l、x273m、x273p、x273q、x273r、x273v、x273w、x273y、x274f、x274s、x275v、x276d、x276k、x276l、x276n、x276r、x276y、x277d、x277e、x277t、x279a、x279p、x27a、x27d、x27f、x27g、x27h、x27i、x27q、x27r、x27t、x27v、x280d、x280f、x280g、x280h、x280i、x280k、x280n、x280r、x280v、x280y、x281a、x281d、x281e、x281h、x284a、x284f、x284h、x284l、x284m、x284n、x284y、x285g、x285l、x285n、x285p、x286q、x287a、x287d、x287e、x287h、x287t、x288a、x288k、x288p、x288y、x289f、x289g、x289r、x289t、x28c、x28d、x28e、x28f、x28g、x28i、x28k、x28n、x28q、x28s、x28t、x28v、x290d、x290m、x290n、x290q、x290w、x291d、x291k、x291t、x291y、x292c、x292d、x292f、x292i、x292l、x292t、x292w、x292y、x293d、x293e、x293f、x293k、x293r、x294g、x294t、x295f、x296a、x296c、x296l、x296y、x297e、x297f、x297h、x297k、x297m、x297s、x297v、x299g、x299i、x299k、x299l、x299s、x299y、x29d、x29e、x29f、x29g、x29h、x29i、x29k、x29l、x29n、x29p、x29q、x29v、x29w、x29y、x2i、x2s、x301f、x302h、x302i、x302q、x302v、x302y、x303e、x303h、x303i、x303k、x303l、x303m、x303n、x303p、x303r、x303t、x304a、x304d、x304e、x304h、x304k、x304m、x304n、x304p、x304r、x304t、x304w、x304y、x306a、x306d、x306e、x306g、x306h、x306i、x306m、x306q、x306r、x306s、x306t、x306v、x306w、x306y、x307f、x307m、x308s、x309h、x309l、x309q、x30a、x30e、x30f、x30g、x30h、x30i、x30k、x30l、x30m、x30q、x30t、x30w、x30y、x310a、x310q、x311a、x311e、x311g、x311h、x311k、x311n、x311r、x311t、x311y、x312l、x312m、x313v、x314c、x314e、x314k、x314q、x315a、x315c、x315e、x315h、x315k、x315t、x318i、x318s、x318t、x319a、x319d、x319h、x319i、x319k、x319m、x319n、x319p、x319s、x319t、x319w、x31n、x31q、x31s、x31t、x31v、x31w、x320a、x320c、x320d、x320e、x320g、x320h、x320k、x320l、x320n、x320q、x320s、x320y、x321a、x321e、x321k、x321n、x321t、x321v、x321w、x323a、x323g、x323k、x323l、x323v、x324k、x324l、x324m、x324w、x324y、x326g、x326n、x326s、x326y、x327c、x327l、x327m、x32a、x32d、x32e、x32f、x32h、x32i、x32l、x32m、x32n、x32p、x32q、x32t、x32w、x333i、x334t、x336k、x337a、x337c、x337f、x337g、x337i、x337k、x337l、x337m、x337n、x337q、x337r、x337s、x337t、x337v、x337y、x338g、x338s、x338t、x33d、x33e、x33h、x33k、x33m、x33q、x33r、x33y、x341v、x342p、x343l、x343t、x343w、x343y、x344i、x344q、x344v、x345d、x345g、x345m、x345n、x345q、x345s、x345t、x346a、x346c、x346d、x346g、x346h、x346n、x346q、x348t、x34h、x34i、x34v、x350h、x350k、x350p、x351a、x351m、x352s、x353h、x354i、x354n、x354t、x354y、x355i、x355m、x356i、x356v、x357a、x358i、x358l、x358n、x358p、x358v、x359e、x35a、x35c、x35d、x35g、x35h、x35i、x35l、x35m、x35n、x35p、x35q、x35r、x35s、x35t、x35v、x35y、x360a、x360f、x360g、x360i、x360l、x360n、x360q、x360r、x360s、x360t、x360v、x360y、x362f、x362k、x362m、x362n、x362t、x362v、x362y、x363a、x363c、x363d、x363e、x363g、x363h、x363k、x363l、x363m、x363p、x363q、x363r、x363s、x363t、x363v、x363w、x363y、x364a、x364c、x364g、x364k、x364l、x364n、x364s、x364t、x364v、x366i、x366l、x366t、x367e、x367s、x368a、x368f、x368l、x368n、x36a、x36e、x36g、x36i、x36k、x36m、x36n、x36p、x36q、x36r、x36s、x36t、x36v、x370e、x370i、x372a、x372c、x372e、x372f、x372h、x372m、x372n、x372q、x375a、x375d、x375e、x375i、x375k、x375q、x375r、x375t、x375w、x375y、x376g、x376i、x376k、x376l、x376m、x376q、x376r、x376s、x376v、x377q、x378c、x378d、x378e、x378r、x379a、x379l、x379s、x37a、x37g、x37m、x37p、x37t、x37v、x37w、x381e、x381v、x382a、x382h、x382k、x382l、x382n、x382q、x382