一种利用高速逆流色谱制备草乌甲素的方法

本发明涉及天然产物，具体涉及一种利用高速逆流色谱制备草乌甲素的方法。

背景技术：

1、滇西乌头（学名：aconitum bulleyanum diels），毛茛科乌头属植物。滇西乌头的主要的活性成分之一为草乌甲素（bulleyaconitine a，c35h49no10，m+ 643，结构式如式i所示），具有中枢镇痛和外周镇痛的双重药理作用，且镇痛时间长、无成瘾性的特点，其副作用小，对各重要器官无明显损伤、无致畸作用，临床主要用于带状疱疹及癌症晚期疼痛、风湿及类风湿关节炎、肩周炎及良性关节痛等急慢性疼痛疾患的治疗，效果显著。

2、式i。

3、中国专利cn1054976a、cn101555227a、cn101830849a、cn102775349a、cn102924376a、cn104326981a、cn106008344a、cn107245054a以及现有技术“袁梅. 滇西乌头的生药及化学成分的研究[d]. 云南中医学院, 2012.”均公开了草乌甲素的分离方法。上述方法除“滇西乌头的生药及化学成分的研究”仅采用柱色谱分离纯化外，其他方法均采用柱色谱和重结晶联用的分离纯化方法。然而，柱色谱以及重结晶耗时长，导致草乌甲素的分离效率低。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种利用高速逆流色谱制备草乌甲素的方法，本发明提供的方法能够从滇西乌头中高效、大批量地分离得到草乌甲素。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种利用高速逆流色谱制备草乌甲素的方法，包括以下步骤：

4、将含草乌甲素的粗提物进行高速逆流色谱分离，得到草乌甲素；所述高速逆流色谱分离采用的两相溶剂体系为烷烃-乙酸乙酯-醇-水体系；所述烷烃包括石油醚和/或正己烷；所述醇包括甲醇和/或乙醇；所述两相溶剂体系的上相为固定相，下相为流动相。

5、优选地，所述两相溶剂体系中烷烃、乙酸乙酯、醇和水的体积比为（1.5~3.5）：（1.5~3.5）：（1.5~3.5）：（1.5~3.5）。

6、优选地，所述高速逆流色谱分离条件包括：温度为20~30℃；主机的转速为500~1000r/min；所述流动相的流速为5~20ml/min；检测波长为254nm。

7、优选地，所述含草乌甲素的粗提物的制备方法包括以下步骤：

8、将滇西乌头根茎依次进行酸浸和醇提，得到提取液；

9、将所述提取液进行酸化，得到酸化提取液；

10、将所述酸化提取液进行碱化，得到碱化提取液；

11、将所述碱化提取液进行萃取后浓缩，得到含草乌甲素的粗提物；所述萃取采用的萃取剂包括酯类溶剂和/或卤代烷烃类溶剂。

12、优选地，所述酸浸采用的酸溶液包括盐酸溶液和/或硫酸溶液，所述酸溶液的质量浓度为36~38%。

13、优选地，所述酸浸的时间为8~15h。

14、优选地，所述醇提采用的溶剂为乙醇溶液，所述乙醇溶液的体积分数为50~95%。

15、优选地，所述醇提的温度为50~80℃，醇提的次数为2~4次，单次醇提的时间为1~4h。

16、优选地，所述酸化采用的酸溶液包括盐酸溶液和/或硫酸溶液；所述酸化提取液的ph值为2~3。

17、优选地，所述碱化采用的碱包括氨、二乙胺和三乙胺中的一种或几种；所述碱化提取液的ph值为8~10。

18、本发明提供了一种利用高速逆流色谱制备草乌甲素的方法，包括以下步骤：将含草乌甲素的粗提物进行高速逆流色谱分离，得到草乌甲素；所述高速逆流色谱分离采用的两相溶剂体系为烷烃-乙酸乙酯-醇-水体系，所述两相溶剂体系中烷烃、乙酸乙酯、醇和水的体积比为（1.5~3.5）：（1.5~3.5）：（1.5~3.5）：（1.5~3.5）；所述烷烃包括石油醚和/或正己烷；所述醇包括甲醇和/或乙醇；所述两相溶剂体系的上相为固定相，下相为流动相。重结晶法存在耗时长，分离效率低的问题。柱色谱分离法采用硅胶或氧化铝为固定相，采用不同极性的有机溶剂对样品进行洗脱进而分离得到目标化合物。然而，柱色谱分离耗时长，分离效率低；洗脱剂和固定相的用量大，且固定相对样品的吸附力强且不可逆，导致固定相不能被重复利用，分离成本高。而本发明采用高速逆流色谱技术（hsccc），固定相以及流动相均为溶剂，无需使用任何固体的固定相，通过控制两相溶剂体系，即可快速、高效地通过液液分配色谱分离得到草乌甲素；两相溶剂体系用量少，对于样品没有吸附，使得两相溶剂体系能够重复利用，大大降低了草乌甲素的分离纯化成本。而且，本发明采用的高速逆流色谱法对草乌甲素的分离量大，分离效率高，对样品无损耗，重现性好，操作简单，分离环境缓和的特点，适宜工业化生产。

19、本发明通过控制两相溶剂体系中烷烃、乙酸乙酯、醇和水的体积比进一步提高了草乌甲素的纯度。如实施例测试结果所示，本发明仅对含草乌甲素的粗提物进行高速逆流色谱分离即可得到纯度在99.49%以上的草乌甲素。

技术特征：

1.一种利用高速逆流色谱制备草乌甲素的方法，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述两相溶剂体系中烷烃、乙酸乙酯、醇和水的体积比为（1.5~3.5）：（1.5~3.5）：（1.5~3.5）：（1.5~3.5）。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述高速逆流色谱分离条件包括：温度为20~30℃；主机的转速为500~1000r/min；所述流动相的流速为5~20ml/min；检测波长为254nm。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含草乌甲素的粗提物的制备方法包括以下步骤：

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述酸浸采用的酸溶液包括盐酸溶液和/或硫酸溶液，所述酸溶液的质量浓度为36~38%。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述酸浸的时间为8~15h。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述醇提采用的溶剂为乙醇溶液，所述乙醇溶液的体积分数为50~95%。

8.根据权利要求4或7所述的方法，其特征在于，所述醇提的温度为50~80℃，醇提的次数为2~4次，单次醇提的时间为1~4h。

9.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述酸化采用的酸溶液包括盐酸溶液和/或硫酸溶液；所述酸化提取液的ph值为2~3。

10.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述碱化采用的碱包括氨、二乙胺和三乙胺中的一种或几种；所述碱化提取液的ph值为8~10。

技术总结
本发明提供了一种利用高速逆流色谱制备草乌甲素的方法，属于天然产物技术领域。本发明采用高速逆流色谱分离法，以烷烃‑乙酸乙酯‑醇‑水体系作为两相溶剂体系，其中，烷烃包括石油醚和/或正己烷，醇包括甲醇和/或乙醇，两相溶剂体系的上相为固定相，下相为流动相。本发明提供的方法能够快速、高效制备得到草乌甲素，草乌甲素的分离量大、无损耗、收率高、纯度高；而且，本发明提供的方法，具有操作简便、重现性好和分离环境缓和的特点。进一步地，本发明通过控制烷烃、乙酸乙酯、醇和水的体积比能够得到高纯度的草乌甲素。

技术研发人员：董泽军,肖雪蓉,张凌
受保护的技术使用者：中国科学院昆明植物研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12