一种检测犬细小病毒的多重核酸组合物、试剂盒开发方法及其应用与流程

本发明涉及病原体检测，具体而言，涉及一种检测犬细小病毒的多重核酸组合物、试剂盒开发方法及其应用。

背景技术：

1、犬细小病毒(canine parvovirus，cpv)能引起犬的细小病毒病，属于急性传染病，常见临床表现为剧烈呕吐、出血性肠炎、心肌炎、白细胞骤减、出血型肠炎等特征。幼犬cpv发病率高、传染性强、致死率高，是影响养犬业最主要的烈性传染性疾病之一。快速、准确地鉴定引起犬消化道疾病的病原体种类，对于患犬的临床鉴别诊断及治疗有着重要的意义。

2、目前临床中最常用诊断方法为胶体金检测、琼脂糖凝胶电泳检测和各类实时荧光pcr检测。例如专利cn 111500793 a和cn 111471798 a提供了犬细小病毒的琼脂糖凝胶电泳检测方法，琼脂糖凝胶电泳法成本虽低，但存在气溶胶污染问题，对检测结果的准确性影响较高；胶体金法存在检测灵敏度低的问题。因此，利用实时荧光pcr技术开发出高效、准确的鉴定体系是犬细小病毒临床鉴别的重要途径。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种检测犬细小病毒的多重核酸组合物、试剂盒开发方法及其应用以解决上述技术问题。

2、本发明提供了一种检测犬细小病毒的多重核酸组合物，其包括用于检测犬细小病毒的多重核酸组合物，所述多重核酸组合物包括两对引物和两条探针，所述引物对1和2的核苷酸序列分别如seq id no.1-2和seq id no.4-5所示，所述探针1和2的核苷酸序列分别如seq id no.3和seq id no.6所示。

3、在本发明应用较佳的实施方式中，上述探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。上述荧光报告基团为hex、fam、tet、cf532、joe、tamra、rox、cy3、cy5、texas red、ned、alexa flour或vic，淬灭基团为mgb、tamra、bhq1、bhq2、bhq3或qsy。

4、本发明提供了一种检测试剂盒，其包括上述的多重核酸组合物。

5、本发明提供了一种上述多重核酸组合物在制备检测试剂盒中的应用。

6、在本发明应用较佳的实施方式中，上述试剂盒为冻干试剂或液体试剂。

7、上述多重核酸组合物或上述试剂在鉴定或辅助鉴定犬细小病毒中的应用；应用为非疾病诊断或治疗为目的的应用。

8、本发明具有以下有益效果：

9、本发明提供了一种可以高效准确检测犬细小病毒的多重核酸组合物，该多重组合物可以用于犬细小病毒实时荧光定量pcr的检测，经发明人验证该核酸组合物检测病原体的准确度显著高于市面上的单重引物核酸检测试剂盒，且灵敏度高，对于病原体的最低检测限均达到1×103copies/ml，有利于患犬的早期诊断或治疗。基于上述多重核酸组合物可以制备相应的检测试剂盒以及检测试剂。

技术特征：

1.一种检测犬细小病毒的多重核酸组合物，其特征在于，其包括用于检测犬细小病毒的多重核酸组合物，所述多重核酸组合物包括两对引物和两条探针，所述引物对1和2的核苷酸序列分别如seq id no.1-2和seq id no.4-5所示，所述探针1和2的核苷酸序列分别如seq id no.3和seq id no.6所示。

2.根据权利要求1所述的多重核酸组合物，其特征在于，所述探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团，所述荧光报告基团为hex、fam、tet、cf532、joe、tamra、rox、cy3、cy5、texas red、ned、alexa flour或vic，所述淬灭基团为mgb、tamra、bhq1、bhq2、bhq3或qsy。

3.一种检测试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1-2任一项所述的多重核酸组合物。

4.一种根据权利要求1-2任一项所述的多重核酸组合物在制备检测试剂盒中的应用。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂为冻干试剂或液体试剂。

6.根据权利要求1-2任一项所述的多重核酸组合物或权利要求3-5所述的试剂盒在鉴定或辅助鉴定犬细小病毒中的应用；所述应用为非疾病诊断或治疗为目的的应用。

技术总结
本发明公开了一种检测犬细小病毒的多重核酸组合物，其包括用于检测犬细小病毒的多重核酸组合物，所述多重核酸组合物包括两对引物和两条探针，所述引物对1和2的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1‑2和SEQ ID NO.4‑5所示，所述探针1和2的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.6所示。本发明一种可以高效准确检测犬细小病毒的多重核酸组合物，可以用于犬细小病毒实时荧光定量PCR的检测，经发明人验证该核酸组合物检测病原体的准确度显著高于市面上的单重引物核酸检测试剂盒，且灵敏度高，对于病原体的最低检测限均达到1×10<supgt;3</supgt;copies/mL，有利于患犬的早期诊断或治疗。

技术研发人员：杜永飞
受保护的技术使用者：北京优吉科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15