一种绣球菌多糖及其制备方法和应用与流程

本发明涉及生物医药，具体涉及一种绣球菌多糖及其制备方法和应用，特别涉及绣球菌多糖在促进成骨细胞增殖中的应用。

背景技术：

1、骨质疏松为中老年人群常见慢性病，尤其是中老年女性骨质疏松症更为普遍，患病后容易出现骨质疏松性疼痛，极大地增加了骨折的风险，严重影响中老年人群的生活质量。骨质疏松症的主要病理特征为骨量减少及骨微结构退化，成骨细胞是一种功能性细胞并可在骨形成过程中发挥重要作用。

2、目前治疗骨质疏松症的常用药物有抗骨代谢类药物，如雌激素、选择性雌激素受体调节剂、双磷酸盐类、降钙素类等；促骨合成类药物，如甲状旁腺激素类药物。这些药物虽然有一定疗效，但是也存在着副作用的风险，如：雌激素与子宫内膜癌、乳腺癌之间的关系仍然存在着争议；结合型雌激素会明显升高hdl胆固醇水平；双膦酸盐类药物容易产生颌骨坏死、肌肉骨骼痛、食道癌、肾功能衰竭不良反应等。

3、有研究表明，大型真菌及某些活性成分在提高骨密度、缓解骨质疏松性疼痛等方面具有显著作用。近年来，真菌多糖因其结构多样性和多种生物学功能而受到广泛关注。现有技术中，常采用超声辅助法和酶辅助法提取大型真菌多糖。其中，超声辅助法提取大型真菌多糖的工艺是：大型真菌粉末→超声波处理浸提→抽滤除渣→离心(8 000r/min，10min)→取上清液→在上清液中加入5％三氯乙酸至提取液不混浊(除蛋白)[18]→离心(8 000r/min，20min)→取上清液60℃下旋蒸至其体积的1/4左右→加入3倍体积的95％乙醇静置24～48h→抽滤→滤渣离心(8 000r/min，20min)后取沉淀→用无水乙醇洗涤并收集沉淀→将沉淀溶于蒸馏水透析48h→冷冻干燥→得大型真菌粗多糖。单独使用超声提取菌类多糖，往往采用较高的超声功率，以达到促进多糖成分析出的目的，超声辅助提取法过程中的局部升温以及超声的空化效应，可能会导致多糖结构的破坏，从而降低提取物的有效成分，并且结果重复性较低。此外，有报道称超声波处理导致多糖分子量(mw)下降高达70％。且得到的是粗多糖，为一种多糖混合物，里面可能含有蛋白、肽类残留。

4、酶辅助法提取大型真菌多糖的工艺是：取干燥后的大型真菌，用破碎机破碎至过60目筛；称取粉碎后的大型真菌样5g，按照液料比1∶25加入柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液，再加入纤维素酶，放入水浴恒温振荡器中酶解；酶解后置于121℃灭菌锅加热20min进行灭活，离心并取上清液定容至25.0ml，收集2次的溶出液，采用旋转蒸发仪浓缩至100ml，加入400ml无水乙醇至80％浓度，置于4℃冰箱冷藏过夜，离心得到沉淀即为大型真菌粗多糖。相对较高的酶成本是酶辅助提取法的主要缺点之一，此外，酶辅助提取法的规模化是一个挑战，因为酶的活性会受到多种因素的影响，如温度和溶氧等。酶的种类、浓度、温度、ph、反应时间以及液固比对酶辅助提取法的提取率也有影响。得到的同样是粗多糖，为一种多糖混合物，里面可能含有蛋白、肽类残留。

5、粗多糖对于提高骨密度、缓解骨质疏松性的作用效果不佳。

6、针对现有技术不足，本发明的目的是提供一种绣球菌多糖在促进成骨细胞增殖中的应用。

技术实现思路

1、本发明提供一种绣球菌多糖，是单一多糖活性物质，具有可有效促进成骨细胞增殖的作用。

2、本发明的技术方案如下：

3、一种绣球菌多糖，由海藻糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖四种单糖聚合而成，所述绣球菌多糖的化学式如式(ⅰ)所示：

