一种携带HiBiT标签的流感病毒及其构建方法和应用

本发明属于生物医药，具体涉及一种携带hibit标签的流感病毒及其构建方法和应用。

背景技术：

1、a型流感病毒(iav)属于正粘病毒科成员，其基因组是一种单股负链rna，分为8节段。iav最大的特点是容易变异或者发生基因重排产生新型流感病毒，产生的新型流感病毒的传播能力和致病能力很难预测，并且增加了iav的防控难度。

2、iav根据其表面结构及其基因特性(ha和na)的不同可分为许多亚型，到目前为止iav已发现的血凝素ha有18个亚型(h1-h18)，神经氨酸酶(ha)有11个亚型(n1-11)。iav基因组至少编码17种以上病毒蛋白，包括两种外膜蛋白血凝素ha和神经氨酸酶na。其内部蛋白分别是核蛋白np、三种聚合酶pb1、pb2和pa，两种基质蛋白m1和m2，非结构蛋白ns1等。iav在进化过程中会产生基因突变或基因重排产生新型iav，产生的iav有些可以感染人和哺乳动物，使公共卫生安全产生严重的危机。目前使用的iav疫苗不能提供理想的保护，因此需要经常更新疫苗株。由于iav耐药株的不断出现和现有药物对iav抑制效果的不可控性，需要开发新型的抗病毒药物试剂。然而无论是疫苗研发还是抗病毒药物试剂的筛选均需要进行免疫能力测试和药效评估，都会耗费研究者大量的时间。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种携带hibit标签的流感病毒，是一种稳定性高、复制能力好、灵敏性强的报告病毒，用于抗病毒药物、抗体或者疫苗的评价和评估工具。

2、本发明提供了一种携带hibit标签的流感病毒，包括在流感病毒的基因组基础上，将非结构蛋白ns1基因和hibit标签融合表达。

3、优选的，所述hibit标签替换了在非结构蛋白ns1基因的rna结合域和效应域之间74～84位氨基酸。

4、优选的，所述hibit标签的核苷酸序列如seq id no:1所示。

5、优选的，改造后的非结构蛋白ns1基因的核苷酸序列如seq id no:2所示。

6、优选的，所述流感病毒包括a型流感病毒；

7、优选的，所述a型流感病毒的np基因的核苷酸序列如seq id no:3所示；

8、聚合酶pb1基因的核苷酸序列如seq id no:4所示；

9、聚合酶pb2基因的核苷酸序列如seq id no:5所示；

10、聚合酶pa基因的核苷酸序列如seq id no:6所示；

11、基质蛋白m基因的核苷酸序列如seq id no:7所示；

12、血凝素ha基因的核苷酸序列如seq id no:8所示；

13、神经氨酸酶na基因的核苷酸序列如seq id no:9所示。

14、本发明提供了所述携带hibit标签的流感病毒的构建方法，包括以下步骤：

15、制备ns1-hibit融合基因；

16、将所述ns1-hibit融合基因、np基因、pb1基因、pb2基因、pa基因、m基因、ha基因、na基因分别构建入表达载体中，得到重组表达载体；

17、将所述重组表达载体进行共转染至哺乳动物细胞中进行病毒拯救，得到携带hibit标签的流感病毒。

18、优选的，在所述病毒拯救后进行病毒增殖；所述病毒增殖的方法为将拯救后的病毒株接种至鸡胚中培养，收集病毒。

19、优选的，所述病毒拯救的时间为在所述共转染后，进行48～96小时的培养；

20、所述哺乳动物细胞为293t细胞。

21、本发明提供了所述携带hibit标签的流感病毒或所述构建方法得到的携带hibit标签的流感病毒在以下产品的筛选和/或评估中的应用：抗流感病毒药物、抗流感病毒抗体和流感病毒疫苗。

22、本发明提供了一种携带hibit标签的流感病毒，包括在流感病毒的基因组基础上，将非结构蛋白ns1基因和hibit标签融合表达。实验表明，本发明构建的携带hibit标签的流感病毒在hibit标签稳定表达的基础上，还具有病毒复制能力强、稳定、易于检测，采用其进行抗流感病毒药物筛选，具有灵敏度高的显著优势，检测时间短，相比现有传统检测方法大大节约了时间。

23、本发明提供的所述携带hibit标签的流感病毒的构建方法，也可以应用于其他亚型流感病毒，如h1n1、h3n2等的报告病毒构建，对相应抗病毒药物、抗体或者疫苗的评价和评估具有重要的科研价值。

技术特征：

1.一种携带hibit标签的流感病毒，其特征在于，包括在流感病毒的基因组基础上，将非结构蛋白ns1基因和hibit标签融合表达。

2.根据权利要求1所述携带hibit标签的流感病毒，其特征在于，所述hibit标签替换了在非结构蛋白ns1基因的rna结合域和效应域之间的74～84位氨基酸。

3.根据权利要求1所述携带hibit标签的流感病毒，其特征在于，所述hibit标签的核苷酸序列如seq id no:1所示。

4.根据权利要求1所述携带hibit标签的流感病毒，其特征在于，改造后的非结构蛋白ns1基因的核苷酸序列如seq id no:2所示。

5.根据权利要求1～4中任意一项所述携带hibit标签的流感病毒，其特征在于，所述流感病毒包括a型流感病毒。

6.根据权利要求5所述携带hibit标签的流感病毒，其特征在于，所述a型流感病毒的np基因的核苷酸序列如seq id no:3所示；

7.权利要求1～6中任意一项所述携带hibit标签的流感病毒的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

8.根据权利要求7所述构建方法，其特征在于，在所述病毒拯救后进行病毒增殖；所述病毒增殖的方法为将拯救后的病毒株接种至鸡胚中培养，收集病毒。

9.根据权利要求7所述构建方法，其特征在于，所述病毒拯救的时间为在所述共转染后，进行48～96小时的培养；

10.权利要求1～6中任意一项所述携带hibit标签的流感病毒或权利要求7～9中任意一项所述构建方法得到的携带hibit标签的流感病毒在以下产品的筛选和/或评估中的应用：抗流感病毒药物、抗流感病毒抗体和流感病毒疫苗。

技术总结
本发明提供了一种携带HiBiT标签的流感病毒及其构建方法和应用，属于生物医药技术领域。一种携带HiBiT标签的流感病毒，包括在流感病毒的基因组基础上，将非结构蛋白NS1基因和HiBiT标签融合表达。本发明在NS1基因RNA结合域和效应域之间的连接处替换为Nanoluc荧光素酶报告基因的小亚基HiBiT用于检测荧光素酶活性。构建荧光素酶报告病毒具有优异的稳定性和复制能力，方便检测，可用于抗病毒药物、抗体或者疫苗的评价和评估，具有重要的科研价值。

技术研发人员：朱启运,徐帅,王正祥
受保护的技术使用者：中国农业科学院兰州兽医研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16