一种西洋参皂苷类成分的高效提取和分析方法及应用

本发明涉及一种西洋参皂苷类成分的高效提取和分析方法及应用。

背景技术：

1、西洋参为五加科植物西洋参 panaxquinquefoliuml.的干燥根，具有补气养阴，清热生津。用于气虚阴亏，虚热烦倦，咳喘痰血，内热消渴，口燥咽干等多种功效，在我国山东、河北、吉林等地均广泛分布。现代药理研究表明，西洋参中具有降血糖、调节免疫力、抗疲劳、神经保护等多种药理活性，并且西洋参已被列入既是食品又是中药材的物质管理试点，即将作为原料进入食品领域，目前已广泛应用于功能食品、日化品等。西洋参中皂苷类成分为其主要活性物质，如《中国药典》规定人参皂苷rg1、re和rb1含量不低于2.0%。同时，西洋参中人参皂苷rc、rg2、rb3等成分含量较高，具有特殊的药理功效。因此，如何高效制备出高纯度人参皂苷单体，对于活性筛选、产品研发、质量控制，意义重大。西洋参中皂苷成分制备，通常采用聚酰胺色谱、硅胶柱色谱和sephadex lh-20等传统制备方法，具有分离时间长、重现性差、死吸附严重、溶剂消耗量大等缺点。制备液相色谱具有分离效率高、重现性好等优势，而对组分较杂的样品，该方法分离效率较低，样品前处理严格。

2、目前尚未有能够将西洋参所含有的皂苷成分分离提纯的方法。

技术实现思路

1、本发明提供一种西洋参皂苷类成分的高效提取和分析方法及应用，解决技术问题是对西洋参所含有的皂苷成分进行分离和提纯。

2、为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

3、一种西洋参皂苷类成分的高效提取方法，按照以下步骤进行：

4、1）西洋参总皂苷的制备：称取西洋参粗粉1份，加入质量是西洋参粗粉8倍的乙醇，加热至100℃回流提取2次，每次2 h，将两次提取液合并，减压回收乙醇，将样品蒸至浸膏，加入质量是西洋参粗粉1倍量的水进行分散，用与水等体积的石油醚萃取3次，然后用与水等体积的正丁醇萃取3次，将正丁醇萃取物减压浓缩，冷冻干燥，即得西洋参总皂苷；

5、2）梯度逆流色谱法分离纯化西洋参总皂苷：固定相为乙酸乙酯饱和的水，流动相a为水饱和的乙酸乙酯，流动相b为水饱和的正丁醇，设置梯度流速为0 min，90%a；180 min，75%a；190 min，60%a；300 min，60% a，高速逆流色谱仪柱体积为200～400，上样量50～400mg，转速600～1000 rpm，流速1～10 ml/min，检测器为蒸发光检测器，一次分离得到人参皂苷re和rb1两个单体，及四个混合组分；

6、液相色谱分离：将上述四个混合组分采用液相色谱法进行分离纯化，分离纯化条件为：流动相为乙腈-水，流速3.0 ml/min，50min，检测波长203 nm，制得人参皂苷rg1、乙酰基人参皂苷rg1、人参皂苷rb1、rc、rg2、rb3、西洋参皂苷r1、人参皂苷rd、绞股蓝皂苷x vii和三七皂苷fd9；

7、所述西洋参粗粉的细度为50～200目；

8、所述乙醇为95～98%的乙醇水溶液；

9、所述乙腈-水的体积比为36:64。

10、所述高速逆流色谱仪柱体积为300ml；上样量为150mg；转速为800rpm；流速为2.0ml/min。

11、一种西洋参皂苷类成分的分析方法，液相条件：c18柱，紫外检测波长203 nm，柱温：25℃，流速：1.0 ml/min，进样量：10 μl，洗脱溶剂为水（a）和乙腈（b），梯度条件为：0 min，22%乙腈；15 min，22%乙腈；25 min，60%乙腈；50 min，60%乙腈

12、所述c18柱是250 mm × 4.6 mm i.d., 2.5 μm。

13、一种西洋参皂苷类成分的应用，其特征在于，将权利要求1或2制备的西洋参皂苷应用于抗氧化或降低血糖。

14、发明具有以下有益技术效果：

15、1.在本专利中充分考虑了逆流色谱作为富集手段，创新性采用梯度逆流色谱模式，极大提高了分离效率。同时，结合制备液相色谱技术，实现了西洋参中主要皂苷类成分的快速制备。同时，将制备的皂苷类成分进行了活性筛选，为其在功能食品研发提供了技术支撑。

16、2.本发明的制备方法利用线性梯度逆流色谱进行宽 kd值化合物的分离纯化，最后经制备液相色谱分离得到11个单体化合物，成本低于现有技术，操作简便，效率高，可以较大批量分离制备出纯度大于98%的西洋参皂苷类单体化合物。

技术特征：

1.一种西洋参皂苷类成分的高效提取方法，按照以下步骤进行：

2.如权利要求1所述一种西洋参皂苷类成分的高效提取方法，其特征在于，所述高速逆流色谱仪柱体积为300ml；上样量为150mg；转速为800rpm；流速为2.0 ml/min。

3.如权利要求1或2所述一种西洋参皂苷类成分的分析方法，其特征在于，液相条件：c18柱，紫外检测波长203 nm，柱温：25℃，流速：1.0 ml/min，进样量：10 μl，洗脱溶剂为水（a）和乙腈（b），梯度条件为：0 min，22%乙腈；15 min，22%乙腈；25 min，60%乙腈；50 min，60%乙腈

4.如权利要求1或2所述一种西洋参皂苷类成分的应用，其特征在于，将权利要求1或2制备的西洋参皂苷应用于抗氧化或降低血糖。

技术总结
本发明公开了一种西洋参皂苷类成分的高效提取和分析方法及应用，采用乙醇对西洋参粗粉进行提取，得西洋参总皂苷，采用梯度逆流色谱法分离纯化西洋参总皂苷，采用液相色谱进一步分离纯化，即制得得到单个样品纯度高于95%的人参皂苷Rg1、乙酰基人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、Rc、Rg2、Rb3、西洋参皂苷R1、人参皂苷Rd、绞股蓝皂苷X VII、三七皂苷Fd9个单体。本申请可以有效提取西洋参皂苷类成分，并且将各成分进行分离，分离后的各单体纯度高。

技术研发人员：王岱杰,贾玉萍,陈启绪,孙蓉,黄娜娜,于红霞,崔莉,相宏杰,刘杰,陆世海,张大虎
受保护的技术使用者：齐鲁工业大学（山东省科学院）
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13