一种核酸快速检测方法与流程

本发明涉及生物检测，尤其涉及一种核酸快速检测方法。

背景技术：

1、随着检测技术的发展，使得poct(point-of-caretesting)式的检测成为近年来检测领域发展的主要方向之一。poct检测是指在采样现场即刻进行分析，快速得到检验结果的一种检测形式。如poct核酸检测仪，将核酸提取、扩增、荧光检测等功能全部整合在一台小型化的仪器上，可以在非实验室条件下进行快速、准确的核酸检测。

2、我国是世界上重要的水产品生产和出口大国之一，水产养殖业是农业经济的主要支柱产业。水产病原的快速诊断，对水产养殖的良种选育，疾病预防、进出口检疫、水产品食品安全等方面具有重大意义。目前常用的水产病害的检测技术主要包括：目检、镜检、病原的分离鉴定、聚合酶链式反应、核酸杂交、限制性酶切、基因芯片、酶联免疫检测技术、免疫荧光技术；这些检测方法均存在依赖精密仪器、检测成本高、灵敏性和特异性差，操作程序繁琐，难以推广等缺点；而且常规的病原检测技术大都不适合养殖基层的现场快速检测。

技术实现思路

1、本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种核酸快速检测方法。

2、为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

3、提供一种核酸快速检测方法，包括如下步骤：

4、步骤一，取样品放入样品袋，加5-10倍体积的裂解液，封闭袋口，进行匀浆操作，得待测样品；

5、步骤二，将待测样品置于反应腔内，在恒温加热条件下，与反应腔内的恒温扩增试剂反应；

6、步骤三，使反应后的待测样品流至试剂条上，并且通过检测槽观察试剂条的情况，不同环境的检测可通过更换不同的抗原，实现目视检测和荧光检测。

7、进一步地，所述恒温扩增试剂包括酶、引物、探针和缓冲液组分，其中，2种引物或探针标记了特定抗原a和抗原b。

8、进一步地，所述恒温扩增试剂包括：正向外围引物1～50pmol；反向外围引物1～50pmol；正向交叉引物10～500pmol；反向交叉引物10～500pmol；正向探针1～100pmol；反向探针1～100pmol；dna聚合酶5～50u；反转录酶0.5～8u；dntp10～300nmol；bsa0.1～5μg；缓冲液组分，1～1000mmtris-hcl，1～50mm(nh4)2so4，1～100mmkcl，1～10mmmgso4，0.01～1wt％20。

9、进一步地，所述抗原a和抗原b为地高辛、生物素、荧光标记fam中任意2种。

10、进一步地，地高辛标记对应试纸条中使用地高辛抗体；生物素标记对应试纸条中使用sa；fam标记对应试纸条中使用anti-fam抗体。

11、进一步地，所述步骤二中，加热时间为15～30分钟。

12、本发明采用以上技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：

13、本发明的核酸快速检测方法，能够加快检测速度、成本低廉，安全可靠、无需经过专业培训即可操作。

技术特征：

1.一种核酸快速检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的核酸快速检测方法，其特征在于，所述恒温扩增试剂包括酶、引物、探针和缓冲液组分，其中，2种引物或探针标记了特定抗原a和抗原b。

3.根据权利要求2所述的核酸快速检测方法，其特征在于，所述恒温扩增试剂包括：正向外围引物1～50pmol；反向外围引物1～50pmol；正向交叉引物10～500pmol；反向交叉引物10～500pmol；正向探针1～100pmol；反向探针1～100pmol；dna聚合酶5～50u；反转录酶0.5～8u；dntp 10～300nmol；bsa 0.1～5μg；缓冲液组分，1～1000mm tris-hcl，1～50mm(nh4)2so4，1～100mm kcl，1～10mm mgso4，0.01～1wt％20。

4.根据权利要求2所述的核酸快速检测方法，其特征在于，所述抗原a和抗原b为地高辛、生物素、荧光标记fam中任意2种。

5.根据权利要求4所述的核酸快速检测方法，其特征在于，地高辛标记对应试纸条中使用地高辛抗体；生物素标记对应试纸条中使用sa；fam标记对应试纸条中使用anti-fam抗体。

6.根据权利要求1所述的核酸快速检测方法，其特征在于，所述步骤二中，加热时间为15～30分钟。

技术总结
本发明公开了一种核酸快速检测方法，包括如下步骤：步骤一，取样品放入样品袋，加5‑10倍体积的裂解液，封闭袋口，进行匀浆操作，得待测样品；步骤二，将待测样品置于反应腔内，在恒温加热条件下，与反应腔内的恒温扩增试剂反应；步骤三，使反应后的待测样品流至试剂条上，并且通过检测槽观察试剂条的情况，不同环境的检测可通过更换不同的抗原，实现目视检测和荧光检测。本发明的核酸快速检测方法，能够加快检测速度、成本低廉，安全可靠、无需经过专业培训即可操作。

技术研发人员：石坚,吴文巍,罗成
受保护的技术使用者：吴文巍
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13