一种抗金黄色葡萄球菌肠毒素B的全人源SEB单克隆抗体及其应用

本发明涉及免疫领域，具体涉及一种抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的全人源seb单克隆抗体，还涉及抗体的应用。

背景技术：

1、金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)是一种广泛流行，引起医院和社区感染的一种重要病原微生物，呈多重耐药和高度耐药传播蔓延。其感染以急性和化脓性为主，全身性感染能够导致急性肺炎、心内膜炎、脓毒性关节炎、骨髓炎、脓毒血症等多种严重感染和并发症。长期的抗生素滥用使得金葡菌耐药的问题日益加剧和突出，作为“超级细菌”的典型代表，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcusaureus,mrsa)能够分泌多种毒素破坏正常的体液免疫和细胞免疫并重塑宿主的免疫环境，从而实现免疫逃逸并给人体造成严重的损伤。

2、金黄色葡萄球菌肠毒素b是金黄色葡萄球菌最常见和强力的超抗原之一，可与人类的主要组织相容性复合物(mhc)ii类分子的α链和t细胞受体(tcr)的特定vβ区域结合并形成三元复合物，导致单核细胞/巨噬细胞和t淋巴细胞的大量增殖和活化，并诱导高水平的促炎细胞因子和趋化因子。全身炎症因子可能会导致对患者潜在致命的中毒性休克综合征(toxic shock syndrome，tss)。此外，seb与食物中毒密切相关，能够引发呕吐、腹痛和腹泻等症状。由于seb容易使用基因工程技术大量生产，具有气溶胶稳定性，可作为致死和致残剂，是理想的生物毒素，被疾病预防控制中心(cdc)归类为b类选生物战剂。与此同时，我们仍缺乏对受影响人群进行大规模治疗的有效医疗对策，对seb的担忧更加复杂。

3、当前，针对seb还没有批准的疫苗或者特定的抗体疗法，前期研究发现了包括小分子治疗剂，疫苗和单克隆抗体等多种潜在的治疗方法。其中，能够立刻发挥作用的单克隆抗体是一种有效的免疫疗法，能够代表紧急干预相关的感染的最佳方法，也可能是无法正确接种疫苗的免疫缺陷患者的最佳选择，代表着缓解和治疗seb引起的中毒性休克综合征和金黄色葡萄球菌感染的可能。对于金黄色葡萄球菌耐药引起的严峻形势和金黄色葡萄球菌肠毒素b的巨大威胁，所述针对金黄色葡萄球菌肠毒素b的抗体可以帮助降低金黄色葡萄球菌感染的严重性，治疗肠毒素b引起的生物毒性，还可以使用这些抗体检测金黄色葡萄球菌肠毒素分型。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的全人源seb单克隆抗体；本发明的目的之二在于提供编码所述全人源seb单克隆抗体的核酸分子；本发明的目的之三在于提供含有所述核酸分子的重组表达载体；本发明的目的之四在于提供含有所述的核酸分子的重组表达载体的宿主细胞；本发明的目的之五在于提供所述全人源seb单克隆抗体在制备特异性结合金黄色葡萄球菌肠毒素b的试剂中的应用；本发明的目的之六在于提供所述全人源seb单克隆抗体在制备治疗或辅助治疗金黄色葡萄球菌感染的药物中的应用。

2、为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、1、一种抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的全人源seb单克隆抗体，其特征在于：所述全人源seb单克隆抗体包括重链和轻链，所述重链的可变区cdr1,cdr2和cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.5、seq id no.6和seq id no.7所示；所述轻链的可变区cdr1和cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.9和seq id no.10所示，轻链的可变区cdr2氨基酸序列为asp thrlys。

4、本发明优选的，所述重链的氨基酸序列如seq id no.4所示；所述轻链的氨基酸序列如seq id no.8所示。

5、本发明优选的，所述抗体的恒定区包括人源igm、iga或igg恒定区中的任意一种,所述抗体为单克隆抗体，为人源抗体，人抗体或单结构域抗体。此单克隆抗体的重链可以选自同种型igm、iga、或igg，优选地igg。

6、本发明的，本发明的单克隆抗体的轻链可以是κ型或λ型的，在一个优选的实例中轻链是λ型的。

7、本发明优选的，所述全人源seb单克隆抗体特异结合金黄色葡萄球菌肠毒素b全长氨基酸或部分氨基酸序列，所述金黄色葡萄球菌肠毒素b的全长氨基酸如seq id no.1所示。