s、x383c、x383d、x383e、x383h、x383i、x383m、x383n、x383q、x383r、x383s、x383v、x383y、x384a、x384c、x384d、x384e、x384f、x384i、x384l、x384m、x384n、x384q、x384r、x384t、x384v、x384w、x384y、x385a、x385c、x385d、x385e、x385f、x385g、x385h、x385i、x385l、x385m、x385n、x385p、x385q、x385r、x385s、x385t、x385v、x385w、x385y、x387c、x387e、x387n、x388e、x388f、x388h、x388i、x388m、x388r、x388v、x389g、x389h、x389k、x38n、x390d、x390f、x390m、x390n、x390p、x390r、x391a、x391f、x391g、x391k、x391m、x391n、x391q、x391s、x391t、x391y、x392c、x392v、x393e、x393h、x393p、x393s、x393v、x394a、x394c、x394e、x394h、x394i、x394l、x394m、x394n、x394r、x394s、x395a、x395h、x395m、x395v、x396h、x396p、x397d、x397h、x397p、x397s、x398m、x399p、x39e、x39k、x3a、x3f、x3g、x3i、x3k、x3l、x3q、x3v、x400a、x400d、x400e、x400g、x400h、x400i、x400k、x400l、x400m、x400n、x400p、x400q、x400r、x400s、x400v、x400w、x401i、x401k、x401m、x401t、x403n、x405c、x405h、x405m、x405t、x405v、x406p、x407d、x407r、x407s、x408e、x408i、x408q、x40i、x40s、x410h、x410i、x410k、x410l、x410p、x410r、x410y、x413s、x414c、x414e、x414s、x415e、x415i、x416s、x418c、x418n、x418p、x41c、x41d、x41e、x41g、x41q、x41s、x41t、x421n、x421p、x424a、x426d、x426w、x427c、x427f、x427g、x427k、x427q、x427r、x427s、x427t、x427v、x429a、x429d、x429e、x429f、x429g、x429i、x429m、x429n、x429p、x429q、x429s、x429t、x429v、x429w、x42c、x42i、x42q、x42v、x431i、x434s、x436e、x438f、x438p、x438y、x439k、x439c、x439p、x440v、x442q、x443h、x443t、x445a、x445c、x445d、x445f、x445g、x445h、x445k、x445m、x445q、x445r、x445s、x445t、x445v、x446f、x446i、x446l、x446p、x446q、x446r、x446v、x446w、x447v、x448d、x448e、x448h、x448n、x449a、x449f、x449g、x449k、x449l、x449m、x449n、x449p、x449q、x449r、x449s、x449v、x449w、x449y、x451l、x453g、x453i、x453n、x453p、x453y、x455l、x456l、x456m、x456r、x456s、x456v、x456w、x456y、x457a、x457c、x457e、x457f、x457g、x457k、x457l、x457m、x457r、x457s、x457t、x457v、x457w、x458i、x458k、x458v、x458w、x459c、x459d、x459e、x459i、x459k、x459n、x459q、x459r、x459v、x459y、x45g、x45n、x460a、x460d、x460e、x460g、x460q、x460r、x460s、x460t、x460v、x461a、x461e、x461f、x461k、x461l、x461m、x461n、x461q、x461r、x461s、x461v、x462k、x463l、x465h、x465p、x465r、x465v、x467a、x467e、x467h、x468d、x468h、x470a、x470q、x470t、x471e、x474f、x474h、x474p、x478a、x478e、x47s、x480d、x480e、x480m、x480r、x480y、x482c、x482t、x482w、x48f、x48i、x48m、x48y、x4a、x4c、x4k、x4m、x4q、x4r、x4s、x51q、x51t、x51v、x54d、x54g、x54q、x59t、x5a、x5c、x5d、x5e、x5f、x5h、x5i、x5k、x5l、x5m、x5n、x5p、x5q、x5r、x5v、x5y、x60t、x63c、x63v、x6a、x6c、x6e、x6f、x6g、x6h、x6k、x6l、x6m、x6p、x6q、x6s、x6t、x6v、x6w、x6y、x70f、x70h、x70l、x70m、x70n、x70y、x71d、x72c、x72d、x72e、x72n、x72t、x73l、x73n、x73q、x75a、x75g、x75i、x75l、x75p、x75t、x75w、x76c、x76e、x76g、x76l、x76t、x76v、x7c、x7e、x7f、x7h、x7k、x7n、x7p、x7q、x7r、x7s、x7v、x7w、x7y、x81h、x81l、x82k、x82m、x83a、x83d、x83e、x83g、x83r、x83s、x86k、x87d、x87r、x89a、x89c、x89f、x89g、x89l、x89m、x89r、x89s、x8a、x8c、x8f、x8i、x8m、x8p、x8s、x8v、x8w、x8y、x90a、x90d、x90e、x90f、x90g、x90i、x90m、x90n、x90q、x90r、x90s、x90v、x90y、x91c、x91d、x91e、x91f、x91g、x91h、x91i、x91k、x91l、x91m、x91n、x91q、x91s、x91t、x91v、x91w、x91y、x92d、x92m、x92v、x93k、x93q、x94a、x94d、x94e、x94k、x94m、x94v、x94y、x95e、x95i、x95l、x95v、x96k、x96n、x96q、x97v、x98e、x98g、x98n、x99h、x99k、x99n、x100w和x1g，

