用于黄牛早期妊娠诊断的miRNA标志物及其应用

本发明属于生物，具体涉及一种用于黄牛早期妊娠诊断的mirna标志物及其应用。

背景技术：

1、mirna是一类在动植物细胞中均有表达的，在进化上保守的小rna分子。lee等1999年首次在秀丽线虫体内发现了已知的第一个mirna，并命名为lin-4，由此开启了关于mirna的研究。mirna是一种小的内源性非编码rna，由蛋白质编码rna的基因间区域或内含子加工而成，长度约为20-24个核苷酸。研究表明，mirna可以通过表观遗传修饰靶向转录后信使rna(mrna)，在哺乳动物细胞中，mirna的种子区可与靶基因3′utr上的序列互补结合，进而抑制靶基因的表达和翻译。在哺乳动物中，mirna可通过调节靶mrna的表达而参与免疫、细胞增殖、分化、器官发生和胚胎发育等多个生物学过程。

2、mirna已被证明可以调节卵巢功能、子宫内膜容受性、胚胎发育和胎盘功能，最近已成为具有高临床潜力的早期妊娠诊断的生物标志物。jason等通过分析与牛早期怀孕相关的血浆mirna群体，确定了mir-26a是牛早期妊娠的新型候选生物标志物。在绵羊中，mir-30c、mir-132、mir-379、mir-199a-3p和mi r-320在妊娠第30d或第60d的血清中表达差异。血浆中的循环mir-xx1和mi r-xx2可能是水牛早期妊娠检测的潜在生物标志物。越来越多的证据表明，mi rna可以被视为牛怀孕的潜在生物标志物。

3、但截至目前，mirna作为黄牛早期妊娠检测分子标志物的研究较少，而黄牛早期阶段的妊娠识别和妊娠建立对于成功妊娠并产犊具有决定作用。因此，提供一种与黄牛早期妊娠相关的特异性mirna生物标志物，对于提高牛群的繁殖力具有重要意义。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于黄牛早期妊娠诊断的mirna标志物及其应用，为黄牛早期妊娠诊断提供一种有效的诊断工具。

2、本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下：

3、一种用于黄牛早期妊娠诊断的mirna标志物，所述mirna标志物选自bt a-mir-133a和bta-mir-19b中的任意一种或两种；所述bta-mir-133a的序列如seq id no.1所示，所述bta-mir-19b的序列如seq id no.2所示。

4、一种用于黄牛早期妊娠诊断的mirna标志物在制备用于黄牛早期妊娠诊断的试剂盒中的应用，所述mirna标志物选自bta-mir-133a和bta-mir-19b中的任意一种或两种；所述bta-mir-133a的序列如seq id no.1所示，所述bta-mi r-19b的序列如seq id no.2所示。

5、优选的，所述试剂盒为采用real-time rt-pcr方法检测血液中所述mirna生物标志物表达量的试剂盒；所述bta-mir-133a在妊娠黄牛血液中的表达量显著降低，所述bta-mir-19b在妊娠黄牛血液中的表达量显著升高。

6、优选的，所述试剂盒含有可以特异性扩增所述mirna标志物的引物；所述bta-mir-133a的引物序列如seq id no.3～4所示，所述bta-mir-19b的引物序列如seq id no.5～6所示。

7、优选的，所述试剂盒含有用于检测所述mirna标志物表达量的内参基因的引物，所述内参基因为bta-gapdh和bta-rps18，内参基因bta-gapdh的引物序列如seq id no.7～8所示，内参基因bta-rps18的引物序列如seq id no.9～10所示。

8、由上述技术方案可知，本发明相比现有技术其有益效果是：本发明提供了一种用于黄牛早期妊娠诊断的mirna标志物及其应用，基于small rna测序筛选及qrt-rcr验证结果表明，bta-mir-133a和bta-mir-19b在怀孕黄牛妊娠第0d血液样本与妊娠第21d血液样本间差异性表达，并且bta-mir-133a和bta-mi r-19b在妊娠黄牛血液样本与未妊娠黄牛对照组间差异性表达，证明上述mirn a可以作为黄牛早期妊娠诊断的分子诊断标志物，通过检测受试黄牛血液中上述mirna的表达量，对黄牛早期妊娠进行快速诊断，当受试黄牛血液中bta-mi r-133a的表达量显著降低或bta-mir-19b的表达量显著升高，亦或bta-mir-133a的表达量显著降低且bta-mir-19b的表达量显著升高时，提示该受试黄牛处于妊娠早期，为黄牛早期妊娠诊断提供一种有效的诊断工具。

技术特征：

1. 一种用于黄牛早期妊娠诊断的mirna标志物，其特征在于：所述mirna标志物选自bta-mir-133a和bta-mir-19b中的任意一种或两种；所述bta-mir-133a的序列如seq idno.1所示，所述bta-mir-19b的序列如seq id no.2所示。

2. 一种用于黄牛早期妊娠诊断的mirna标志物在制备用于黄牛早期妊娠诊断的试剂盒中的应用，其特征在于：所述mirna标志物选自bta-mir-133a和bta-mir-19b中的任意一种或两种；所述bta-mir-133a的序列如seq id no.1所示，所述bta-mir-19b的序列如seqid no.2所示。

3. 如权利要求2所述的用于黄牛早期妊娠诊断的mirna标志物在制备用于黄牛早期妊娠诊断的试剂盒中的应用，其特征在于：所述试剂盒为采用real-time rt-pcr方法检测血液中所述mirna生物标志物表达量的试剂盒；所述bta-mir-133a在妊娠黄牛血液中的表达量显著降低，所述bta-mir-19b在妊娠黄牛血液中的表达量显著升高。

4. 如权利要求2所述的用于黄牛早期妊娠诊断的mirna标志物在制备用于黄牛早期妊娠诊断的试剂盒中的应用，其特征在于：所述试剂盒含有可以特异性扩增所述mirna标志物的引物；所述bta-mir-133a的引物序列如seq id no.3~4所示，所述bta-mir-19b的引物序列如seq id no.5~6所示。

5. 如权利要求2所述的用于黄牛早期妊娠诊断的mirna标志物在制备用于黄牛早期妊娠诊断的试剂盒中的应用，其特征在于：所述试剂盒含有用于检测所述mirna标志物表达量的内参基因的引物，所述内参基因为bta-gapdh和bta-rps18，内参基因bta-gapdh的引物序列如seq id no.7~8所示，内参基因bta-rps18的引物序列如seq id no.9~10所示。

技术总结
本发明提供一种用于黄牛早期妊娠诊断的miRNA标志物及其应用，属于生物技术领域，所述miRNA标志物选自bta‑miR‑133a和bta‑miR‑19b中的任意一种或两种，通过检测受试黄牛血液中上述miRNA的表达量，对黄牛早期妊娠进行快速诊断，当受试黄牛血液中bta‑miR‑133a的表达量显著降低或bta‑miR‑19b的表达量显著升高，亦或bta‑miR‑133a的表达量显著降低且bta‑miR‑19b的表达量显著升高时，提示该受试黄牛处于妊娠早期。因此，bta‑miR‑133a和bta‑miR‑19b中的任意一种或两种均可作为新的黄牛早期妊娠诊断的标志物，用于黄牛早期妊娠诊断。

技术研发人员：王兴平,包斌武,罗仍卓么,王晋鹏,姬中祥,杨易
受保护的技术使用者：宁夏大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15