一种程序性复苏细胞的方法与流程

本发明属于生物，具体涉及一种程序性复苏细胞的方法。

背景技术：

1、间充质干细胞(msc)在临床上广泛应用，与造血干细胞联合应用，可以提高移植的成功率，加速造血重建。当患者接受大剂量化疗后，将间充质干细胞与造血干细胞一同输入，可明显加速患者血细胞恢复时间，且安全无不良反应。免疫细胞可以保护身体免受病毒、细菌和寄生虫的感染和异物侵扰，并且能够消灭肿瘤细胞，目前干细胞和免疫细胞存储逐渐被人们所认可，存储细胞应用时不可避免涉及到细胞复苏的问题。

2、细胞冻存及复苏的基本原理是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力，快速融化可以保证细胞外结晶在很短的时间内融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成结晶对细胞造成伤害。但是，现阶段复苏细胞时普遍采用水浴锅在37℃下进行复苏细胞，即将含细胞的冻存管置于水浴锅内，手动摇晃，使冻存的细胞尽快融化，此方法存在细胞复苏时水浴锅内的水进入细胞冻存管污染细胞的风险。

3、基于此，本发明提出一种非水浴的程序性复苏细胞的方法。

技术实现思路

1、针对现有技术中的不足，本发明的目的是提供一种程序性复苏细胞的方法，操作简便，且细胞存活率不受影响，避免水浴复苏细胞存在水浴锅内的水进入细胞冻存管污染细胞的风险。

2、为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、本发明提供一种程序性复苏细胞的方法，包括以下步骤：

4、步骤1：将冻存的待复苏细胞从液氮罐中取出，迅速放入65℃的恒温金属浴，计时100s；

5、步骤2：迅速转移至37℃的恒温金属浴，计时50s，复苏完成。

6、作为优选，步骤2中，复苏完成前，冻存管内残留有冰晶，5-15s后冰晶完全溶解。

7、作为优选，所述冻存的待复苏细胞包括外周血单个核细胞(pbmc)和间充质干细胞(msc)。

8、作为更优选，所述pbmc细胞来源于人外周血，以细胞悬液的形式冻存，其中细胞密度为0.1×107-10×107个/ml，优选为4×107个/ml。

9、本发明还提供所述程序性复苏细胞的方法在制备生物制品中的应用，细胞包括pbmc细胞和msc细胞。

10、与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

11、本发明采用恒温金属浴替代传统的水浴作为复苏细胞的媒介复苏冻存的细胞，无须不时摇动细胞冻存管，操作简单便捷，且经实验证明复苏后细胞存活率及细胞增殖能力不受影响，避免水浴复苏细胞存在水浴锅内的水进入细胞冻存管污染细胞的风险。

技术特征：

1.一种程序性复苏细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述程序性复苏细胞的方法，其特征在于，步骤2中，复苏完成前，冻存管内残留有冰晶，5-15s后冰晶完全溶解。

3.根据权利要求1所述程序性复苏细胞的方法，其特征在于，所述冻存的待复苏细胞包括pbmc细胞和msc细胞。

4.根据权利要求3所述程序性复苏细胞的方法，其特征在于，所述pbmc细胞来源于人外周血，以细胞悬液的形式冻存，其中细胞密度为0.1×107-10×107个/ml。

5.根据权利要求4所述程序性复苏细胞的方法，其特征在于，所述pbmc细胞来源于人外周血，以细胞悬液的形式冻存，其中细胞密度为4×107个/ml。

6.权利要求1-5任一项所述程序性复苏细胞的方法在制备生物制品中的应用，细胞包括pbmc细胞和msc细胞。

技术总结
本发明公开了一种程序性复苏细胞的方法，属于生物技术领域。该方法包括：将冻存的待复苏细胞例如PBMC细胞或MSC细胞从液氮罐中取出，迅速放入65℃的恒温金属浴，计时100s，迅速转移至37℃的恒温金属浴，计时50s，复苏完成。本发明采用恒温金属浴替代传统的水浴作为复苏细胞的媒介复苏冻存的细胞，无须不时摇动细胞冻存管，操作简单便捷，且经实验证明复苏后细胞存活率及细胞增殖能力不受影响，有效避免水浴复苏细胞存在水浴锅内的水进入细胞冻存管污染细胞的风险。

技术研发人员：张良超,姬广超,周鑫磊,宋航飞,王坪,苏苗苗
受保护的技术使用者：上海安库生医生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13