本发明属于生物,具体涉及一种抗酶解抗菌肽ik3-a及其制备方法和应用。
背景技术:
1、自抗生素的饲用促生长特性被报道以来,畜牧业便高度依赖抗生素。正是对抗生素的高度依赖引发了抗生素的药物残留问题和细菌耐药性问题。目前,研发绿色、安全、高效的抗生素替代产品已成为当前的热门领域。抗菌肽是一种非常具有研究潜力与应用潜力的可替代抗生素的物质,其本质上是一类具有广谱抗菌活性的阳离子多肽,抗菌肽独特的作用机制决定了其不易产生耐药性。但是抗菌肽的缺点也很明显,其中蛋白酶稳定性差是影响抗菌肽作用效果的重要因素之一。近些年来,众多提高抗菌肽蛋白酶稳定性的方法应运而生,如自组装、肽链修饰及非天然氨基酸替换等。但是这些化学修饰方法所引发的如高溶血活性和高成本等负面效果制约了抗菌肽的广泛应用。
技术实现思路
1、基于以上不足之处,本发明的目的在于提供一种抗酶解的抗菌肽ik3-a,解决了抗菌肽容易被胰蛋白酶或糜蛋白酶降解使其降低甚至失去抗菌活性的问题。
2、本发明所采用的技术方案如下:一种抗酶解抗菌肽ik3-a,其氨基酸序列如seq idno.1所示。
3、本发明的另一目的是提供如上所述的一种抗酶解抗菌肽ik3-a的制备方法,步骤如下:
4、步骤一、以α-螺旋多肽折叠原则为基础,设计出标准α-螺旋肽模板(xyyxyyx)n,其中,x为疏水性氨基酸,y为阳离子氨基酸;
5、步骤二、选用脂肪族侧链较长的ile作为疏水性氨基酸,其优势在于不仅不会作为糜蛋白酶的酶切位点,而且相比于其他疏水性氨基酸,其疏水性较强,可以提供足够的疏水性;
6、步骤三、相比于arg,胰蛋白酶对lys的亲和力更低,故选择具有侧链氨基的lys作为阳离子氨基酸来提供必要的净正电荷,并增强抗菌肽与膜表面负电荷组分之间的静电作用;
7、步骤四、在c端侧放置序列为arg-cys-lys-ala-ala-phe-cys的肽链,且两个cys之间由二硫键进行连接,以提高抗菌肽对胰蛋白酶和糜蛋白酶的抗性,从而提高其蛋白酶稳定性;
8、步骤五、设计出的多肽序列模版为:(ikkikki)n-rckaafc,当n=3时,序列如seqidno.1所示;
9、步骤六、再通过多肽合成仪,采用固相化学合成法进行合成,经质谱鉴定后,即完成该多肽的制备;
10、步骤七、再经过抑菌活性的测定、溶血活性的测定和抗酶解能力的测定,最后将该多肽命名为抗酶解抗菌肽ik3-a。
11、本发明的另一目的是提供如上所述的一种抗酶解抗菌肽ik3-a在制备治疗由革兰氏阴性菌所引起的感染性疾病药物中的应用。
12、进一步的,所述的革兰氏阴性菌包括大肠杆菌、绿脓杆菌、鼠伤寒沙门氏菌和猪霍乱沙门氏菌。
13、本发明具有如下优点及有益效果:本发明产生对胰蛋白酶和糜蛋白酶的抗性,无需进行复杂的化学修饰或非天然氨基酸取代;对制备的抗菌肽ik3-a进行抑菌活性、溶血活性和抗酶解能力测定,发现ik3-a对大肠杆菌、绿脓杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌等多种革兰氏阴性菌都有强效的抑制作用,对红细胞几乎没有溶血,且在胰蛋白酶或糜蛋白酶中有很强的抗酶解能力,具有较高的应用价值,选择性指数高达96.97,具有极大的应用潜力。
1.一种抗酶解抗菌肽ik3-a,其特征在于,其氨基酸序列如seq id no.1所示。
2.根据权利要求1所述的一种抗酶解的抗菌肽ik3-a的制备方法,其特征在于,方法如下:
3.根据权利要求1所述的一种抗酶解抗菌肽ik3-a在制备治疗由革兰氏阴性菌所引起的感染性疾病药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的的应用,其特征在于:所述的革兰氏阴性菌包括大肠杆菌、绿脓杆菌、鼠伤寒沙门氏菌和猪霍乱沙门氏菌。