一种砹211标记的奥曲肽化合物及其制备方法和应用与流程

本发明涉及放射性核素标记，尤其是一种砹211标记的奥曲肽化合物及其制备方法和应用。

背景技术：

1、小细胞肺癌是一种具有高度恶性的神经内分泌肿瘤。放疗、化疗是治疗小细胞肺癌的基本手段，在治疗初期对化疗药物高度敏感，但其特点是复发快、早期广泛转移、预后差。由于治疗方案有限，小细胞肺癌患者的预后很差，迫切需要更有效的小细胞肺癌治疗方案。大多数小细胞肺癌细胞表面高表达的受体（sstr）为多肽-受体介导的放射性核素治疗（prrt）提供了一个重要靶点。

2、在放射性核素中，阿尔法（α）核素其let值为50~230 kev/µm，其相对生物效应是贝塔（β）核素的3~7倍，表现为dna双链在有丝分裂或再分配过程中的不可修复的断裂。一般辐射范围为28~100 µm，相当于6~8个真核细胞的直径（10~50 µm）。α核素可诱导不可损伤修复的dna损伤，但不损伤周围正常组织，使其成为最有效的细胞杀伤效应制剂。在诸多阿尔法核素中，砹211（211at）是半衰期只有7.2 h的放射性卤素，其极具潜力的特性早已被公认；化学性质独特，适合标记的靶向载体范围广，可从有机小分子到蛋白质，并且每次衰变仅发射一个α粒子，对“脱靶毒性”有更好的掌控。

3、奥曲肽（oct）是一种通过对天然体细胞生长素进行人工修饰而合成的八肽。肽的序列是d-phe-cys-phe-d-trp-lys-thr-cys-thr-ol（二硫桥cys2-cys7）。奥曲肽的结构中引入了d型氨基酸，增强了抗酶降解的能力，在体内的作用时间可达到2小时。大多数奥曲肽抑制的肿瘤细胞表面有一个或多个sstr，其中sstr2最为常见。奥曲肽和放射性核素的共轭物n-琥珀酰亚胺-3-三正丁基锡-苯甲酸酯（m-meate）可以特异性地与sstr2结合，通过内吞作用进入肿瘤细胞，进行体内靶向放射治疗。

4、目前研究者们已经探索了许多基于肽与β放射性核素相结合的方法，在早期，钇90（90y）被标记在奥曲肽上，发挥治疗作用。近年来，研究人员发现177lu等治疗性核素的辐射能量和半衰期比90y更适合肿瘤治疗。镥177（177lu）可以释放β射线用于治疗，其最大的β射线组织穿透力约为2毫米，适用于小肿瘤，但其在治疗弥漫性微转移肿瘤中的应用仍然受到很大限制。

5、综上所述，上述技术目前存在以下不足：1. β核素标记的奥曲肽所含有的治疗性核素的辐射能量不足；2. β核素其在治疗弥漫性微转移肿瘤中的应用受到很大限制；3.传统放疗和化疗会受到肿瘤微环境缺氧的限制。

技术实现思路

1、为了解决上述技术问题，本发明提供一种211at标记的奥曲肽化合物及其制备方法和应用，用于解决β核素其在治疗弥漫性微转移肿瘤中的应用受到很大限制的问题，且不依赖肿瘤微环境中的氧浓度，克服传统放疗和化疗会受到肿瘤微环境缺氧的限制。

2、本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

3、一种211at标记的奥曲肽化合物的制备方法，包含如下步骤：

4、 （1）将5 mg/ml的奥曲肽溶于0.1 mol/l，ph=7.6磷酸盐缓冲液，与26 mmol/l的溶解于二甲基亚砜的n-琥珀酰亚胺-3-三正丁基锡-苯甲酸酯结合，得到混合物；

5、 （2）将步骤（1）中混合物在室温下孵育30分钟；

6、 （3）随后，用葡聚糖凝胶柱g-10在pbs中分离出oct-m-meate，然后在211at标记前通过添加乙酸调整到ph5.5；

7、 （4）将oct-m-meate与20 µl 20 mg/ml 溶于甲醇的n-氯代丁二酰亚胺溶液一起加入约370 mbq na211at溶液中，反应混合物在室温下孵育5分钟；

