一种生产5－氨基乙酰丙酸的工程菌的制备方法与流程

本发明涉及生物工程，具体为一种生产5－氨基乙酰丙酸的工程菌的制备方法。

背景技术：

1、5一氨基乙酰丙酸是一种化学品，是生物体合成叶绿素、血红素和维生素b12等四吡咯类化合物的必需前提，在各个领域都有很大的作用，在农业领域中，ala对植物无毒副作用，易降解无残留，能够制成各种的除草剂、杀虫剂等，在医学领域，ala可以作为抗癌药物，能选择性的杀死癌细胞，被称为第二代光动力学药物具有对正常细胞毒害小，5一氨基乙酰丙酸具有广泛安全的作用效果。

2、目前5一氨基乙酰丙酸的应用比较广泛，但是在现有技术在对5－氨基乙酰丙酸制备时，采用相同的发酵培养基，实现的作用效果较为单一，不便于增加其实用性，后续工作人员需要使用其他步骤将其制成不同的药剂，使其应用在不同的领域，但使用效果较为普通。

技术实现思路

1、(一)解决的技术问题

2、本发明的目的在于提供生产5－氨基乙酰丙酸的工程菌的制备方法，以解决上述背景技术中提出现有技术在对5－氨基乙酰丙酸制备时，采用相同的发酵培养基，实现的作用效果较为单一的问题。

3、(二)技术方案

4、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：包括如下步骤：

5、s1：将包含异柠檬酸脱氢酶、镁盐、乙酰基以及苄基，其反应体系调至合适ph值，搅拌棒均匀搅拌混合而成；

6、s2：离心机转速设置为600r/min，转动时间10min，得到混合物a，静置3小时；

7、s3：反应剂与萃取液质量比为1：2.5，对混合物a采用有机溶剂使用萃取法分离提取乙酰丙酸，升温离心机对反应剂加热，温度为45℃，离心机转速设置为1000r/min，转动时间5min，得到混合物b；

8、s4：以蛋白胨、葡萄糖、乙酰基为组分的培养基中加入镁盐，得到发酵培养基a；

9、s5：以蛋白胨、葡萄糖、酵母粉为组分的培养基中加入琥珀酸，得到发酵培养基b；

10、s6：以蛋白胨、葡萄糖、酵母粉为组分的培养基中加入苄基，得到发酵培养基c；

11、s7：混合物b使用发酵罐进行发酵培养，注入发酵培养基a，发酵罐转速200rpm，温度35℃，时间为5min，之后静置30min，注入发酵培养基b，发酵罐转速150rpm，时间为3min，得到氨基乙酰丙酸的工程菌。

12、优选的，所述异柠檬酸脱氢酶ph值7，镁盐ph值10，乙酰基ph值6，苄基ph值5。

13、优选的，所述投入混合物a时注意避尘避光，萃取液采用碱性萃取剂，对混合物加合氢离子。

14、优选的，所述s3的有机溶液使用三氯乙烯和乙烯乙二醇醚。

15、优选的，发酵培养基a质量体积配比为0.3％蛋白胨、0.1％葡萄糖、0.3％乙酰基、93％清水，ph值为8。

16、优选的，所述发酵培养基b质量体积配比为0.5％蛋白胨、0.3％酵母粉、0.6％琥珀酸、86％清水，ph值为5。

17、优选的，发酵培养基c质量体积配比为0.4％蛋白胨、0.6％酵母粉、0.2％苄基酸、88％清水，ph值为7。

18、与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明中，使用多种配比的方式，可实现不同的效果，采用不同的发酵培养基对氨基乙酰丙酸的工程菌进行制备，实现不同的效果，便于工作人员后续将所制备的氨基乙酰丙酸的工程菌应用在不同的行业领域，可根据不同的行业需求，对其进行制备，能够有效提升使用效果。

技术特征：

1.一种生产5－氨基乙酰丙酸的工程菌的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

2.根据权利要求1一种生产5－氨基乙酰丙酸的工程菌的制备方法，其特征在于：异柠檬酸脱氢酶ph值7，镁盐ph值10，乙酰基ph值6，苄基ph值5。

3.根据权利要求2一种生产5－氨基乙酰丙酸的工程菌的制备方法，其特征在于：投入混合物a时注意避尘避光，萃取液采用碱性萃取剂，对混合物加合氢离子。

4.根据权利要求3一种生产5－氨基乙酰丙酸的工程菌的制备方法，其特征在于：s3的有机溶液使用三氯乙烯和乙烯乙二醇醚。

5.根据权利要求4一种生产5－氨基乙酰丙酸的工程菌的制备方法，其特征在于：发酵培养基a质量体积配比为0.3％蛋白胨、0.1％葡萄糖、0.3％乙酰基、93％清水，ph值为8。

6.根据权利要求5一种生产5－氨基乙酰丙酸的工程菌的制备方法，其特征在于：发酵培养基b质量体积配比为0.5％蛋白胨、0.3％酵母粉、0.6％琥珀酸、86％清水，ph值为5。

7.根据权利要求6一种生产5－氨基乙酰丙酸的工程菌的制备方法，其特征在于：发酵培养基c质量体积配比为0.4％蛋白胨、0.6％酵母粉、0.2％苄基酸、88％清水，ph值为7。

技术总结
本发明公开了一种生产5－氨基乙酰丙酸的工程菌的制备方法，将包含异柠檬酸脱氢酶、镁盐、乙酰基以及苄基，其反应体系调至合适pH值，搅拌棒均匀搅拌混合而成，离心机转速设置为600r/min，转动时间10min，得到混合物A，静置3小时，反应剂与萃取液质量比为1：2.5，对混合物A采用有机溶剂使用萃取法分离提取乙酰丙酸，升温离心机对反应剂加热，温度为45℃。该生产5－氨基乙酰丙酸的工程菌的制备方法，使用多种配比的方式，可实现不同的效果，采用不同的发酵培养基对氨基乙酰丙酸的工程菌进行制备，实现不同的效果，便于工作人员后续将所制备的氨基乙酰丙酸的工程菌应用在不同的行业领域，可根据不同的行业需求，对其进行制备，能够有效提升使用效果。

技术研发人员：张磊
受保护的技术使用者：苏州越山生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15