3.前述权利要求中任一项的α-淀粉酶变体，其中该变体包含选自以下的取代组合：

4.前述权利要求中任一项的α-淀粉酶变体，其中该变体与seq id no:1、3、4、或seq idno 15-41中的任一个、优选seq id no:1中所示的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％、优选至少91％或至少95％但小于100％的序列同一性。

5.前述权利要求中任一项的α-淀粉酶变体，其中该变体包含a和b结构域以及c结构域，其中该a和b结构域的氨基酸序列与seq id no:6的氨基酸序列至少75％但小于100％同一，并且该c结构域的氨基酸序列与seq id no:8的氨基酸序列至少75％但小于100％同一。

6.前述权利要求中任一项的α-淀粉酶变体，其中该变体相对于所述亲本α-淀粉酶，优选相对于seq id no:1和/或seq id no:3中所示的亲本α-淀粉酶，优选相对于seq id no:1中所示的亲本α-淀粉酶，表现出一种或多种改进的性质，优选该α-淀粉酶变体在表达、活性、稳定性、热稳定性、比活性、底物特异性、ph依赖性活性、ph稳定性、氧化稳定性、催化效率、催化速率、化学稳定性、ph活性、储存条件下的稳定性、底物结合、底物切割、底物稳定性、表面性质、热活性、ca2+依赖性、洗涤性能、衣物洗涤剂中的洗涤性能、和/或adw洗涤剂中的洗涤性能方面提高，优选地，该改进的性质是改进的热稳定性、改进的在洗涤剂组合物中储存的稳定性和/或改进的洗涤性能，最优选改进的热稳定性，优选改进的在洗涤剂组合物中，优选在衣物洗涤剂或餐具洗涤剂组合物中，优选在衣物洗涤剂组合物中的热稳定性。

7.权利要求7的α-淀粉酶变体，其中该改进的性质表示为＞1.0的改进因子(if)，并且其中优选该改进因子等于或大于1.1，优选等于或大于1.2，更优选等于或大于1.3。

8.前述权利要求中任一项的α-淀粉酶变体，其进一步在对应于选自181、182、183和184的位置的一个或多个氨基酸处包含缺失，优选在对应于选自181、182、183和184的位置的两个或更多个氨基酸处包含缺失，优选包含对应于位置181和182、182和183或183和184的氨基酸缺失，其中根据seq id no:3所示的氨基酸序列编号。

