一种高效扩增NK细胞的方法与流程

本发明属于免疫学，尤其涉及一种高效扩增nk细胞的方法。

背景技术：

1、nk细胞也被称之为自然杀伤细胞，约占外周血淋巴细胞的10％-15％。nk细胞是连接机体固有免疫和获得性免疫的桥梁，nk细胞被激活后会通过分泌ifn-γ、穿孔素等效应分子作用于靶细胞，从而发挥对靶细胞的杀伤效应。而且，nk细胞在移植后不会引起宿主产生移植性宿主病。因此，nk在机体抗感染性疾病和恶性肿瘤的免疫监视过程中均发挥着重要的作用。

2、然而，由于nk细胞仅占外周血淋巴细胞中的很少一部分，因此nk细胞的免疫治疗受到限制，很难满足巨大的临床需求，因此实现体外快速扩增nk细胞是目前急需解决的问题。

3、nk细胞的主要功能之一是用于抑制肿瘤细胞，因此，本发明猜想是否抑制肿瘤的药物也同样可以发挥促进nk细胞的功能。本发明选择了3种可以对肿瘤细胞发挥抑制作用的左旋紫草素，蔓荆子黄素，大花旋覆花素来检测其中是否存在可以对nk细胞的增殖发挥促进作用的药物。

4、左旋紫草素的分子式为c16h16o5，分子量为288.3，cas号为：517-88-4，结构式为

5、

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种高效扩增nk细胞的方法。

2、为实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种高效扩增nk细胞的方法，所述方法包括如下步骤：

3、(1)将获取的nk细胞接种于细胞培养皿中；

4、(2)加入含有左旋紫草素的nk细胞培养基，将细胞培养皿置于细胞培养箱中进行培养；

5、(3)每隔2-3d进行一次换液，培养14d即可得到具有高杀伤率的nk细胞。

6、优选地，所述nk培养基中左旋紫草素的终浓度为0.5μmol/l-16μmol/l。

7、优选地，所述nk培养基中左旋紫草素的终浓度为4μmol/l。

8、优选地，所述左旋紫草素的cas号为：517-88-4。

9、第二方面，本发明提供了左旋紫草素在制备提高nk细胞扩增能力的培养基中的应用。

10、优选地，所述培养基中所述左旋紫草素的终浓度为0.5μmol/l-16μmol/l；

11、所述左旋紫草素的cas号为：517-88-4。

12、优选地，所述培养基中所述左旋紫草素的终浓度为4μmol/l。

13、第三方面，本发明提供了左旋紫草素在制备提高nk细胞杀伤活性的培养基中的应用。

14、优选地，所述培养基中所述左旋紫草素的终浓度为0.5μmol/l-16μmol/l；

15、所述左旋紫草素的cas号为：517-88-4；

16、所述左旋紫草素增加nk细胞中颗粒酶b和穿孔素的蛋白表达水平。

17、优选地，所述培养基中所述左旋紫草素的终浓度为4μmol/l。

18、本发明的有益效果在于：

19、本发明发现了能够有效的促进nk细胞扩增能力的左旋紫草素，同时本发明发现左旋紫草素能够提高nk细胞对于宫颈癌细胞hela细胞的杀伤率；

20、此外，本发明发现左旋紫草素能够有效的提高nk细胞中颗粒酶b和穿孔素的蛋白表达。

技术特征：

1.一种高效扩增nk细胞的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述nk培养基中左旋紫草素的终浓度为0.5μmol/l-16μmol/l。

3.根据权利要求2所示的方法，其特征在于，所述nk培养基中左旋紫草素的终浓度为4μmol/l。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述左旋紫草素的cas号为：517-88-4。

5.左旋紫草素在制备提高nk细胞扩增能力的培养基中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述培养基中所述左旋紫草素的终浓度为0.5μmol/l-16μmol/l；

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述培养基中所述左旋紫草素的终浓度为4μmol/l。

8.左旋紫草素在制备提高nk细胞杀伤活性的培养基中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述培养基中所述左旋紫草素的终浓度为0.5μmol/l-16μmol/l；

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述培养基中所述左旋紫草素的终浓度为4μmol/l。

技术总结
本发明提供了一种高效扩增NK细胞的方法,属于免疫学技术领域。本发明所提供的方法首先将获取的NK细胞接种于细胞培养皿中；接着加入含有左旋紫草素的NK细胞培养基，将细胞培养皿置于细胞培养箱中进行培养；之后每隔2‑3d进行一次换液，培养14d即可得到具有高杀伤率的NK细胞。

技术研发人员：王舒怡,魏国庆
受保护的技术使用者：青岛思拓新源细胞医学有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13