化学品植物代谢物整体毒性测试方法

本发明属于化学品风险管控，具体涉及一种化学品植物代谢物整体毒性测试方法。

背景技术：

1、释放到环境中的化学品可通过根系吸收进入植物体，随后通过食物链传递方式进入动物或人体内，可对机体消化系统、神经系统、呼吸系统、生殖系统和内分泌系统等造成损害，具有不可忽视的环境风险和人体暴露风险。例如，新烟碱类农药赋存在果蔬等可食用植物中，对人体产生膳食暴露风险，可致人体体重减少、肝肥大、性早熟等；邻苯二甲酸酯类在农作物中被频繁检出，饮食被认为是人体暴露邻苯二甲酸酯最主要的途径，由此诱导的内分泌干扰效应不容忽视。近些年，除化学品母体的健康风险，其代谢产物对生物体的负面影响也得到了逐渐关注。例如，现已研究表明四溴双酚a(tbbpa)的脱溴产物已被证实其水生毒性远远高于tbbpa；双酚a的o-甲基化代谢产物较母体而言，对斑马鱼胚胎的毒性更强。

2、然而，现有的研究多数关注于化学品母体或少数化学品代谢物的毒性，忽略了化学品整体植物代谢产物的暴露风险。由于化学品的植物代谢产物复杂多样，难以实现所有代谢产物的准确鉴别和分离，阻碍了化学品整体植物代谢产物暴露风险的全面精准评价。基于此，本发明提出一种化学品植物代谢物整体毒性测试方法，可以方便快速检测植物整体代谢产物的毒性，为化学品的环境安全和健康风险评价提供新数据,对维护环境安全和人民健康具有重要意义。

技术实现思路

1、针对上述背景技术中存在的问题，本发明设计的目的在于提供一种化学品植物代谢物整体毒性测试方法。

2、具体通过以下技术方案加以实现：

3、化学品植物代谢物整体毒性测试方法，方法结合植物愈伤组织水培实验、动物细胞体外毒性实验获得化学品整体植物代谢产物的毒性，具体步骤为：

4、1)通过动物细胞预培养确定植物愈伤组织暴露化学品浓度；

5、2)植物愈伤组织暴露于化学品；

6、3)提取化学品的整体植物代谢产物；

7、4)动物细胞暴露整体代谢产物，进行细胞的染毒暴露及培养，培养结束后进行细胞活性检测，得到化学品植物整体代谢产物的毒性。

8、进一步地，步骤1)中，动物细胞预培养是指利用动物细胞暴露化学品得到化学品在该动物细胞中的半致死浓度lc50。

9、进一步地，步骤2)中，植物愈伤组织暴露于化学品，暴露浓度设为lc50。

10、进一步地，步骤3)中，提取化学品的整体植物代谢产物的具体步骤为：

11、1)利用有机溶剂通过常规提取方式提取植物愈伤组织中化学品的整体代谢产物；

12、2)提取物高速离心后，收集有机层上清液；

13、3)通过氮吹、旋蒸的方式进行浓缩，制得浓缩物；

14、4)采用含0.3％二甲基亚砜的细胞培养液对浓缩物进行复溶。

15、进一步地，步骤4)中，细胞活性检测采用mtt法、xtt法、wst-1法或cck法来检测细胞活性，以评价化学品整体植物代谢产物的毒性。进一步地，所述动物细胞包括但不仅限于caco-2细胞、cho-k1细胞、vero细胞、hela细胞。

16、进一步地，所述化学品为所有可被植物吸收代谢的化学品，包括但不仅限于农药、溴代阻燃剂、双酚类物质、邻苯二甲酸酯类物质。

17、本发明方法为化学品植物代谢产物的整体毒性测试提供了一种快速、高效的方法，能更全面评估化学品的环境风险和健康风险,对维护环境安全和人民健康来说具有重要的现实意义。

技术特征：

1.化学品植物代谢物整体毒性测试方法，其特征在于该方法结合植物愈伤组织水培实验、动物细胞体外毒性实验获得化学品整体植物代谢产物的毒性，具体步骤为：

2.如权利要求1所述的化学品植物代谢物整体毒性测试方法，其特征在于步骤1）中，动物细胞预培养是指利用动物细胞暴露化学品得到化学品在该动物细胞中的半致死浓度lc50。

3.如权利要求1所述的化学品植物代谢物整体毒性测试方法，其特征在于步骤2）中，植物愈伤组织暴露于化学品，暴露浓度设为lc50。

4.如权利要求1所述的化学品植物代谢物整体毒性测试方法，其特征在于步骤3）中，提取化学品的整体植物代谢产物的具体步骤为：

5.如权利要求1所述的化学品植物代谢物整体毒性测试方法，其特征在于步骤4）中，细胞活性检测采用mtt法、xtt法、wst-1法或cck法来检测细胞活性，以评价化学品整体植物代谢产物的毒性。

6.如权利要求1所述的化学品植物代谢物整体毒性测试方法，其特征在于所述动物细胞包括但不仅限于caco-2细胞、cho-k1细胞、vero细胞、hela细胞。

7.如权利要求1所述的化学品植物代谢物整体毒性测试方法，其特征在于所述化学品为所有可被植物吸收代谢的化学品，包括但不仅限于农药、溴代阻燃剂、双酚类物质、邻苯二甲酸酯类物质。

技术总结
本发明化学品植物代谢物整体毒性测试方法，该方法结合植物愈伤组织水培实验、动物细胞体外毒性实验获得化学品整体植物代谢产物的毒性，具体步骤为：1）通过动物细胞预培养确定植物愈伤组织暴露化学品浓度；2）植物愈伤组织暴露于化学品；3）提取化学品的整体植物代谢产物；4）动物细胞暴露整体代谢产物，进行细胞的染毒暴露及培养，培养结束后进行细胞活性检测，得到化学品植物整体代谢产物的毒性。本发明方法为化学品植物代谢产物的整体毒性测试提供了一种快速、高效的方法，能更全面评估化学品的环境风险和健康风险,对维护环境安全和人民健康来说具有重要的现实意义。

技术研发人员：孙建强,朱千姿,周庆华,张安平,吴娟
受保护的技术使用者：浙江工业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13