一种中性巴楚蘑菇多糖及其制备方法与应用

本发明属于天然多糖制备，具体涉及一种中性巴楚蘑菇多糖及其制备方法与应用。

背景技术：

1、食用真菌多糖由于其多种生物活性而倍受关注。诸多研究阐明，食用真菌多糖具有多种生物学活性，如抗肿瘤、抗氧化剂、抗炎、降血糖、降血脂、保肝、免疫调节等作用。巴楚蘑菇主要生长在塔里木盆地北缘自然胡杨林中，是药食兼用的大型野生真菌。从系统分类的角度上来看，巴楚蘑菇属于马鞍菌属(heivella)真菌，被称为白柄马鞍菌(helvellaleucopus)。从外形上来看，巴楚蘑菇表面呈黑色，有较多绒毛和马鞍状裂片，菌柄中空并且大多为乳白色，菌盖直径约3.0～6.0cm，菌柄直径约1.0～3.0cm，菌柄高2.0～7.0cm。由于其主要生长于天然胡杨林区，如莎车县、巴楚县等，尤其多产于巴楚县，因此也被称为巴楚蘑菇，其子实体香味浓郁、美味鲜美、口感独特，其营养价值远远高于同盘羊肚菌。目前国内外有关巴楚蘑菇的报道主要集中在探讨巴楚蘑菇的基本成分及营养价值，巴楚蘑菇生物学特性与生态环境条件之间的关系等方面，而有关巴楚蘑菇含有的特定的活性物质的生物活性以及相关机制研究寥寥无几，尤其是在巴楚蘑菇均一多糖的体内外抗炎活性及对肠道菌群组成的影响方面的研究仍然处于空白状态。

技术实现思路

1、针对现有技术存在的问题和缺陷，本发明提供一种中性巴楚蘑菇多糖及其制备方法与应用。通过进行提取、纯化以及结构表征对巴楚蘑菇多糖进行分析鉴定，并研究了均一多糖改善和缓解溃疡性结肠炎小鼠临床特征相关抗炎活性，以及其对肠道菌群丰度与组成的影响。本发明的技术方案为：

2、第一个方面，本发明提供一种中性巴楚蘑菇多糖的制备方法，包括以下步骤：

3、s1、将干燥巴楚蘑菇粉碎过40目筛后于沸水中提取一段时间，过滤，滤液于50～60℃浓缩至原体积的1/4，得到一次浓缩液；

4、s2、将一次浓缩液除去游离蛋白质，进一步浓缩至原体积的1/3，得到二次浓缩液，二次浓缩液中加入其2～4倍体积的无水乙醇混合均匀；

5、s3、于50～60℃蒸除乙醇，浓缩物真空冷冻干燥，得到巴楚蘑菇粗多糖；

6、s4、采用离子交换色谱法对巴楚蘑菇粗多糖进行纯化；

7、s4、再将离子交换色谱法纯化后的产品用蒸馏水在纤维素膜(5kda)中透析，收集产率最高的洗脱峰组分并浓缩、冻干，得到精制多糖；

8、s5、将精制多糖通过凝胶纯化法进一步纯化，收集单一对称峰为中性巴楚蘑菇多糖p-hlp。

9、进一步地，所述步骤s1中干燥巴楚蘑菇与沸水的重量体积比为1：(15～20)。

10、进一步地，所述步骤s2中将一次浓缩液除去游离蛋白质采用的试剂为体积比4:1的二氯甲烷与正丁醇混合液。

11、优选地，所述步骤s4中采用离子交换色谱法对巴楚蘑菇粗多糖进行纯化是采用deae-cellulose fast flow凝胶柱。

12、进一步地，采用deae-cellulose fast flow凝胶柱进行纯化的过程包括：将巴楚蘑菇粗多糖溶于去离子水中，配制成1～2mg/ml的溶液，装样至deae-cellulose fast flow凝胶柱中；随后依次以超纯水和浓度为0.05、0.1、0.2、0.3、0.5moi/l的nacl溶液作为洗脱液进行梯度洗脱，洗脱流速设定为1～2ml/min，收集洗脱液。

13、第二个方面，本发明提供一种中性巴楚蘑菇多糖，是采用上述制备方法获得。

14、进一步地，所述中性巴楚蘑菇多糖的数均分子量为39.14×108；单糖组成包括：甘露糖、葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、岩藻糖、木糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸、古罗糖醛酸和阿拉伯糖，前述几种多糖的摩尔比率为43.68:38.16:9.34:4.35:0.88:0.84:0.79:0.74:0.72:0.50；多糖组成包括：t-d-glc、t-d-rha、t-d-man、t-d-gal、1,4-glcp、1,2-manp、1,6-manp、1,3,6-manp、1,4,6-galp、1,6-glcp和1,3-glcp，其相对摩尔比分别为8.48：6.05：5.50：0.70：31.60:28.71:8.22:4.29:2.74:2.15:1.58。

