一种重组蛋白生产工艺的制作方法

【】本发明涉及蛋白组学，具体地说，是一种重组蛋白生产工艺。

背景技术

0、
背景技术：

1、随着基因工程的日益发展，重组蛋白表达技术生产的部分蛋白已逐渐被人们接受，体外重组蛋白表达主要系统有真核表达系统和原核表达系统，其中原核表达系统以大肠杆菌表达最为常用。而真核表达系统包括哺乳动物细胞表达和酵母表达。根据不同的实验目的，哺乳动物细胞表达又可分为瞬时转染表达和稳定细胞系构建两类实验。

2、而在重组蛋白的实验过程中，往往因为需要的仪器较多，步骤较为繁琐而需要消耗大量人力物力，大大提高了重组蛋白的实验成本，因此需要改进。

技术实现思路

0、
技术实现要素：

1、本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种重组蛋白生产工艺。

2、为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：一种重组蛋白生产工艺，包括

3、s1、将目的基因构建到表达载体上；

4、s2、用构建质粒转化表达菌，lb平板37℃；

5、s3、lb平板上挑选单一菌落接入lb培养基,37℃进行培养；

6、s4、将菌液接入液体培养基中加入iptg进行诱导；

7、s5、培养好的菌液进行离心，弃去上清，形成悬浮液；

8、s6、向悬浮好的菌液内加入蛋白抑制剂，冰浴放置；

9、s7、进行超声破碎，破碎后进行离心；

10、s8、用pbs缓冲液平衡gst柱，上样结合并搅拌流干；

11、s9、用pbs缓冲液清洗非特异性蛋白，流干，加入洗脱缓冲液洗脱；

12、s10、进行纯化；

13、其中，s2、s3、s4在恒温箱内进行操作，所述恒温箱包括箱体，所述箱体底部设置有震动装置，所述箱体内壁上还设置有温控装置和通气装置；所述震动装置包括放置平台和驱动单元，所述放置平台与所述箱体内壁之间存在空隙，所述驱动单元设置在所述放置平台和所述箱体底壁之间，并固定在所述箱体底壁上，并与放置平台的相对位置保持固定，所述箱体内部还设置有充气装置和温控装置。

14、优选的，s5、s7在破碎离心一体机内操作，所述破碎离心一体机包括隔音箱、超声探头和离心底座，离心底座和超声探头分别设置在隔音箱内的上下两侧，所述超声探头朝离心底座延伸，所述离心底座内转动设置有容器套，所述容器套用于放置装有细胞的容器，所述超声探头远离所述离心底座的一端连接有升降臂。

15、优选的，所述容器套的顶端通过转轴与所述离心底座连接，所述离心底座内设置有滑槽，滑槽形状与所述容器套底端的转动轨迹相同，所述滑槽的两端设置有限位槽，所述容器套卡入限位槽并保持固定。

16、优选的，所述驱动单元包括若干个伸缩气缸，所述伸缩气缸的顶端设置有连接块，所述放置平台底部设置有用于卡接所述连接块的连接槽，所述连接块优选为球型，所述连接槽优先为容积与连接块体积相当的球型，所述伸缩气缸分布在所述放置平台的四周，并连接至plc程序。

17、优选的，所述容器套的顶端通过转轴与所述离心底座连接。

18、优选的，所述离心底座内设置有滑槽，滑槽形状与所述容器套底端的转动轨迹相同。

19、优选的，所述滑槽的两端设置有限位槽，所述容器套卡入限位槽并保持固定。

20、优选的，s3中lb培养基为5ml，培养时间为3-5小时；s4中将5ml菌液接入1llb液体培养基中，37℃培养至od60≈0.6，加入0.3mmol/l的iptg，16℃诱导16h；s5中离心转速为5000r/min，时间为10分钟。

21、优选的，s7中超声破碎每个循环26次，超声6s，间隔5s，视破碎效果共2～4个循环，破碎后的菌4℃1800r/min，离心30min，上清保持在4℃；s8中上样结合30～60min，每5～10min搅拌一次。

