嵌合病毒包膜糖蛋白及包含其的载体的制作方法

本公开涉及慢病毒载体领域。具体地，本公开涉及一种嵌合病毒包膜糖蛋白，其包含狒狒内源性逆转录病毒(baev)包膜糖蛋白的胞外结构域和跨膜结构域以及灵长目白血病病毒包膜糖蛋白的胞质尾结构域。本公开还涉及编码所述嵌合病毒包膜糖蛋白的核酸，包含所述嵌合病毒包膜糖蛋白的病毒载体，包含所述嵌合病毒包膜糖蛋白、所述核酸或所述病毒载体的细胞，使用所述嵌合病毒包膜糖蛋白或所述核酸制备病毒载体包装/生产细胞的方法，以及使用所述嵌合病毒包膜糖蛋白、所述核酸或所述病毒载体转导细胞的方法。

背景技术：

1、慢病毒载体近些年来在细胞治疗领域应用较为广泛。虽然口炎疱疹病毒(vsv)假型慢病毒载体具有较高的生产滴度，并且可以感染分裂和非分裂的细胞，但是已有较多文献证实，该假型慢病毒载体，在转导一些静息的t细胞、b细胞、nk细胞、hsc细胞等时，转导效率普遍较低。为了提高转导效率，需要使用高剂量的vsv-g假型慢病毒载体(vsv-g-lv)，这存在着导致靶细胞发生插入突变的风险。同时，人类血清对vsv-g假型慢病毒载体存在着较强的免疫应答，这进一步限制了该类型病毒载体在某些基因治疗领域的应用。

2、目前已有一些能够高效转导静息细胞的新的假型慢病毒载体，包括猫内源性逆转录病毒(rd114)假型慢病毒载体、狒狒内源性逆转录病毒(baev)假型慢病毒载体、麻疹病毒(h/f)假型慢病毒载体等。这些假型慢病毒载体均能高效转导静息的t细胞、b细胞、nk细胞、hsc细胞等，但由于滴度较低，限制了其商业化应用。对于狒狒内源性逆转录病毒(baev)假型慢病毒载体(baev-lv)，据报道baev糖蛋白已被进一步改造以用于提高baev-lv的滴度，如使用小鼠白血病病毒包膜糖蛋白胞质尾结构域替换野生型baev包膜糖蛋白胞质尾结构域(baevtr(mlv))以及将野生型baev包膜糖蛋白胞质尾结构域的融合抑制性r肽去除(baevrless)(参见美国专利us9249426b2)。然而，上述假型慢病毒载体的滴度远低于vsv-g假型慢病毒载体，导致产能远低于治疗需求。因此，目前亟需一种能够高效转导静息t细胞、b细胞、nk细胞、hsc细胞等且具有更高滴度的假型病毒载体。

技术实现思路

1、本公开的目的在于提供一种能够高效转导静息t细胞、b细胞、nk细胞、hsc细胞等且具有较高产毒滴度的假型病毒载体。

2、为了解决上述技术问题，本发明人将狒狒内源性逆转录病毒(baev)包膜糖蛋白的胞质尾结构域替换为灵长目白血病病毒包膜糖蛋白的胞质尾结构域从而获得一种新的嵌合baev包膜糖蛋白突变体。令人惊奇的是，包含所述嵌合baev包膜糖蛋白突变体的假型病毒载体在能够高效转导静息细胞的情况下具有显著提高的滴度。

3、具体地，本公开通过提供以下各项解决了上述技术问题。

4、在一个方面，本公开提供一种嵌合病毒包膜糖蛋白，所述嵌合病毒包膜糖蛋白包含狒狒内源性逆转录病毒(baev)包膜糖蛋白的胞外结构域和跨膜结构域以及灵长目白血病病毒包膜糖蛋白的胞质尾结构域。

5、在一个实例中，所述灵长目白血病病毒为长臂猿白血病病毒(galv)。在一个实例中，所述灵长目白血病病毒为灵长目t细胞白血病病毒(ptlv)，例如猿猴t细胞白血病病毒(stlv)或人t细胞白血病病毒(htlv)。猿猴t细胞白血病病毒(stlv)可以是1型(stlv-1)、2型(stlv-2)或3型(stlv-3)。人t细胞白血病病毒(htlv)可以是1型(htlv-1)、2型(htlv-2)、3型(htlv-3)或4型(htlv-4)。

