人源化抗CD19抗体及其与嵌合抗原受体的用途的制作方法

本发明涉及生物技术。更具体地说，本发明涉及人源化抗体和其用途。

背景技术：

1、由于cd19在人类b细胞，包括前b细胞、不成熟b细胞、成熟b细胞和恶性b细胞的表面上表达，cd19是b细胞的标志。cd19已被用来诊断由b细胞引起的癌症(例如b细胞淋巴瘤)。此外，一些与抗cd 19相关的药物可直接针对b细胞癌症进行治疗。例如cd 19单克隆抗体可用于治疗b细胞相关疾病。

2、单克隆抗体通常完全由小鼠细胞得到。伴随其出现的一个问题在于人类免疫系统可能将这些抗体视为外来的并且可能会产生针对所述抗体的反应。短期来看，这有时可引起免疫反应。长期来看，这可能会引起抗体仅在其被第一次给予时起作用。第一次之后，人类免疫系统可能会在进行所需的治疗之前破坏这些抗体。

技术实现思路

1、本文中的实施例涉及一种与人类cd19结合的人源化抗体。所述人源化抗体可包括重链可变区(hvr)序列，其包括seq id no:27的氨基酸序列；和轻链可变区(lvr)序列，其包括seq id no:34的氨基酸序列、seq id no:35的氨基酸序列或seq id no:36的氨基酸序列。

2、在一些实施例中，hvr序列可包括seq id no:7的互补决定区(cdr)序列、seq idno:8的cdr序列和seq id no:9的cdr序列中的至少一个，并且hvr序列可包括seq id no:24的构架区(fr)序列。在某些实施例中，lvr序列可包括seq id no:34的氨基酸序列。在某些实施例中，lvr序列可包括seq id no:35的氨基酸序列。在某些实施例中，lvr序列可包括seq id no:36的氨基酸序列。

3、实施例进一步涉及一种与人类cd 19结合的人源化抗体。所述人源化抗体可包括重链可变区(hvr)序列，其包括seq id no:25、seq id no:26或seq id no:27的氨基酸序列中的一个，并且所述人源化抗体可包括轻链可变区(lvr)序列，其包括seq id no:34、seqid no:35或seq id no:36的氨基酸序列中的一个。

4、在一些实施例中，hvr序列可包括seq id no:27的氨基酸序列。

5、在一些实施例中，hvr序列可包括seq id no:7的互补决定区(cdr)序列、seq idno:8的cdr序列和seq id no:9的cdr序列中的至少一个。

6、在一些实施例中，hvr序列可包括seq id no:24的构架区(fr)序列。

7、在一些实施例中，lvr序列可包括seq id no:34的氨基酸序列。

8、在一些实施例中，lvr序列可包括seq id no:35的氨基酸序列。

9、在一些实施例中，lvr序列可包括seq id no:36的氨基酸序列。

10、在一些实施例中，hvr连接于人类igg链恒定区。在这些情况下，人类igg可包括igg1或igg3。

11、在一些实施例中，人源化抗体可包括与细胞毒性剂的缀合物。在这些情况下，细胞毒性剂可包括放射性同位素或毒素。

12、在一些实施例中，人源化抗体可与源自4-1bb或cd28的序列或其组合缀合。

13、在一些实施例中，人源化抗体或片段可在hek293细胞中产生。

14、在一些实施例中，人源化抗体或片段可在hek293细胞、b细胞、t细胞、nk细胞、胚胎细胞、树突状细胞或巨噬细胞中产生。

15、本文中的实施例进一步涉及一种包括人源化抗体和药学上可接受的载体的组合物。

16、本文中的实施例进一步涉及一种包括容器和容器中所含的组合物的制品。所述组合物可包括人源化抗体。

17、本文中的实施例进一步涉及一种编码人源化抗体的多核苷酸。

18、本文中的实施例进一步涉及一种编码人源化抗体的表达载体。

19、本文中的实施例进一步涉及一种宿主细胞，其包含编码人源化抗体的核酸。

20、本文中的实施例进一步涉及一种治疗cd 19阳性肿瘤的方法。所述方法可包括向患有cd 19阳性肿瘤的个体给予治疗有效量的人源化抗体。

21、本文中的实施例进一步涉及一种治疗自身免疫疾病的方法。所述方法可包括向患有自身免疫疾病的个体给予治疗有效量的人源化抗体。

22、本文中的实施例进一步涉及一种治疗cd 19相关病症的方法。所述方法可包括向患有自身免疫疾病的个体给予治疗有效量的人源化抗体或片段。在一些实施例中，cd 19相关病症可包括个体中的b细胞淋巴瘤、白血病或自身免疫疾病中的至少一种。