9.前述权利要求中任一项的α-淀粉酶变体，其中与seq id no:1相比，所述取代的数目为1-30、优选1-25个、1-20个、1-15个、1-10个、2-10个、3-10个、或1-5个，如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个或25个取代。

10.前述权利要求中任一项的α-淀粉酶变体，其中该变体包含具有一个或多个、优选1-30个选自以下氨基酸取代的氨基酸取代的seq id no:1中所示的氨基酸序列或由其组成：x25h、x25a、x25c、x25d、x25f、x25g、x25k、x25l、x25m、x25q、x25s、x25w、x25y、x100d、x100f、x100k、x100l、x103a、x106d、x108a、x109a、x10a、x10c、x10e、x10f、x10l、x10w、x10y、x113f、x113h、x113m、x113r、x113v、x113w、x113y、x114a、x114c、x114d、x114e、x114f、x114g、x114h、x114i、x114k、x114l、x114m、x114n、x114q、x114r、x114s、x114v、x114w、x114y、x115c、x115d、x115k、x115m、x115n、x115q、x115r、x115s、x115t、x115v、x116i、x116k、x116l、x116m、x116r、x116t、x117a、x117c、x117d、x117f、x117i、x117n、x117p、x117r、x117w、x117y、x118a、x118d、x118e、x119h、x119p、x119r、x119s、x119y、x120e、x120g、x120m、x120s、x120w、x120y、x123d、x123s、x125a、x125d、x125e、x125f、x125g、x125h、x125k、x125l、x125m、x125n、x125q、x125r、x125t、x125v、x125w、x125y、x126d、x128c、x128e、x128l、x128m、x128w、x128y、x129e、x12n、x12s、x131c、x131i、x131l、x131q、x131w、x132t、x133a、x133c、x133d、x133e、x133h、x133k、x133n、x133p、x133q、x133s、x134c、x134e、x134f、x134i、x134l、x134m、x134p、x134t、x134v、x134w、x134y、x135d、x135e、x135g、x135m、x135n、x135p、x135s、x135t、x135w、x136a、x136c、x136d、x136e、x136f、x136h、x136l、x136m、x136n、x136p、x136w、x139c、x139s、x13a、x13y、x141v、x142c、x142e、x142f、x142l、x142m、x142q、x142r、x142w、x142y、x143f、x144c、x144e、x144g、x144k、x144n、x144q、x144r、x144s、x144t、x144v、x144y、x145a、x146c、x146d、x146e、x146f、x146g、x146h、x146k、x146l、x146s、x146t、x146w、x147m、x149e、x14n、x150c、x150e、x150q、x151c、x151e、x154a、x154y、x155y、x156e、x156v、x158h、x158n、x158y、x15r、x160d、x160e、x160w、x161t、x162v、x163a、x163q、x163t、x164v、x165s、x165t、x165w、x169a、x169d、x169e、x169s、x169v、x16f、x16r、x170c、x170f、x172a、x172c、x172d、x172k、x172n、x173i、x173y、x174d、x174e、x174g、x174h、x174m、x174n、x174p、x174s、x174t、x175a、x175g、x175h、x175q、x176k、x176s、x176t、x177a、x177g、x177k、x177n、x177p、x177r、x177s、x177w、x178f、x17k、x17v、x180m、x180n、x180t、x180w、x182d、x182e、x182n、x182q、x182s、x185e、x185m、x185n、x187a、x187d、x187m、x187v、x188h、x188t、x188v、x189i、x18f、x18i、x18k、x18m、x18r、x18t、x191f、x191h、x191k、x191m、x191w、x191y、x192a、x192t、x193d、x193e、x193g、x193v、x19a、x19c、x19d、x19f、x19g、x19h、x19i、x19k、x19l、x19m、x19p、x19q、x19s、x19t、x19y、x1r、x1v、x203e、x203r、x208f、x208i、x208y、x20a、x20c、x20d、x20e、x20f、x20g、x20h、x20k、x20l、x20m、x20n、x20p、x20q、x20s、x20t、x20v、x20w、x20y、x210a、x210c、x210d、x210e、x210f、x210m、x210n、x210q、x210s、x210y、x211a、x211c、x211d、x211e、x211g、x211h、x211l、x211n、x211q、x211s、x211t、x211v、x212c、x212d、x212i、x212l、x212w、x213a、x213c、x213m、x213r、x213s、x214e、x214p、x215a、x215d、x215e、x215h、x215w、x216g、x216h、x218a、x218c、x218d、x218e、x218f、x218g、x218h、x218i、x218k、x218l、x218n、x218q、x218s、x218t、x218v、x218w、x218y、x219a、x219c、x219d、x219e、x219f、x219g、x219h、x219k、x219m、x219q、x219r、x219s、x219t、x219w、x219y、x21e、x21s、x221f、x221n、x222d、x222k、x222s、x222t、x223c、x223l、x223v、x223y、x224f、x224v、x225a、x225c、x225e、x225f、x225h、x225i、x225n、x225r、x225s、x225y、x226a、x226c、x226d、x226e、x226g、x226h、x226i、x226l、x226m、x226q、x226r、x226s、x226t、x226v、x226w、x226y、x227c、x227f、x227g、x227h、x227i、x227k、x227l、x227m、x227r、x227t、x227v、x227w、x227y、x22a、x22d、x22e、x22f、x22g、x22k、x22l、x22m、x22q、x22r、x22t、x22w、x22y、x230a、x230f、x231c、x231d、x231n、x233c、x233h、x233i、x233m、x233t、x233w、x233y、