22、本发明优点在于：

23、1、通过隔音箱可以将超声破碎时产生的噪音隔离，隔离箱内设置有用于超声破碎的超声探头和用于破碎后进行分离的离心底座，通过升降臂使得超声探头可以伸入或远离容器套，从而在需要破碎时将超声探头伸入容器套进行破碎，在破碎完成后，可以通过伸缩臂将超声探头收回，避免离心时遭到损坏。

24、2、通过驱动单元可以使得放置平台进行轻微的晃动，由于放置平台与箱体内壁之间存在空隙，避免了晃动混合时对箱体的影响，从而实现孔板内培养基更容易的混合，提高了混合效果，降低了实验人员的工作强度。

25、3、本发明的重组蛋白生产工艺提高了生产的效率，降低了工作强度，减轻了实验人员的负担。

技术特征：

1.一种重组蛋白生产工艺，包括

2.根据权利要求1所述的一种重组蛋白生产工艺，其特征在于：s5、s7在破碎离心一体机内操作，所述破碎离心一体机包括隔音箱、超声探头和离心底座，离心底座和超声探头分别设置在隔音箱内的上下两侧，所述超声探头朝离心底座延伸，所述离心底座内转动设置有容器套，所述容器套用于放置装有细胞的容器，所述超声探头远离所述离心底座的一端连接有升降臂。

3.根据权利要求2所述的一种重组蛋白生产工艺，其特征在于：所述容器套的顶端通过转轴与所述离心底座连接，所述离心底座内设置有滑槽，滑槽形状与所述容器套底端的转动轨迹相同，所述滑槽的两端设置有限位槽，所述容器套卡入限位槽并保持固定。

4.根据权利要求3所述的一种重组蛋白生产工艺，其特征在于：优选的，所述驱动单元包括若干个伸缩气缸，所述伸缩气缸的顶端设置有连接块，所述放置平台底部设置有用于卡接所述连接块的连接槽，所述连接块优选为球型，所述连接槽优先为容积与连接块体积相当的球型，所述伸缩气缸分布在所述放置平台的四周，并连接至plc程序。

5.根据权利要求4所述的一种重组蛋白生产工艺，其特征在于：所述容器套的顶端通过转轴与所述离心底座连接。

6.根据权利要求5所述的一种重组蛋白生产工艺，其特征在于：所述离心底座内设置有滑槽，滑槽形状与所述容器套底端的转动轨迹相同。

7.根据权利要求6所述的一种重组蛋白生产工艺，其特征在于：所述滑槽的两端设置有限位槽，所述容器套卡入限位槽并保持固定。

8.根据权利要求1所述的一种重组蛋白生产工艺，其特征在于：s3中lb培养基为5ml，培养时间为3-5小时；s4中将5ml菌液接入1llb液体培养基中，37℃培养至od60≈0.6，加入0.3mmol/l的iptg，16℃诱导16h；s5中离心转速为5000r/min，时间为10分钟。

9.根据权利要求1所述的一种重组蛋白生产工艺，其特征在于：s7中超声破碎每个循环26次，超声6s，间隔5s，视破碎效果共2～4个循环，破碎后的菌4℃1800r/min，离心30min，上清保持在4℃；s8中上样结合30～60min，每5～10min搅拌一次。

技术总结
本发明涉及一种重组蛋白生产工艺，包括S1、将目的基因构建到表达载体上；S2、用构建质粒转化表达菌，LB平板37℃；S3、LB平板上挑选单一菌落接入LB培养基,37℃进行培养；S4、将菌液接入液体培养基中加入iptg进行诱导；S5、培养好的菌液进行离心，弃去上清，形成悬浮液；S6、向悬浮好的菌液内加入蛋白抑制剂，冰浴放置；S7、进行超声破碎，破碎后进行离心；S8、用PBS缓冲液平衡GST柱，上样结合并搅拌流干；S9、用PBS缓冲液清洗非特异性蛋白，流干，加入洗脱缓冲液洗脱；S10、进行纯化；其中，S2、S3、S4在恒温箱内进行操作，S5、S7在破碎离心一体机内操作。

技术研发人员：吴柏旭,程翎,胡亮
受保护的技术使用者：浙江洛兮医疗科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14