8、本发明优选的，所述全人源seb单克隆抗体以不高于5×10-8的平衡解离常数kd与金黄色葡萄球菌肠毒素b结合，如：1×10-9m、1×10-10m、1×10-11m或更小的kd与金黄色葡萄球菌肠毒素b解离。其中，术语“kd”是指特定抗体-抗原相互作用的平衡解离常数，表示处于平衡状态时抗体和抗原的解离程度。kd越小说明解离越小，代表抗体与抗原间的亲和力越强。

9、本发明中，单克隆抗体自感染金黄色葡萄球菌的血液淋巴细胞生成，并且如此生成具有高亲和力的天然精制的且选定的抗体以实现中和针对感染的有效保护。

10、2、编码所述全人源seb单克隆抗体的核酸分子。

11、3、含有所述核酸分子的重组表达载体。

12、4、含有所述的核酸分子的重组表达载体的宿主细胞。所述宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有：大肠杆菌，链霉菌属；鼠伤寒沙门氏菌的细菌细胞；真菌细胞如酵母；果蝇s2或sf9的昆虫细胞；cho、cos7、293细胞的动物细胞等。特别优选的是人生产细胞系。

13、5、所述全人源seb单克隆抗体在制备特异性结合金黄色葡萄球菌肠毒素b的试剂中的应用。

14、6、所述全人源seb单克隆抗体在制备治疗或辅助治疗金黄色葡萄球菌感染的药物中的应用。

15、本发明的有益效果在于：本发明通过分选单个浆细胞，将分离到的分泌抗seb的全人源单克隆抗体，因此可以从分离的浆细胞分离到抗seb的全人源单克隆抗体的基因序列，将分离到的基因序列构建表达载体，并通过在宿主细胞中表达来生产单克隆抗体，生成的单克隆抗体被分泌到上清液中，通过层析技术将其纯化。得到的看克隆抗体能够与金黄色葡萄球菌肠毒素b特异结合，可以作为检测金黄色葡萄球菌的抗体，得到的抗体还可治疗由mrsa感染引起的脓毒血症，在预防和治疗金黄色葡萄球菌感染方面有重要意义。

技术特征：

1.一种抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的全人源seb单克隆抗体，其特征在于：所述全人源seb单克隆抗体包括重链和轻链，所述重链的可变区cdr1,cdr2和cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.5、seq id no.6和seq id no.7所示；所述轻链的可变区cdr1和cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.9和seq id no.10所示，轻链的可变区cdr2氨基酸序列为asp thrlys。

2.根据权利要求1所述抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的全人源seb单克隆抗体，其特征在于：所述重链的氨基酸序列如seq id no.4所示；所述轻链的氨基酸序列如seq id no.8所示。

3.根据权利要求1所述抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的全人源seb单克隆抗体，其特征在于：所述抗体的恒定区包括人源igm、iga或igg恒定区中的任意一种。

4.根据权利要求1所述抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的全人源seb单克隆抗体，其特征在于：所述全人源seb单克隆抗体特异结合金黄色葡萄球菌肠毒素b全长氨基酸或部分氨基酸序列，所述金黄色葡萄球菌肠毒素b的全长氨基酸如seq id no.1所示。

5.根据权利要求1-4任一项所述抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的全人源seb单克隆抗体，其特征在于：所述全人源seb单克隆抗体以不高于5×10-8的平衡解离常数kd与金黄色葡萄球菌肠毒素b结合。

6.编码权利要求1-5任一项所述全人源seb单克隆抗体的核酸分子。

7.含有权利要求6所述核酸分子的重组表达载体。

8.含有权利要求7所述的核酸分子的重组表达载体的宿主细胞。

9.权利要求1-5任一项所述全人源seb单克隆抗体在制备特异性结合金黄色葡萄球菌肠毒素b的试剂中的应用。

10.权利要求1-5任一项所述全人源seb单克隆抗体在制备治疗或辅助治疗金黄色葡萄球菌感染的药物中的应用。

技术总结
本发明公开了一种抗金黄色葡萄球菌肠毒素B的全人源SEB单克隆抗体及其应用，该抗体重链的可变区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ IDNO.7所示；轻链的可变区CDR1、CDR2、CDR3氨基酸序列如SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11所示；该抗体能够特异结合金黄色葡萄球菌肠毒素B，可以用于治疗、预防或诊断金黄色葡萄球菌感染和肠毒素B导致的毒性休克综合征的用途，将可成为“非抗生素”治疗耐药金黄色葡萄球菌感染和控制耐药性发展研究领域的重要方向。

技术研发人员：曾浩,范鸿胤,赵莉群,敬海明,杨赟,赵安妮,宋振,邹全明,鲁东水,张卫军
受保护的技术使用者：中国人民解放军陆军军医大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12