6、在另一个方面，本公开提供一种核酸，所述核酸编码本公开的嵌合病毒包膜糖蛋白。

7、在另一个方面，本公开提供一种载体，所述载体包含本公开的嵌合病毒包膜糖蛋白。在一个实例中，所述载体是病毒载体，例如逆转录病毒载体。在一个实例中，所述载体是慢病毒载体。在一个实例中，所述载体是假型逆转录病毒载体，例如假型慢病毒载体。

8、在另一个方面，本公开提供一种细胞，所述细胞包含本公开的嵌合病毒包膜糖蛋白、本公开的核酸或本公开的逆转录病毒载体。在某些实例中，所述细胞可以是病毒载体包装细胞或病毒载体生产细胞，例如逆转录病毒载体包装细胞或逆转录病毒载体生产细胞，例如慢病毒载体包装细胞或慢病毒载体生产细胞。

9、在另一个方面，本公开提供一种制备病毒载体包装细胞或病毒载体生产细胞的方法，所述方法包括将本公开的嵌合病毒包膜糖蛋白或本公开的核酸转入细胞中。在一个实例中，所述病毒载体是逆转录病毒载体。在一个实例中，所述逆转录病毒载体是慢病毒载体。在一个实例中，所述逆转录病毒载体是假型逆转录病毒载体，例如假型慢病毒载体。

10、在另一个方面，本公开提供一种转导细胞的方法，所述方法包括使用本公开的嵌合病毒包膜糖蛋白、本公开的核酸或本公开的逆转录病毒载体。

技术特征：

1.一种嵌合病毒包膜糖蛋白，其特征在于，所述嵌合病毒包膜糖蛋白包含狒狒内源性逆转录病毒包膜糖蛋白的胞外结构域和跨膜结构域以及灵长目白血病病毒包膜糖蛋白的胞质尾结构域。

2.根据权利要求1所述的嵌合病毒包膜糖蛋白，其特征在于，所述灵长目白血病病毒为长臂猿白血病病毒。

3.根据权利要求1所述的嵌合病毒包膜糖蛋白，其特征在于，所述灵长目白血病病毒为灵长目t细胞白血病病毒，例如是猿猴t细胞白血病病毒或人t细胞白血病病毒。

4.一种核酸，其特征在于，所述核酸编码根据权利要求1-3中任一项所述的嵌合病毒包膜糖蛋白。

5.一种载体，其特征在于，所述载体包含根据权利要求1-3中任一项所述的嵌合病毒包膜糖蛋白。

6.根据权利要求5所述的载体，其特征在于，所述载体是病毒载体，例如是逆转录病毒载体，特别是慢病毒载体。

7.根据权利要求5或6所述的载体，其特征在于，所述载体是假型逆转录病毒载体。

8.一种细胞，其特征在于，所述细胞包含根据权利要求1-3中任一项所述的嵌合病毒包膜糖蛋白、根据权利要求4所述的核酸或根据权利要求5-7中任一项所述的载体，所述细胞可以是病毒载体包装细胞或病毒载体生产细胞。

9.一种制备病毒载体包装细胞或病毒载体生产细胞的方法，其特征在于，所述方法包括将根据权利要求1-3中任一项所述的嵌合病毒包膜糖蛋白或根据权利要求4所述的核酸转入细胞中。

10.一种转导细胞的方法，其特征在于，所述方法包括使用根据权利要求1-3中任一项所述的嵌合病毒包膜糖蛋白、根据权利要求4所述的核酸或根据权利要求5-7中任一项所述的载体。

技术总结
本公开提供一种嵌合病毒包膜糖蛋白，其特征在于，所述嵌合病毒包膜糖蛋白包含狒狒内源性逆转录病毒包膜糖蛋白的胞外结构域和跨膜结构域以及灵长目白血病病毒包膜糖蛋白的胞质尾结构域或由其组成。本公开还提供编码所述嵌合病毒包膜糖蛋白的核酸，包含所述嵌合病毒包膜糖蛋白的病毒载体，包含所述嵌合病毒包膜糖蛋白、所述核酸或所述病毒载体的细胞，使用所述嵌合病毒包膜糖蛋白或所述核酸制备病毒载体包装细胞或病毒载体生产细胞的方法，以及使用所述嵌合病毒包膜糖蛋白、所述核酸或所述病毒载体转导细胞的方法。

技术研发人员：薛博夫,杨银辉,刘杰,牛浩然,陈莉
受保护的技术使用者：深圳市深研生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14