漆酶的制作方法

本发明涉及一种新型漆酶。

背景技术：

1、漆酶是属于多铜氧化酶的酶，催化将底物氧化，利用剩余的电子将氧进行4电子还原而生成水的反应。作为漆酶的氧化对象底物，除了典型地举出二苯酚以外，还可举出经甲氧基取代的苯酚和二胺等。这样的催化能力能够应用于各种化学反应，因此期待能够在许多产业界利用。已知漆酶存在于微生物、植物、动物中。

2、例如，专利文献1中记载了来自变色栓菌tv-1株(trametes versicolor tv-1)的热稳定性漆酶，记载了在ph2下呈现最佳的漆酶活性。

3、专利文献2记载了来自灰葡萄孢(botrytis cinerea)、变色栓菌(trametesversicolor)或其他微生物源的漆酶、以及可从商业销售源购入的漆酶和/或使用重组技术生成的漆酶呈现活性的ph范围为ph3～ph7。

4、专利文献3中记载了来自属于链霉菌属的微生物的漆酶的最适ph为约4.5，在ph6.5时活性消失。

5、现有技术文献

6、专利文献

7、专利文献1：国际公开第98/55628号

8、专利文献2：日本特开2001-103989号公报

9、专利文献3：日本特开2002-171968号公报

技术实现思路

1、发明所要解决的技术问题

2、如上所述，漆酶被期待在产业界广泛应用。而且，其应用方式也包括催化碱条件下的氧化反应的情况。然而，现状是以工业规模生产并实用化的漆酶的作用ph处于酸性区域至弱酸性区域，特别是在碱性区域不可使用。如此，迄今为止的漆酶中呈现活性的ph区域受到限制，因此无法充分追随产业界所期待的应用方式。

3、因此，本发明的目的在于提供一种在包含碱性区域的ph区域中呈现优异的活性的漆酶。

4、用于解决技术问题的手段

5、本发明人进行了深入研究，结果从1万株以上的菌株库中偶然发现了在碱性区域中呈现活性的漆酶。本发明是基于该见解完成的。

6、即，本发明提供以下记载的方式的发明。

7、项1.一种漆酶，其包含下述(a)～(c)中任一项所示的多肽，

8、(a)多肽，其包含序列号1所示的氨基酸序列；

9、(b)多肽，其包含在序列号1所示的氨基酸序列中替换、添加、插入或缺失1个或多个氨基酸而成的氨基酸序列，且在包含碱性区域的ph区域中具有与上述(a)所示的多肽同等的漆酶活性；

10、(c)多肽，其包含相对于序列号1所示的氨基酸序列的序列一致性为87％以上的氨基酸序列，且在包含碱性区域的ph区域中具有与上述(a)所示的多肽同等的漆酶活性。

11、项2.一种dna，其编码项1所述的漆酶。

12、项3.一种表达盒或重组载体，其包含项2所述的dna。

13、项4.一种转化体，其是使用项3所述的表达盒或重组载体转化宿主而得到的。

14、项5.一种漆酶的制造方法，其包括培养项4所述的转化体的工序。

15、项6.一种酶制剂，其包含项1所述的漆酶。

16、项7.根据项6所述的酶制剂，其用作蛋白质的交联剂。

17、项8.根据项6所述的酶制剂，其用作饮食品或饮食品用原材料、产业用原材料或产业废弃成分、或者医药或科学分析用原材料的氧化改性剂。

18、项9.一种交联蛋白质的制造方法，其包括使项1所述的漆酶作用于蛋白质的工序。

19、项10.根据项9所述的制造方法，其在碱性条件下进行所述工序。

20、项11.根据项9或10所述的制造方法，其中，在上述工序中，在所述漆酶中并用选自3-(3,4-二羟基苯基)丙氨酸、儿茶素和咖啡酸中的介体(mediator)。

21、项12.一种经氧化改性的饮食品或饮食品用原材料、产业用原材料或产业废弃成分、或者医药或科学分析用原材料的制造方法，其包括使项1所述的漆酶作用于饮食品或饮食品用原材料、产业用原材料或产业废弃成分、或者医药或科学分析用原材料的工序。

22、发明效果

23、根据本发明，提供一种在包含碱性区域的ph区域中呈现优异的活性的漆酶。

技术特征：

1.一种漆酶，其特征在于，包含下述(a)～(c)中任一项所示的多肽：

2.一种dna，其特征在于，编码权利要求1所述的漆酶。

3.一种表达盒或重组载体，其特征在于，包含权利要求2所述的dna。

4.一种转化体，其特征在于，是使用权利要求3所述的表达盒或重组载体转化宿主而得到的。

5.一种漆酶的制造方法，其特征在于，包括培养权利要求4所述的转化体的工序。

6.一种酶制剂，其特征在于，包含权利要求1所述的漆酶。

7.根据权利要求6所述的酶制剂，其中，所述酶制剂用作蛋白质的交联剂。

8.根据权利要求6所述的酶制剂，其中，所述酶制剂用作饮食品或饮食品用原材料、产业用原材料或产业废弃成分、或者医药或科学分析用原材料的氧化改性剂。

9.一种交联蛋白质的制造方法，其特征在于，包括使权利要求1所述的漆酶作用于蛋白质的工序。

10.根据权利要求9所述的制造方法，其中，在碱性条件下进行所述工序。

11.根据权利要求9所述的制造方法，其中，在所述工序中，在所述漆酶中并用选自3-(3,4-二羟基苯基)丙氨酸、儿茶素和咖啡酸中的介体。

12.一种经氧化改性的饮食品或饮食品用原材料、产业用原材料或产业废弃成分、或者医药或科学分析用原材料的制造方法，其特征在于，包括使权利要求1所述的漆酶作用于饮食品或饮食品用原材料、产业用原材料或产业废弃成分、或者医药或科学分析用原材料的工序。

技术总结
本发明提供一种在包含碱性区域的pH区域中呈现优异活性的漆酶。包含来自Chrysocorona lucknowensis的漆酶的氨基酸序列的漆酶和以该氨基酸序列为基本骨架的序列类似的漆酶在包含碱性区域的pH区域中呈现优异的活性。

技术研发人员：谷内宽之,酒井杏匠
受保护的技术使用者：天野酶制品株式会社
技术研发日：
技术公布日：2024/1/25