一种与乳鸽胸肌发育相关的lncRNA及其应用

本发明属于生物工程领域，具体涉及lxloc_064870在乳鸽胸肌生长发育中的应用。

背景技术：

1、肉类产量是衡量肉鸽经济价值的一个重要指标，其中胸肌重量是主要因素。而这一指标受到多种因素的调控。非编码rnas(ncrnas)是一类通常不编码蛋白质的rnas，包括长非编码rnas(lncrnas)、小rnas(mirnas)、环状rnas和piwi-interacting rnas，其中，lncrnas是影响主要生物过程和相关疾病的关键调节因子，因为它们参与调节身体脂肪代谢、肌肉发育、胚胎发育和免疫反应。但目前关于lncrna在鸽胸肌发育方面的研究鲜有报道。

技术实现思路

1、发明目的：本发明的目的是通过转录组测序技术筛选与鸽胸肌生长发育相关的lncrna与其对应的mrna，最终在3、7、14、25日龄鸽胸肌组织中筛选得到了lxloc_064870，该lncrna能够反应乳鸽胸肌生长发育速度的快慢，通过选留个体，达到加快具有优良肉质性状肉鸽的培养，因此lncrna lxloc_064870可以用来调控肉鸽胸肌发育速度，一定程度上加快了具有优良肉质性状的肉鸽品种的培育。

2、技术方案：为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

3、一种与乳鸽胸肌发育相关的lncrna，所述lncrna对应基因的核苷酸序列如seq idno：7所示。该lncrna命名为lxloc_064870，所述lxloc_064870基因的靶基因为ankrd2。

4、进一步地，所述lncrna的核苷酸序列如seq id no：8所示。

5、一种重组载体，包含seq id no：1所示的基因。

6、上述与乳鸽胸肌发育相关的lncrna在乳鸽胸肌生长发育研究中的应用在本发明的保护范围之内。

7、一种检测乳鸽胸肌生长发育速度的试剂盒，包括检测lxloc_064870基因表达量的引物对，其核苷酸序列如seq id no:1、seq id no:2所示。

8、进一步地，所述试剂盒包括检测内参基因gapdh的引物对，其核苷酸序列如seq idno:5、seq id no:6所示。

9、进一步地，所述试剂盒包括检测ankrd2基因的引物对，其核苷酸序列如seq idno:4、seq id no:5所示。

10、所述检测乳鸽胸肌生长发育速度的试剂盒

11、一种检测乳鸽胸肌生长发育速度的方法，包括如下步骤：

12、(1)取鸽3、7、14、25日龄胸肌，提取胸肌组织的总rna进行反转录，得到cdna；

13、(2)以步骤(1)得到的cdna为模板，seq id no:1和seq id no:2、seq id no:5和seq id no:6所述的序列为引物进行荧光定量pcr；

14、(3)采用2-δδct方法对步骤(2)得到的荧光定量pcr数据进行分析，判定lxloc_064870基因在不同日龄乳鸽胸肌中的表达量，lxloc_064870基因表达量大，说明其生长速度的快。

15、步骤(2)中，所述的荧光定量pcr，其pcr反应体系如下：

16、扩增反应体系为20μl，premix试剂10μl；上游引物0.4μl；下游引物0.4μl；模板cdna 2μl；无酶双蒸水6.4μl。

17、步骤(2)中，所述的荧光定量pcr，其pcr反应程序如下：

18、95℃预变性30s；95℃10sec，60℃30sec，40个循环；95℃15sec，60℃60sec，95℃30sec，60℃15sec获得熔解曲线。

19、有益效果：

20、本发明发现了与乳鸽生长发育紧密相关的lxloc_064870，通过共表达网络分析预测差异表达lncrna的靶基因ankrd2，并公开了检测两者在鸽胸肌组织中表达量的特异性引物对。长非编码rnas(lncrnas)在转录和转录后调控中发挥重要作用，但关于lncrnas在乳鸽胸肌生长发育中的分子调控机制的研究较少。本发明提供的lncrna lxloc_064870可以作为检测鸽胸肌生长发育速度的快慢的指标，帮助快速判断乳鸽生长速度，加快具有优良肉质性状的肉鸽品种的培养。

技术特征：

1.一种与乳鸽胸肌发育相关的lncrna，其特征在于，所述lncrna对应基因的核苷酸序列如seq id no：7所示。

2.一种重组载体，其特征在于，包含seq id no：1所示的基因。

3.权利要求1所述与乳鸽胸肌发育相关的lncrna在乳鸽胸肌生长发育研究中的应用。

4.一种检测乳鸽胸肌生长发育速度的试剂盒，其特征在于，包括检测lxloc_064870基因表达量的引物对，其核苷酸序列如seq id no:1、seq id no:2所示。

5.根据权利要求4所述的检测乳鸽胸肌生长发育速度的试剂盒，其特征在于，包括检测内参基因gapdh的引物对，其核苷酸序列如seq id no:5、seq id no:6所示。

6.根据权利要求4所述的检测乳鸽胸肌生长发育速度的试剂盒，其特征在于，包括检测ankrd2基因的引物对，其核苷酸序列如seq id no:3、seq id no:4所示。

7.根据权利要求4所述的检测乳鸽胸肌生长发育速度的试剂盒，其特征在于，包括荧光定量pcr反应液、无酶双蒸水。

8.一种检测乳鸽胸肌生长发育速度的方法，其特征在于，包括如下步骤：

9.根据权利要求8所述的检测乳鸽胸肌生长发育速度的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的荧光定量pcr，其pcr反应体系如下：

10.根据权利要求8所述的检测乳鸽胸肌生长发育速度的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的荧光定量pcr，其pcr反应程序如下：

技术总结
本发明公开了一种与乳鸽胸肌发育相关的lncRNA及其应用，属于生物工程技术领域。发现了与乳鸽生长发育紧密相关的LXLOC_064870，其核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示。通过共表达网络分析预测差异表达lncRNA的靶基因ANKRD2，并公开了检测两者在鸽胸肌组织中表达量的特异性引物对。本发明提供的lncRNA LXLOC_064870可以作为检测鸽胸肌生长发育速度的快慢的指标，帮助快速判断乳鸽生长速度，加快具有优良肉质性状的肉鸽品种的培养。

技术研发人员：王莹,张弛,苗冬枝,李婉晴,杨海明
受保护的技术使用者：扬州大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15