8、 （5）最后，加入20ul 40mg/ml焦亚硫酸钠水溶液，终止标记反应。使用葡聚糖凝胶柱g-10在pbs中分离出211at标记的奥曲肽化合物（[211at]sab-oct）。

9、作为优选，所述步骤（1）中奥曲肽与n-琥珀酰亚胺-3-三正丁基锡-苯甲酸酯的用量比为50~100μl：8~20μl。

10、作为优选，所述步骤（1）中二甲基亚砜溶液中n-琥珀酰亚胺-3-三正丁基锡-苯甲酸酯和二甲基亚砜的用量比为8~20μl:10~20μl。

11、作为优选，所述步骤（4）形成的反应混合物中211at、n-氯代丁二酰亚胺和n-琥珀酰亚胺-3-三正丁基锡-苯甲酸酯水溶液的用量比为148~370mbq：100μl：8~20μl。

12、本发明还提供了按上述步骤制备的211at标记的奥曲肽化合物。

13、本发明还提供了上述211at标记的奥曲肽化合物在肿瘤治疗上的应用。

14、本发明有益效果是，

15、 1、本发明中211at标记的奥曲肽化合物利用α核素211at的高let等特性解决β核素其在治疗弥漫性微转移肿瘤中的应用受到很大限制等问题，显著提高单位吸收剂量的细胞死亡率，减少骨髓毒性，并限制辐射的过度暴露。2、211at标记的奥曲肽化合物能够诱发辐射引起的旁观者效应或交火效应，提高抗肿瘤效率。3、211at标记的奥曲肽化合物对缺氧细胞的作用与正常氧细胞相似，避免了肿瘤异质性对放疗的耐受性，克服了传统放疗和化疗的不足。

技术特征：

1.一种211at标记的奥曲肽化合物的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种211at标记的奥曲肽化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中奥曲肽与n-琥珀酰亚胺-3-三正丁基锡-苯甲酸酯的用量比为50~100μl：8~20μl。

3.根据权利要求1所述的一种211at标记的奥曲肽化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中二甲基亚砜溶液中n-琥珀酰亚胺-3-三正丁基锡-苯甲酸酯和二甲基亚砜的用量比为8~20μl:10~20μl。

4.根据权利要求1所述的一种211at标记的奥曲肽化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）形成的反应混合物中211at、n-氯代丁二酰亚胺和n-琥珀酰亚胺-3-三正丁基锡-苯甲酸酯水溶液的用量比为148~370mbq：100μl：8~20μl。

5.根据权利要求1至4任意一项所述的一种211at标记的奥曲肽化合物的制备方法，其特征在于，根据上述步骤制备的211at标记的奥曲肽化合物。

6.根据权利要求5所述的一种211at标记的奥曲肽化合物，其特征在于，上述211at标记的奥曲肽化合物在肿瘤治疗上的应用。

技术总结
本发明公开一种<supgt;211</supgt;At标记的奥曲肽化合物的制备方法，包含如下步骤：将5 mg/mL的奥曲肽溶于0.1 mol/L，PH=7.6磷酸盐缓冲液，与26 mmol/L的溶解于二甲基亚砜的N‑琥珀酰亚胺‑3‑三正丁基锡‑苯甲酸酯结合得到混合物；将混合物在室温下孵育30分钟；用葡聚糖凝胶柱G‑10在PBS中分离出Oct‑m‑MeATE，在<supgt;211</supgt;At标记前通过添加乙酸调整到pH5.5；将Oct‑m‑MeATE与20µL 20 mg/mL溶于甲醇的N‑氯代丁二酰亚胺溶液一起加入约370 MBq Na<supgt;211</supgt;At溶液中，反应混合物在室温下孵育5分钟；加入20uL 40mg/mL焦亚硫酸钠水溶液，终止标记反应，使用葡聚糖凝胶柱G‑10在PBS中分离出<supgt;211</supgt;At标记的奥曲肽化合物。还提供该化合物在肿瘤治疗上应用。本发明显著提高单位吸收剂量的细胞死亡率，减少骨髓毒性，克服传统放疗和化疗受到肿瘤微环境缺氧的限制。

技术研发人员：余飞,秦珊珊,张佳佳,张涵,张升虹
受保护的技术使用者：上海市第十人民医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/11