一种利用超临界流体色谱仪分离水飞蓟宾葡甲胺的方法与流程

本发明涉及一种利用超临界流体色谱仪分离水飞蓟宾葡甲胺的方法，属于色谱分离领域。

背景技术：

1、超临界流体是物质在高于临界压力和临界温度时的一种状态，它具有气体和液体的某些性质，兼具气体的低粘性、液体的高密度以及介于气、液之间较高的扩散系数等特征。超临界流体色谱(sfc)可弥补气相色谱(gc)和高效液相色谱(hplc)的不足。sfc可分析不宜用gc分析的一些物质，如强极性、强吸附性、热稳定性差、难挥发的化合物。sfc可分析hplc难以检测的各种化合物，如无紫外吸收的各种天然产物、高分子聚合物。相较于gc和hplc，在处理大量样品的情况下，不仅分析效率明显提高，化学试剂的使用量也大大减少。co2资源丰富，价格低廉，对分析纯化的化合物无破坏性、反应性低、毒性低，而且它的临界温度和压力与色谱仪兼容。基于这些技术优势，sfc逐渐被大众认可，在市场上的覆盖率越来越大。

2、水飞蓟宾葡甲胺的主要成分是水飞蓟宾，水飞蓟宾葡甲胺由水飞蓟宾与葡甲胺组成，较水飞蓟宾易溶于水，其吸收迅速，人体吸收率高，具有较好生物利用度。水飞蓟宾是水飞蓟素中的具有生物活性成分，药理作用最强，为抗氧自由基活性物质。水飞蓟宾能促进细胞dna及结构蛋白等的合成，从而促进肝细胞修复和再生。水飞蓟宾葡甲胺是采用水飞蓟宾与葡甲胺(一种助溶剂)合成而制成的治肝保肝药物，能保护和稳定肝细胞膜。对药物性肝中毒、各种急慢性肝炎、初期肝硬化、脂肪肝、降酶、退黄及促进肝胞再生起到很好的保护肝脏的作用，主要用于急、慢性肝炎、脂肪肝的肝功能异常的恢复。

3、目前，水飞蓟宾葡甲胺的制备是将无水乙醇溶解水飞蓟宾粗品进行重结晶精制，用精制的水飞蓟宾和葡甲胺结合成复盐。经过气相检测，水飞蓟宾葡甲胺含量在80％，其中含有的杂质较多；制得的水飞蓟宾葡甲胺盐，还需经过hplc分离纯化，得到高纯度的水飞蓟宾葡甲胺。但高效液相色谱(hplc)的处理时间长，溶剂消耗量大。

技术实现思路

1、发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供了一种分离时间短、分离效果好的利用超临界流体色谱仪分离水飞蓟宾葡甲胺的方法。

2、技术方案：为解决上述技术问题，本发明提供了一种利用超临界流体色谱仪分离水飞蓟宾葡甲胺的方法，包括以下步骤：将水飞蓟宾葡甲胺溶解在甲醇中，采用超临界流体色谱法在色谱柱上对水飞蓟宾和葡甲胺进行分离纯化；所述分离纯化的流动相为超临界二氧化碳和异丙醇的混合物；所述分离纯化的固定相为表面涂敷有纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)的硅胶。

3、其中，所述的超临界流体色谱仪的背压为10-15mpa。

4、其中，所述色谱柱温度保持在30-35℃。

5、其中，所述超临界流体色谱仪中的色谱柱中的流动相流速为2-3ml/min，检测波长为288nm。

6、其中，所述超临界二氧化碳和异丙醇的体积比为65-70：30-35。

7、其中，所述超临界流体色谱仪的进样浓度为15mg/ml，进样体积10ul。

8、优选地，当所述超临界流体色谱仪的背压为10-15mpa，所述色谱柱温度保持在30-32℃，所述超临界流体色谱仪中的色谱柱中的流动相流速为2-3ml/min，检测波长为288nm，所述超临界二氧化碳和异丙醇的体积比为68-70：30-32时，分离效果较好，分离得到的水飞蓟宾葡甲胺的纯度为99.4％-99.51％。

