一种提高NK细胞杀伤功能的方法及应用

本发明涉及nk细胞培养，具体涉及一种提高nk细胞杀伤功能的方法及应用。

背景技术：

1、自然杀伤细胞(natural killer cell，nk细胞)是天然免疫系统的效应细胞，在抵御病原入侵以及抗肿瘤中至关重要。nk细胞因其具有无需预刺激即可杀伤细胞的特点受到关注，nk细胞除有强大的杀伤功能外，还能通过分泌细胞因子实现调节免疫功能。nk细胞可以通过直接或者间接的方式杀伤靶细胞。前者通过fas-fasl途径和tnf-α作用途径招募caspase8诱导靶细胞凋亡。而间接的杀伤方式包括分泌颗粒酶、穿孔素和干扰素。nk细胞的功能发挥主要通过细胞毒作用。目前，nk细胞在临床领域上的杀伤功能仍不够强大，尤其是nk细胞的抗肿瘤活性在免疫治疗领域仍需要进一步提高。目前，对于nk细胞在临床上的进一步使用，nk细胞的功能仍需进一步提高，因此，有必要研究一种提高nk细胞杀伤功能的方法，进而提高nk细胞的抗肿瘤功能。

技术实现思路

1、本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种提高nk细胞杀伤功能的方法及应用，从而提高nk细胞的抗肿瘤功能。

2、本发明的第一方面提供一种提高nk细胞杀伤功能的方法。

3、具体的，所述方法包括以下步骤：

4、(1)将血红素加氧酶1抗体加入nk细胞培养基，制得抗体培养基；

5、(2)将抗体培养基进行无菌过滤处理；

6、(3)分离nk细胞置于抗体培养基中培养。

7、优选的，步骤(1)中，所述血红素加氧酶1抗体的克隆号为ep1391y,抗体购于abcam。

8、优选的，步骤(1)中，所述抗体培养基中血红素加氧酶1抗体的终浓度为9.5μg/ml-10.5μg/ml。

9、进一步优选的，步骤(1)中，所述抗体培养基中血红素加氧酶1抗体的终浓度为10μg/ml。

10、优选的，步骤(1)中，所述nk细胞培养基为dmem培养基中加入10％胎牛血清ml和1000u/ml il-2。

11、优选的，步骤(2)中，所述无菌过滤处理使用灭菌抽滤瓶或针头式过滤器。

12、优选的，所述无菌过滤处理通过的孔径为0.22μm。

13、优选的，步骤(3)中，所述nk细胞为小鼠脾脏nk细胞。

14、优选的，所述小鼠为8周龄c57/bl6小鼠。

15、优选的，步骤(3)中，所述nk细胞置于抗体培养基中处理48h。

16、优选的，步骤(3)中，所述nk细胞的培养在细胞培养箱中进行。

17、本发明的第二方面提供一种提高nk细胞杀伤功能的方法在nk细胞培养中的应用。

18、相对于现有技术，本发明的有益效果如下：

19、本发明通过添加血红素加氧酶1抗体处理nk细胞，阻断nk细胞中血红素加氧酶1的表达或抑制血红素加氧酶1活性有效物质。经血红素加氧酶1抗体处理后，可促进nk细胞颗粒酶b和穿孔素的分泌，并提高nk细胞对靶细胞yac-1和k562的杀伤作用，从而提高nk细胞的抗肿瘤功能。

技术特征：

1.一种提高nk细胞杀伤功能的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述血红素加氧酶1抗体的克隆号为ep1391y。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述抗体培养基中血红素加氧酶1抗体的浓度为9.5μg/ml-10.5μg/ml。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述nk细胞培养基为dmem培养基中加入10％胎牛血清和1000u/ml il-2。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，使用灭菌抽滤瓶或针头式过滤器进行所述无菌过滤处理。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述无菌过滤处理通过的孔径为0.22μm。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述nk细胞为小鼠脾脏nk细胞。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述小鼠为8周龄c57/bl6小鼠。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述nk细胞置于抗体培养基中处理48h。

10.一种血红素加氧酶1抗体在nk细胞培养中的应用。

技术总结
本发明涉及NK细胞培养技术领域，公开了一种提高NK细胞杀伤功能的方法及应用。该方法包括以下步骤：(1)将血红素加氧酶1抗体加入NK细胞培养基，制得抗体培养基；(2)将抗体培养基进行无菌过滤处理；(3)分离NK细胞置于抗体培养基中培养。本发明通过添加血红素加氧酶1抗体处理NK细胞，阻断NK细胞中血红素加氧酶1的表达或抑制血红素加氧酶1活性有效物质。经血红素加氧酶1抗体处理后，可促进NK细胞颗粒酶B和穿孔素的分泌，并提高NK细胞对靶细胞Yac‑1和K562的杀伤作用，从而提高NK细胞的抗肿瘤功能。

技术研发人员：曾小康,姚婕
受保护的技术使用者：南方医科大学顺德医院（佛山市顺德区第一人民医院）
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12