23、本文中的实施例进一步涉及一种修饰细胞，其包括包含抗原识别域和胞内域的嵌合抗原受体(car)。抗原域可包括人源化抗体。

24、本文中的实施例进一步涉及一种用于治疗患有cd 19阳性肿瘤的个体的方法。所述方法可包括向患有cd 19阳性肿瘤的个体给予修饰细胞。修饰细胞可包括胞内域和包含人源化抗体的抗原识别域。

25、在一些实施例中，修饰细胞可包括b细胞、t细胞、nk细胞、胚胎细胞、树突状细胞或巨噬细胞中的至少一种。

26、在一些实施例中，遗传修饰细胞在体内复制。

27、在一些实施例中，修饰细胞可在个体中形成记忆细胞。

28、在一些实施例中，向个体静脉内给予修饰细胞。

29、在一些实施例中，修饰细胞存留在个体中。

30、在一些实施例中，修饰细胞为自体性t细胞。

31、在一些实施例中，修饰细胞产生人源化抗体和/或胞内域。

32、一些实施例涉及一种人类t细胞，其包括编码car的核酸序列。举例来说，car可包括cd19抗原结合域，其包括seq id no:37的氨基酸序列。在一些实施例中，car可进一步包括跨膜域以及协同刺激分子的胞内域和信号传导域。

33、在一些实施例中，胞内域可包括cd3-ξ信号传导域。

34、在一些实施例中，抗原结合片段为scfv。举例来说，scfv可包括seq id no:37的氨基酸序列。

35、在一些实施例中，t细胞包含含有核酸序列的载体。举例来说，载体为慢病毒载体。

36、在一些实施例中，一种药物组合物，其包含如上文所述的人类t细胞。

37、提供本
技术实现要素：
是为了以简化形式介绍下文在具体实施方式中进一步描述的概念。本发明内容并不旨于限定所要求的主题的关键特征或基本特征，也并不旨于用于限制所要求的主题的范围。

1.一种人源化抗体，其与人类cd19结合，其中所述人源化抗体包含重链可变区(hvr)序列，其为seq id no:27的氨基酸序列。

2.根据权利要求1的人源化抗体，其中所述人源化抗体包含轻链可变区(lvr)序列，其为seq id no:37的氨基酸序列。

3.根据权利要求1或2所述的人源化抗体，其中所述hvr连接于人类igg链恒定区。

4.根据权利要求3的人源化抗体，其中所述人类igg为igg1或igg3。

5.根据权利要求1或2所述的人源化抗体，其中所述人源化抗体或片段在hek293细胞中产生。

6.一种组合物，其包含根据权利要求1或2所述的人源化抗体和药学上可接受的载体。

7.一种多核苷酸，其编码根据权利要求1或2所述的人源化抗体。

8.一种表达载体，其包含根据权利要求1或2所述的人源化抗体。

9.一种宿主细胞，其包含根据权利要求7所述的多核苷酸或权利要求8所述的表达载体。

10.car，所述car与人类cd19结合，所述car包含重链可变区(hvr)序列，其为seq idno:27的氨基酸序列；和轻链可变区(lvr)序列，其为seq id no:37的氨基酸序列。

11.根据权利要求10所述的car，还包含跨膜域以及协同刺激分子的胞内域和信号传导域。

12.一种组合物，包含根据权利要求10或11所述的car。

13.一种多核苷酸，其编码根据权利要求10或11所述的car。

14.一种表达载体，其包含根据权利要求10或11所述的car。

15.一种宿主细胞，其包含根据权利要求13所述的多核苷酸或权利要求14所述的表达载体。