9、优选地，当所述超临界流体色谱仪的背压为12mpa，所述色谱柱温度保持在30℃，所述超临界流体色谱仪中的色谱柱中的流动相流速为2-3ml/min，检测波长为288nm，所述超临界二氧化碳和异丙醇的体积比为68-70：30-32时，分离效果较好，分离得到的水飞蓟宾葡甲胺的纯度为99.44％。

10、优选地，当所述超临界流体色谱仪的背压为10-15mpa，所述色谱柱温度保持在30-32℃，所述超临界流体色谱仪中的色谱柱中的流动相流速为2ml/min，检测波长为288nm，所述超临界二氧化碳和异丙醇的体积比为68：32时，分离效果最好，分离得到的水飞蓟宾葡甲胺的纯度为99.46％-99.51％。

11、工作原理：水飞蓟宾葡甲胺溶解在异丙醇中，与流动相一起注入超临界流体色谱体系中。样品溶液注入高压液流之后，液流会将样品带入填充有细颗粒的管或色谱柱中。样品中的各个组分会吸附在填料表面，并与硅胶表面涂敷的纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)产生分子间相互作用。当使用二氧化碳和异丙醇进行洗脱时，由于二氧化碳极性小，相对而言异丙醇极性较大，整个分离体系类似于正相体系。吸附在填料表面的各个组分极性也有所差异，极性小的组分先被二氧化碳和异丙醇洗脱出来，极性大的组分继而被洗脱。因此，样品在穿过色谱柱即可在时间和空间上实现分离。组分将以不同的时间从色谱柱中流出，得到高斯或伪高斯峰，然后流过检测器，且co2的粘性低，分离效率大大提高。由于甲醇的极性比异丙醇大，如使用甲醇进行洗脱，小极性组分和大极性组分极易被同时洗脱，样品便达不到完全分离。

12、有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下显著优点：1、本发明首次发现了利用超临界流体色谱系统分离水飞蓟宾葡甲胺的方法；2、本发明所提供的分离方法选用超临界二氧化碳和异丙醇作为流动相，以硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)作为固定相，可实现水飞蓟宾与葡甲胺的分离，其分离时间短，分离效果好。在hplc，4.6*250的色谱柱一分钟须消耗1ml的有机溶剂，在sfc中，相同的色谱柱一分钟消耗的有机溶剂仅0.6ml，单位时间所需的溶剂消耗量减少40％。

技术特征：

1.一种利用超临界流体色谱仪分离水飞蓟宾葡甲胺的方法，其特征在于，包括以下步骤：将水飞蓟宾葡甲胺溶解在甲醇中，采用超临界流体色谱法在色谱柱上对水飞蓟宾和葡甲胺进行分离纯化；所述分离纯化的流动相为超临界二氧化碳和异丙醇的混合物；所述分离纯化的固定相为表面涂敷有纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)的硅胶。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的超临界流体色谱仪的背压为10-15mpa。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱温度保持在30-35℃。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超临界流体色谱仪中的色谱柱中的流动相流速为2-3ml/min，检测波长为288nm。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超临界二氧化碳和异丙醇的体积比为65-70：30-35。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超临界流体色谱仪的背压为10-15mpa，所述色谱柱温度保持在30-32℃，所述超临界流体色谱仪中的色谱柱中的流动相流速为2ml/min，检测波长为288nm，所述超临界二氧化碳和异丙醇的体积比为68：32。

技术总结
本发明公开了一种利用超临界流体色谱仪分离水飞蓟宾葡甲胺的方法，包括以下步骤：将水飞蓟宾葡甲胺溶解在甲醇中，采用超临界流体色谱法在色谱柱上对水飞蓟宾和葡甲胺进行分离纯化；所述分离纯化的流动相为超临界二氧化碳和异丙醇的混合物；所述分离纯化的固定相为表面涂敷有纤维素‑三(4‑甲基苯甲酸酯)的硅胶。本发明首次公开了利用超临界流体色谱系统分离水飞蓟宾葡甲胺的方法；本发明所提供的分离方法选用超临界二氧化碳和异丙醇作为流动相，以硅胶表面涂敷有纤维素‑三(4‑甲基苯甲酸酯)作为固定相，可实现水飞蓟宾与葡甲胺的分离，其分离时间短，分离效果好，单位时间所需的溶剂消耗量减少40％。

技术研发人员：赵建强,祁威,刘梦妍,李浩
受保护的技术使用者：江苏汉邦科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13