x234c、x235l、x235m、x235v、x236y、x237c、x237i、x238a、x238f、x238t、x23n、x23q、x23w、x240m、x242m、x242n、x243d、x243f、x245e、x245h、x245m、x249d、x249i、x24g、x250v、x251a、x251e、x251f、x251l、x251m、x251s、x251t、x252c、x252i、x252s、x253c、x253g、x253y、x255d、x255f、x255i、x255t、x255v、x256c、x257l、x257v、x257y、x258f、x258q、x258r、x259l、x260h、x261r、x262c、x262d、x262e、x262h、x262p、x262y、x263i、x264h、x264t、x264w、x265s、x268f、x268g、x269m、x26a、x26d、x26e、x26f、x26l、x26m、x26p、x26s、x26v、x26y、x270a、x270q、x270y、x271s、x272f、x272g、x272l、x272s、x273a、x273c、x273d、x273e、x273f、x273h、x273i、x273l、x273m、x273p、x273q、x273r、x273v、x273w、x273y、x274f、x274s、x275v、x276d、x276k、x276l、x276n、x276r、x276y、x277d、x277e、x277t、x279a、x279p、x27a、x27d、x27f、x27g、x27h、x27i、x27q、x27r、x27t、x27v、x280d、x280f、x280g、x280h、x280i、x280k、x280n、x280r、x280v、x280y、x281a、x281d、x281e、x281h、x284a、x284f、x284h、x284l、x284m、x284n、x284y、x285g、x285l、x285n、x285p、x286q、x287a、x287d、x287e、x287h、x287t、x288a、x288k、x288p、x288y、x289f、x289g、x289r、x289t、x28c、x28d、x28e、x28f、x28g、x28i、x28k、x28n、x28q、x28s、x28t、x28v、x290d、x290m、x290n、x290q、x290w、x291d、x291k、x291t、x291y、x292c、x292d、x292f、x292i、x292l、x292t、x292w、x292y、x293d、x293e、x293f、x293k、x293r、x294g、x294t、x295f、x296a、x296c、x296l、x296y、x297e、x297f、x297h、x297k、x297m、x297s、x297v、x299g、x299i、x299k、x299l、x299s、x299y、x29d、x29e、x29f、x29g、x29h、x29i、x29k、x29l、x29n、x29p、x29q、x29v、x29w、x29y、x2i、x2s、x301f、x302h、x302i、x302q、x302v、x302y、x303e、x303h、x303i、x303k、x303l、x303m、x303n、x303p、x303r、x303t、x304a、x304d、x304e、x304h、x304k、x304m、x304n、x304p、x304r、x304t、x304w、x304y、x306a、x306d、x306e、x306g、x306h、x306i、x306m、x306q、x306r、x306s、x306t、x306v、x306w、x306y、x307f、x307m、x308s、x309h、x309l、x309q、x30a、x30e、x30f、x30g、x30h、x30i、x30k、x30l、x30m、x30q、x30t、x30w、x30y、x310a、x310q、x311a、x311e、x311g、x311h、x311k、x311n、x311r、x311t、x311y、x312l、x312m、x313v、x314c、x314e、x314k、x314q、x315a、x315c、x315e、x315h、x315k、x315t、x318i、x318s、x318t、x319a、x319d、x319h、x319i、x319k、x319m、x319n、x319p、x319s、x319t、x319w、x31n、x31q、x31s、x31t、x31v、x31w、x320a、x320c、x320d、x320e、x320g、x320h、x320k、x320l、x320n、x320q、x320s、x320y、x321a、x321e、x321k、x321n、x321t、x321v、x321w、x323a、x323g、x323k、x323l、x323v、x324k、x324l、x324m、x324w、x324y、x326g、x326n、x326s、x326y、x327c、x327l、x327m、x32a、x32d、x32e、x32f、x32h、x32i、x32l、x32m、x32n、x32p、x32q、x32t、x32w、x333i、x334t、x336k、x337a、x337c、x337f、x337g、x337i、x337k、x337l、x337m、x337n、x337q、x337r、x337s、x337t、x337v、x337y、x338g、x338s、x338t、x33d、x33e、x33h、x33k、x33m、x33q、x33r、x33y、x341v、x342p、x343l、x343t、x343w、x343y、x344i、x344q、x344v、x345d、x345g、x345m、x345n、x345q、x345s、x345t、x346a、x346c、x346d、x346g、x346h、x346n、x346q、x348t、x34h、x34i、x34v、x350h、x350k、x350p、x351a、x351m、x352s、x353h、x354i、x354n、x354t、x354y、x355i、x355m、x356i、x356v、x357a、x358i、x358l、x358n、x358p、x358v、x359e、x35a、x35c、x35d、x35g、x35h、x35i、x35l、x35m、x35n、x35p、x35q、x35r、x35s、x35t、x35v、x35y、x360a、x360f、x360g、x360i、x360l、x360n、x360q、x360r、x360s、x360t、x360v、x360y、x362f、x362k、x362m、x362n、x362t、x362v、x362y、x363a、x363c、x363d、x363e、x363g、x363h、x363k、x363l、x363m、x363p、x363q、x363r、x363s、x363t、x363v、x363w、x363y、x364a、x364c、x364g、x364k、x364l、x364n、x364s、x364t、x364v、x366i、x366l、x366t、x367e、x367s、x368a、x368f、x368l、x368n、x36a、x36e、x36g、x36i、x36k、x36m、x36n、x36p、x36q、x36r、x36s、x36t、x36v、x370e、x370i、x372a、x372c、x372e、x372f、x372