一种抗环瓜氨酸肽抗体的抗原及其应用的制作方法

本发明涉及免疫诊断，特别涉及一种ccp肽段、包含其抗原、试剂盒及其应用。

背景技术：

1、类风湿关节炎(rheumatoid arthtitis，ra)是一种慢性自身免疫性疾病，导致多个关节发炎和畸形。诊断ra的重要指标是抗瓜氨酸化多肽抗体(anti-citrullinatedprotein antibody，acpa)，它们能识别环瓜氨酸肽(cyclic citrullinated peptide，ccp)这种特异性抗原。检测acpa的方法有多种，如酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbent assay，elisa)、胶体金免疫层析法(gold immunochromatographic assay，gica)、免疫比浊法(immunoturbidimetry，it)等。

2、然而，这些方法都存在一定的局限性，主要是由于抗原表位的敏感性和特异性不足。抗原表位是抗原分子上与acpa结合的部位，它们决定了检测方法的灵敏度和特异度。如果抗原表位的数量少或结构简单，那么acpa就难以与之结合，导致检测结果假阴性或低阳性；如果抗原表位的结构与其他类似的抗原有交叉反应，那么acpa就容易与之混淆，导致检测结果假阳性或高阳性。目前主要的ccp使用线性瓜氨酸肽或瓜氨酸化丝聚合蛋白作为抗原底物，但敏感性较低。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题在于ccp的特异性和敏感性不足，针对现有技术的不足，提供一种ccp肽段，包含其抗原及抗环瓜氨酸肽抗体的检测试剂盒。

2、为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：

3、一种ccp肽段，所述肽段包括至少一个抗原表位肽，所述抗原表位肽为环瓜氨酸，每一个所述环瓜氨酸肽通过半胱氨酸桥接成环，并形成转角。

4、进一步地，所述ccp肽段，其中，所述抗原表位肽的序列为arggsrcrargrgrg-cit-gckr，其中，第7位半胱氨酸残基与第18位半胱氨酸残基通过二硫键形成环状结构。

5、进一步地，所述ccp肽段，其中，所述抗原表位肽的序列为ggskclynlr-cit-gclaipq，其中，第5半胱氨酸残基与第13半胱氨酸残基通过二硫键形成环状结构。

6、一种ccp抗原，包含如上所述的任意一个或多个的ccp肽段。

7、进一步地，所述的ccp抗原包括含瓜氨酸、甘氨酸、半胱氨酸基序的ccp肽段的组合。

8、一种如上所述的ccp抗原在抗体检测中的应用，将环瓜氨酸肽抗原与载体连接，用于抗环瓜氨酸抗体的检测。

9、所述抗环瓜氨酸肽抗体的抗原在抗体检测中的应用，所述载体包括载体蛋白、生物素、异硫氰荧光素。

10、一种抗环瓜氨酸肽抗体的检测试剂盒，其中，所述试剂盒包括：样本稀释液、缓冲液、抗原偶联试剂。

11、进一步地，所述的样本稀释液包含包括盐高盐溶液和去垢剂。优选地，所述的高盐溶液为氯化钠盐、碳酸钠盐、硫酸铜盐中的一种或多种；所述的去垢剂为十二烷基硫酸钠、胆酸盐、辛基葡萄糖苷中的一种或多种。

12、进一步地，所述的缓冲液包含磷酸盐、tris、peg-6000、proclin300、消泡剂，优选地消泡剂包含但不限于有机硅类消泡剂、表面活性剂类消泡剂、矿物油消泡剂中的一种或多种。

13、进一步地，所述的抗原偶联试剂包含上述的ccp肽段一个或多个的抗原与载体蛋白、生物素、异硫氰荧光素三者中任何一个偶联的方式存在；优选地所述的载体蛋白可以是牛血清白蛋白、阳离子牛血清白蛋白、血蓝蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白、牛γ球蛋白及人γ球蛋白中任意一种。

14、本发明提供了一种ccp肽段及包含ccp肽段的抗原及其应用，抗原包括至少一个抗原表位肽，而抗原表位肽的环瓜氨酸通过半胱氨酸成环，形成转角，从而将环瓜氨酸暴露出来，提高检测的特异性和敏感性。同时，该抗原可应用于免疫比浊法等多种检测方法中，从而提高检测方法的精确度。

技术特征：

1.一种ccp肽段，其特征在于，所述肽段包括至少一个抗原表位肽，所述抗原表位肽为环瓜氨酸，每一个所述环瓜氨酸肽通过半胱氨酸桥接成环，并形成转角。

2.根据权利要求1所述的ccp肽段，其特征在于，所述肽段的序列为arggsrcrargrgrg-cit-gckr，其中，第7位半胱氨酸残基与第18位半胱氨酸残基通过二硫键形成环状结构。

3.根据权利要求1所述的ccp肽段，其特征在于，所述肽段的序列为ggskclynlr-cit-gclaipq，其中，第5半胱氨酸残基与第13半胱氨酸残基通过二硫键形成环状结构。

4.一种ccp抗原，其特征在于所述的ccp抗原包含权利要求1-3中一个或任意个中任意一项描述的ccp肽段。

5.根据权利要求4所述的ccp抗原，其特征在于，所述ccp抗原包括含瓜氨酸、甘氨酸、半胱氨酸基序的ccp肽段的组合。

6.一种抗环瓜氨酸肽抗体的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂包括：

7.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述的样本稀释液包括高盐溶液和去垢剂。

8.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述的ccp抗原将以ccp抗原偶联物形式存在。

9.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液包括消泡剂。

10.一个或多个权利要求1至3中任一项所述的ccp肽段、或者权利要求4～5所述的ccp抗原在制备用于抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂或试剂盒中的用途。

技术总结
本发明公开了一种抗环瓜氨酸肽抗体的抗原及其应用，包括：一种CCP肽段、包含其的抗原，试剂盒。所述抗原包括至少一个抗原表位肽，所述抗原表位肽为环瓜氨酸，每一个所述环瓜氨酸肽通过半胱氨酸桥接成环，并形成转角。将该抗原结合载体，可应用于免疫比浊法等抗体检测方法中，操作简单，敏感性、特异性和稳定性较高。

技术研发人员：龚虹安,朱漩,曲文蕊,汪建德
受保护的技术使用者：深圳市锦瑞生物科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15