一种用于预测肝癌患者免疫治疗疗效的三联标志物及用途

本发明创造属于生物医药，尤其是涉及一种用于预测肝癌患者免疫治疗疗效的三联标志物及应用。

背景技术：

1、肝癌是全球第六大原发性癌症，也是世界癌症相关死亡的第四大原因。其中，肝细胞癌(hcc)约占肝癌的90％。由于其发病隐匿，80％以上的患者确诊时已为中晚期，致使hcc的治疗成为重大的医疗负担。既往肝癌的治疗是以手术治疗为主的综合治疗模式，其中包括射频消融、介入治疗、靶向治疗、化疗、放疗等。

2、自2017年以来，免疫检查点抑制剂包括靶向pd-1/pd-l1和ctla-4的单克隆抗体逐渐被fda批准应用于晚期hcc的二线治疗。随后免疫检查点抑制剂联合抗血管生成治疗被证实相较于传统一线治疗可改善患者生存，并被批准应用为晚期hcc患者的一线治疗药物。尽管免疫治疗在晚期hcc治疗中取得了重大进展，但只有约15-20％的肝癌患者对免疫治疗有响应，因此在使用免疫药物之前进行是否响应的预测从而改善患者的预后，具有重要意义。

技术实现思路

1、针对现有技术中的上述技术问题，本发明提供了一种用于预测肝癌患者免疫治疗疗效的三联标志物及其应用。

2、本发明提供了一种用于预测肝癌患者免疫治疗疗效的三联标志物，所述标志物为spp1、cd68和col1a1。为肝癌患者免疫治疗后是否响应提供可靠的预测工具，即检测spp1/cd68/col1a1的表达判断是否可用免疫治疗，如果spp1、cd68和col1a1在肝癌肿瘤边界共表达，为免疫治疗不响应；如果spp1、cd68和col1a1在肝癌肿瘤边界不表达，为免疫治疗响应。

3、本发明中spp1(分泌磷酸蛋白)，又称为骨桥蛋白(osteopontin，opn)，是一种具有多种功能的分泌性酸性糖蛋白。研究表明，靶向spp1可以治疗多种疾病比如类风湿性关节炎、多发性硬化症、肝纤维化等等。

4、cd68是一种高度糖基化的ⅰ型跨膜糖蛋白，是目前常规应用最广泛的巨噬细胞标记物。它在巨噬细胞的吞噬活动，胞内溶酶体的新陈代谢，胞外的细胞与细胞以及细胞与病原体间的相互作用中发挥功能。

5、col1a1，ⅰ型胶原α1链(collagen typeⅰalpha1 chain)，是细胞外基质的主要成分，在肺癌、乳腺癌、结直肠癌等多种恶性肿瘤中高度表达，在调控一些癌细胞生理状态中具有重要作用。

6、本发明的第二个发明目的是提供一种上述三联标志物的用途，用于制备预测肝癌患者免疫治疗疗效的产品，所述产品中包含spp1、cd68和col1a1的试剂。

7、进一步方案，所述产品包括10×genomics公司空间转录组测序试剂盒。空间转录组测序试剂盒为现有产品，可为10×genomics公司生产的空间转录组测序试剂盒。

8、本发明的第三个发明目的是提供一种应用三联标志物预测肝癌患者免疫治疗疗效的方法，包括以下步骤：

9、s1、收集手术切除的新鲜肝癌组织样本，用包埋剂包埋并切片，然后通过苏木精-伊红染色进行组织学成像；

10、s2、将切片放置在空间转录组芯片上，对其进行固定和透化释放组织内mrna，然后进行测序，对得到的测序数据进行分析处理得到空间特征表达图；

11、s3、当空间特征表达图中spp1、cd68和col1a1在肝癌肿瘤边界共表达，为免疫治疗不响应；当spp1、cd68和col1a1在肝癌肿瘤边界不表达，为免疫治疗响应。

12、进一步方案，步骤s2中所述的分析处理包括如下步骤：

13、(1)对测序数据由软件space ranger对测序数据进行质控和绘图；

14、(2)使用r软件中的seurat包分析生成基因点矩阵；

15、(3)使用bayespace软件包中的“spatialenance”功能增强斑点，使用“enhancefeatures”功能增强表达特征；

16、(4)然后使用seurat软件包中的“spatial feature plot”功能生成空间特征表达图。

17、进一步方案，步骤s2中所述的测序是指应用10×genomics visium和illumina测序平台对样本进行高通量测序。

18、相对于现有技术，本发明创造具有以下优势：

19、本发明首次发现spp1/cd68/col1a1可用于预测肝癌患者的免疫治疗疗效，通过检测spp1/cd68/col1a1的表达判断是否可用免疫治疗，当spp1、cd68和col1a1于肝癌肿瘤边界的共表达，为免疫治疗不响应；当spp1、cd68和col1a1于肝癌肿瘤边界不表达，为免疫治疗响应。从而避免无效用药，错过最佳治疗时间。该发明能够快速方便实现治疗前筛查，检测周期短，具有广泛的应用价值。并且在更多的肝癌患者中验证了该标志物的有效性，并在同一个患者癌旁中未发现到该三联标志物。

技术特征：

1.一种用于预测肝癌患者免疫治疗疗效的三联标志物，其特征在于：所述三联标志物为spp1、cd68和col1a1。

2.一种如权利要求1所述的三联标志物的用途，其特征在于：用于制备预测肝癌患者免疫治疗疗效的产品，所述产品中包含spp1、cd68和col1a1的试剂。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述产品包括空间转录组测序试剂盒。

4.一种应用如权利要求1所述的三联标志物预测肝癌患者免疫治疗疗效的方法，其特征在于：包括以下步骤：

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤s2中所述的分析处理包括如下步骤：

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤s2中所述的测序是指应用10×genomics visium和illumina测序平台对样本进行高通量测序。

技术总结
本发明公开了一种用于预测肝癌患者免疫治疗疗效的三联标志物及用途，所述三联标志物为SPP1、CD68和COL1A1。所述的三联标志物的用途是用于制备预测肝癌患者免疫治疗疗效的产品，所述产品中包含SPP1、CD68和COL1A1的试剂。本发明通过检测SPP1/CD68/COL1A1的表达判断是否可用免疫治疗，即当SPP1、CD68和COL1A1在肝癌肿瘤边界共表达，为免疫治疗不响应；当SPP1、CD68和COL1A1在肝癌肿瘤边界不表达，为免疫治疗响应。从而避免无效用药，错过最佳治疗时间。该发明能够快速方便实现治疗前筛查，检测周期短，具有广泛的应用价值。

技术研发人员：刘尧,王嘉倍,胡青松,刘连新
受保护的技术使用者：安徽省立医院（中国科学技术大学附属第一医院）
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12