h、x372m、x372n、x372q、x375a、x375d、x375e、x375i、x375k、x375q、x375r、x375t、x375w、x375y、x376g、x376i、x376k、x376l、x376m、x376q、x376r、x376s、x376v、x377q、x378c、x378d、x378e、x378r、x379a、x379l、x379s、x37a、x37g、x37m、x37p、x37t、x37v、x37w、x381e、x381v、x382a、x382h、x382k、x382l、x382n、x382q、x382s、x383c、x383d、x383e、x383h、x383i、x383m、x383n、x383q、x383r、x383s、x383v、x383y、x384a、x384c、x384d、x384e、x384f、x384i、x384l、x384m、x384n、x384q、x384r、x384t、x384v、x384w、x384y、x385a、x385c、x385d、x385e、x385f、x385g、x385h、x385i、x385l、x385m、x385n、x385p、x385q、x385r、x385s、x385t、x385v、x385w、x385y、x387c、x387e、x387n、x388e、x388f、x388h、x388i、x388m、x388r、x388v、x389g、x389h、x389k、x38n、x390d、x390f、x390m、x390n、x390p、x390r、x391a、x391f、x391g、x391k、x391m、x391n、x391q、x391s、x391t、x391y、x392c、x392v、x393e、x393h、x393p、x393s、x393v、x394a、x394c、x394e、x394h、x394i、x394l、x394m、x394n、x394r、x394s、x395a、x395h、x395m、x395v、x396h、x396p、x397d、x397h、x397p、x397s、x398m、x399p、x39e、x39k、x3a、x3f、x3g、x3i、x3k、x3l、x3q、x3v、x400a、x400d、x400e、x400g、x400h、x400i、x400k、x400l、x400m、x400n、x400p、x400q、x400r、x400s、x400v、x400w、x401i、x401k、x401m、x401t、x403n、x405c、x405h、x405m、x405t、x405v、x406p、x407d、x407r、x407s、x408e、x408i、x408q、x40i、x40s、x410h、x410i、x410k、x410l、x410p、x410r、x410y、x413s、x414c、x414e、x414s、x415e、x415i、x416s、x418c、x418n、x418p、x41c、x41d、x41e、x41g、x41q、x41s、x41t、x421n、x421p、x424a、x426d、x426w、x427c、x427f、x427g、x427k、x427q、x427r、x427s、x427t、x427v、x429a、x429d、x429e、x429f、x429g、x429i、x429m、x429n、x429p、x429q、x429s、x429t、x429v、x429w、x42c、x42i、x42q、x42v、x431i、x434s、x436e、x438f、x438p、x438y、x439k、x439c、x439p、x440v、x442q、x443h、x443t、x445a、x445c、x445d、x445f、x445g、x445h、x445k、x445m、x445q、x445r、x445s、x445t、x445v、x446f、x446i、x446l、x446p、x446q、x446r、x446v、x446w、x447v、x448d、x448e、x448h、x448n、x449a、x449f、x449g、x449k、x449l、x449m、x449n、x449p、x449q、x449r、x449s、x449v、x449w、x449y、x451l、x453g、x453i、x453n、x453p、x453y、x455l、x456l、x456m、x456r、x456s、x456v、x456w、x456y、x457a、x457c、x457e、x457f、x457g、x457k、x457l、x457m、x457r、x457s、x457t、x457v、x457w、x458i、x458k、x458v、x458w、x459c、x459d、x459e、x459i、x459k、x459n、x459q、x459r、x459v、x459y、x45g、x45n、x460a、x460d、x460e、x460g、x460q、x460r、x460s、x460t、x460v、x461a、x461e、x461f、x461k、x461l、x461m、x461n、x461q、x461r、x461s、x461v、x462k、x463l、x465h、x465p、x465r、x465v、x467a、x467e、x467h、x468d、x468h、x470a、x470q、x470t、x471e、x474f、x474h、x474p、x478a、x478e、x47s、x480d、x480e、x480m、x480r、x480y、x482c、x482t、x482w、x48f、x48i、x48m、x48y、x4a、x4c、x4k、x4m、x4q、x4r、x4s、x51q、x51t、x51v、x54d、x54g、x54q、x59t、x5a、x5c、x5d、x5e、x5f、x5h、x5i、x5k、x5l、x5m、x5n、x5p、x5q、x5r、x5v、x5y、x60t、x63c、x63v、x6a、x6c、x6e、x6f、x6g、x6h、x6k、x6l、x6m、x6p、x6q、x6s、x6t、x6v、x6w、x6y、x70f、x70h、x70l、x70m、x70n、x70y、x71d、x72c、x72d、x72e、x72n、x72t、x73l、x73n、x73q、x75a、x75g、x75i、x75l、x75p、x75t、x75w、x76c、x76e、x76g、x76l、x76t、x76v、x7c、x7e、x7f、x7h、x7k、x7n、x7p、x7q、x7r、x7s、x7v、x7w、x7y、x81h、x81l、x82k、x82m、x83a、x83d、x83e、x83g、x83r、x83s、x86k、x87d、x87r、x89a、x89c、x89f、x89g、x89l、x89m、x89r、x89s、x8a、x8c、x8f、x8i、x8m、x8p、x8s、x8v、x8w、x8y、x90a、x90d、x90e、x90f、x90g、x90i、x90m、x90n、x90q、x90r、x90s、x90v、x90y、x91c、x91d、x91e、x91f、x91g、x91h、x91i、x91k、x91l、x91m、x91n、x91q、x91s、x91t、x91v、x91w、x91y、x92d、x92m、x92v、x93k、x93q、x94a、x94d、x94e、x94k、x94m、x94v、x94y、x95e、x95i、x95l、x95v、x96k、x96n、x96q、x97v、x98e、x98g、x98n、x99h、x99k、x99n、x100w和x1g。