4、

5、进一步地，各单糖组分的质量百分比如下：海藻糖9.21wt％，半乳糖37.29wt％，葡萄糖34.83wt％，甘露糖18.67％。

6、进一步地，糖链组成摩尔比为：t-fuc(p)：t-man(p)：t-glc(p)：t-gal(p)：3-glc(p)：6-man(p)：4-gal(p)：6-gal(p)：3,6-man(p)：4,6-glc(p)：2,6-gal(p)＝9.22：2.38：19.01：3.33：14.35：9.59：11.71：11.59：6.70：3.93：8.19。

7、进一步地，所述绣球菌多糖的平均分子量为32249g/mol。

8、本发明还提供一种绣球菌多糖的制备方法，包括如下步骤：

9、步骤s1，将绣球菌子实体粉碎后，通过低功率超声波辅助纤维素酶法进行分离提取，经醇沉得到绣球菌粗多糖；

10、步骤s2，将绣球菌粗多糖在蒸馏水中重新溶解，然后在deae-52纤维素柱上纯化，获得多糖组分f-1、f-2和f-3；

11、步骤s3，在凝胶纯化系统中用0.2m/l的nacl作为流动相洗脱，得到含量最高的多糖成分f-1；

12、步骤s4，将多糖成分f-1在凝胶纯化系统中进一步纯化，得到纯化的绣球菌多糖。

13、基于所述绣球菌多糖，本发明还提供一种绣球菌多糖在促进成骨细胞增殖中的应用。

14、进一步地，绣球菌多糖的浓度为6.25-25μg/ml。

15、基于所述绣球菌多糖，本发明还提供一种绣球菌多糖在治疗骨质疏松药物中的应用。

16、与现有技术相比，本发明提供的绣球菌多糖及其制备方法和应用，有益效果在于：

17、本发明提供的绣球菌多糖，为单一多糖活性物质，在较低浓度时对成骨细胞的增殖具有促进作用，因此可作为一种潜在的治疗骨质疏松的药物。

技术特征：

1.一种绣球菌多糖，其特征在于，由海藻糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖四种单糖聚合而成，所述绣球菌多糖的化学式如式(ⅰ)所示：

2.根据权利要求1所述的绣球菌多糖，其特征在于，各单糖组分的质量百分比如下：海藻糖9.21wt％，半乳糖37.29wt％，葡萄糖34.83wt％，甘露糖18.67％。

3.根据权利要求1所述的绣球菌多糖，其特征在于，糖链组成摩尔比为：t-fuc(p)：t-man(p)：t-glc(p)：t-gal(p)：3-glc(p)：6-man(p)：4-gal(p)：6-gal(p)：3,6-man(p)：4,6-glc(p)：2,6-gal(p)＝9.22：2.38：19.01：3.33：14.35：9.59：11.71：11.59：6.70：3.93：8.19。

4.根据权利要求1所述的绣球菌多糖，其特征在于，所述绣球菌多糖的平均分子量为32249g/mol。

5.一种如权利要求1所述的绣球菌多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

6.一种如权利要求1所述的绣球菌多糖在促进成骨细胞增殖中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，绣球菌多糖的浓度为6.25-25μg/ml。

8.一种如权利要求1所述的绣球菌多糖在治疗骨质疏松药物中的应用。

技术总结
本发明提供一种绣球菌多糖，由海藻糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖四种单糖聚合而成，各单糖组分的质量百分比如下：海藻糖9.21wt％，半乳糖37.29wt％，葡萄糖34.83wt％，甘露糖18.67％。本发明提供的绣球菌多糖，为单一多糖活性物质，在较低浓度时对成骨细胞的增殖具有促进作用，因此可作为一种潜在的治疗骨质疏松的药物。

技术研发人员：黄晓辉,刘祝祥,冯立国,徐宁,吴芳,王小艳
受保护的技术使用者：湖南省食用菌研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13