15、第三个方面，本发明提供上述中性巴楚蘑菇多糖在制备抗炎药物上的应用。

16、进一步地，所述抗炎药物包括炎性肠病药物以及结肠炎药物。

17、第四个方面，本发明提供上述中性巴楚蘑菇多糖在制备饲料添加剂上的应用。

18、第五个方面，本发明提供一种动物饲料，包括上述的饲料添加剂。

19、本发明的有益效果为：本发明的巴楚蘑菇多糖p-hlp是一种新型多糖，至今还未报到提取出这种结构特征的巴楚蘑菇多糖。动物实验表明，巴楚蘑菇多糖p-hlp对dss诱导的炎症性肠病小鼠炎症指标具有显著调节和干预效应。不同剂量巴楚蘑菇多糖p-hlp通过调节炎症相关细胞因子和酶而调节宿主免疫。此外，本发明还研究了不同剂量p-hlp对dss诱导的溃疡性结肠炎小鼠具有很好的缓解或改善作用，能回调溃疡性结肠炎小鼠体重、降低dai指数、缓解病理组织损伤、抑制结肠粘膜促炎症因子和介质的表达、促进抗炎细胞因子的表达，尤其是高剂量p-hlp效果明显而独特。因此，该中性巴楚蘑菇多糖可开发为临床上治疗炎性肠病以及结肠炎相关疾病的疗效确切、毒副作用低的药物，还有望通过饲料添加剂而应用于动物饲料中。

技术特征：

1.一种中性巴楚蘑菇多糖的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种中性巴楚蘑菇多糖的制备方法，其特征在于：所述步骤s1中干燥巴楚蘑菇与沸水的重量体积比为1：(15～20)。

3.根据权利要求1所述的一种中性巴楚蘑菇多糖的制备方法，其特征在于：所述步骤s2中将一次浓缩液除去游离蛋白质采用的试剂为体积比4:1的二氯甲烷与正丁醇混合液。

4.根据权利要求1所述的一种中性巴楚蘑菇多糖的制备方法，其特征在于：所述步骤s4中采用离子交换色谱法对巴楚蘑菇粗多糖进行纯化是采用deae-cellulose fast flow凝胶柱。

5.根据权利要求4所述的一种中性巴楚蘑菇多糖的制备方法，其特征在于：采用deae-cellulose fast flow凝胶柱进行纯化的过程包括：将巴楚蘑菇粗多糖溶于去离子水中，配制成1～2mg/ml的溶液，装样至deae-cellulose fast flow凝胶柱中；随后依次以超纯水和浓度为0.05、0.1、0.2、0.3、0.5moi/l的nacl溶液作为洗脱液进行梯度洗脱，洗脱流速设定为1～2ml/min，收集洗脱液。

6.一种中性巴楚蘑菇多糖，其特征在于：是采用权利要求1～5任意一项所述的制备方法获得。

7.根据权利要求6所述的一种中性巴楚蘑菇多糖，其特征在于：所述中性巴楚蘑菇多糖的数均分子量为39.14×108；单糖组成包括：甘露糖、葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、岩藻糖、木糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸、古罗糖醛酸和阿拉伯糖，前述几种多糖的摩尔比率为43.68:38.16:9.34:4.35:0.88:0.84:0.79:0.74:0.72:0.50；多糖组成包括：t-d-glc、t-d-rha、t-d-man、t-d-gal、1,4-glcp、1,2-manp、1,6-manp、1,3,6-manp、1,4,6-galp、1,6-glcp和1,3-glcp，其相对摩尔比分别为8.48：6.05：5.50：0.70：31.60:28.71:8.22:4.29:2.74:2.15:1.58。

8.权利要求1～5任意一项所述的制备方法获得的中性巴楚蘑菇多糖或者权利要求6或7所述的中性巴楚蘑菇多糖在制备抗炎药物上的应用。

9.权利要求1～5任意一项所述的制备方法获得的中性巴楚蘑菇多糖或者权利要求6或7所述的中性巴楚蘑菇多糖在制备饲料添加剂上的应用。

10.一种动物饲料，其特征在于：采用权利要求1～5任意一项所述的制备方法获得的中性巴楚蘑菇多糖或者权利要求6或7所述的中性巴楚蘑菇多糖制备的饲料添加剂。

技术总结
本发明提供一种中性巴楚蘑菇多糖及其制备方法与应用，其制备方法包括：将干燥巴楚蘑菇粉碎过筛后于沸水中提取，过滤，滤液于50～60℃浓缩至原体积的1/4；将一次浓缩液除去游离蛋白质，进一步浓缩至原体积的1/3，二次浓缩液中加入无水乙醇混合均匀；于50～60℃蒸除乙醇，浓缩物真空冷冻干燥，得到巴楚蘑菇粗多糖；采用离子交换色谱法对巴楚蘑菇粗多糖进行纯化；再用蒸馏水在纤维素膜(5kDa)中透析，收集产率最高的洗脱峰组分并浓缩、冻干；将精制多糖通过凝胶纯化法进一步纯化，收集单一对称峰为中性巴楚蘑菇多糖p‑HLP。该中性巴楚蘑菇多糖可开发为临床上治疗炎性肠病以及结肠炎相关疾病的疗效确切、毒副作用低的药物，还有望通过饲料添加剂而应用于动物饲料中。

技术研发人员：祖母拉提·阿布都热依木
受保护的技术使用者：新疆医科大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13