11.前述权利要求中任一项的α-淀粉酶变体，其进一步在对应于选自9、130、179、181、186、190、195、202、206、244、402、419、420、422、423、428、430、435、441、444、450、452、454、466、469、473、475、476、479、483和485的位置的一个或多个位置处包含其他氨基酸改变，优选其他取代，优选选自以下氨基酸取代的一个或多个其他氨基酸取代：x9d、x9f、x9k、x9l、x9n、x9p、x9q、x9s、x9t、x9y、x130v、x179g、x179l、x181d、x181e、x181f、x181h、x181i、x181n、x181q、x181s、x181t、x181v、x181w、x181y、x186a、x186c、x186d、x186e、x186f、x186h、x186i、x186k、x186l、x186m、x186n、x186q、x186r、x186s、x186v、x186w、x186y、x190h、x195f、x195h、x195k、x195l、x195w、x195y、x202l x206c、x206h、x206l、x206m、x206y、x244a、x244c、x244d、x244e、x244f、x244g、x244h、x244m、x244n、x244q、x244v、x402t、x419c、x420d、x420e、x420g、x420h、x420k、x420l、x420q、x422c、x422n、x422h、x423f、x423m、x423q、x423s、x428a、x428c、x428d、x428e、x428g、x428i、x428k、x428l、x428m、x428n、x428r、x428s、x428v、x428w、x428y、x430a、x430c、x430d、x430e、x430f、x430g、x430i、x430l、x430p、x430q、x430s、x430t、x430v、x435e、x435k、x435p、x435r、x435s、x435a、x435d、x437a、x437l、x437t、x437w、x441c、x441d、x441k、x441l、x441m、x441n、x441s、x444e、x444h、x444k、x444m、x444n、x444r、x444t、x450c、x450d、x450e、x450h、x450i、x450l、x450m、x450p、x450q、x450r、x450t、x452a、x452c、x452e、x452f、x452i、x452k、x452m、x452n、x452r、x452t、x454a、x454e、x454k、x454l、x454m、x454p、x454s、x454t、x466e、x466w、x469f、x469l、x469y、x473h、x473q、x473r、x475a、x475k、x475n、x475e、x475l、x476g、x476e、x479a、x479i、x479k、x479m、x483f、x483i、x483l、x483q、x483r、x485k和x485r，其中根据seq id no:3所示的氨基酸序列编号。

12.多核苷酸，其编码前述权利要求中任一项的α-淀粉酶变体。

13.核酸构建体或表达载体，其包含权利要求12的多核苷酸。

14.宿主细胞，其包含权利要求12的多核苷酸、权利要求13的核酸构建体或权利要求13的表达载体。

15.组合物，其包含权利要求1至11中任一项的α-淀粉酶变体和至少一种其他成分。

16.权利要求15的组合物，其是洗涤剂组合物，优选衣物洗涤剂组合物或自动餐具洗涤(adw)洗涤剂组合物。

17.权利要求16的组合物，其中该组合物包含一种或多种表面活性剂和/或一种或多种助洗剂，优选强螯合性助洗剂。

18.权利要求15-17中任一项的组合物，其中该组合物包含不同于前述权利要求任一项中所述的α-淀粉酶变体的一种或多种第二酶，其中所述一种或多种第二酶优选选自蛋白酶、第二淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、漆酶、甘露聚糖酶、果胶酶、木聚糖酶和核酸酶，尤其优选选自蛋白酶、甘露聚糖酶和脂肪酶，最优选蛋白酶。

19.产生α-淀粉酶变体的方法，其包括：

20.权利要求1至11中任一项的α-淀粉酶变体的用途，用于清洁过程，如衣物或硬表面清洁。

技术总结
本发明提供新的淀粉酶。更具体而言，提供遗传改造的淀粉酶、包含该酶的组合物以及制备和使用该酶或包含该酶的组合物的方法。

技术研发人员：J·尼尔森,C·波普,S·耶内维因,J·里昂,M·米勒,A·R·洛格,K·克兰,C·霍昂,S·威兰,C·德格林
受保护的技术使用者：巴斯夫欧洲公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15