一种鸡AGRP多克隆抗体及其制备方法和应用

本发明涉及多克隆抗体，尤其是涉及一种鸡agrp多克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术：

1、刺鼠相关蛋白(agouti related neuropeptide,agrp)最初是1997年人们在寻找与刺豚鼠毛色特征相关的基因—agouti基因的同源基因时发现的，后人通过荧光原位杂交发现agrp在下丘脑内侧基底部的弓状核(arcuate nucleus，arc)内的神经元中，并与神经肽y(npy)共表达。

2、之后agrp基因作为动物采食调控分子研究领域的明星基因，在哺乳动物中被广泛研究，当机体处于饥饿状态时，agrp神经元会被激活，从而促进机体发生采食行为，同时降低机体的能量代谢水平；反之，当机体进食后，体内的胰岛素及瘦素水平升高，下丘脑的agrp神经元活性受到抑制，机体食欲下降。

3、agrp相关抗体的商品化应用也集中在哺乳动物上，目前尚无商品化的鸡agrp多克隆抗体及鸡agrp抗体在鸡上的商品化应用的任何报道，另外，由于鸡agrp蛋白与哺乳动物如人、鼠的agrp蛋白亲缘性较远，两者的agrp抗体类产品无法通用，因而十分有必要开发一种鸡agrp多克隆抗体的制备方法，以填补鸡agrp抗体及商品化应用的空白，为进一步开展agrp在鸡下丘脑采食调控功能的研究奠定基础，从而为深入研究鸡的采食调控，实现养殖户收益最大化提供理论支持。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种鸡agrp多克隆抗体及其制备方法和应用，以填补鸡agrp抗体及商品化应用的空白，为进一步开展agrp在鸡下丘脑采食调控功能的研究奠定基础，从而为深入研究鸡的采食调控，实现养殖户收益最大化提供理论支持。

2、为实现上述目的，本发明提供一种鸡agrp多克隆抗体及其制备方法和应用，一种鸡agrp多克隆抗体的制备方法，步骤如下：

3、s1、分析鸡agrp蛋白，确定多肽抗原序列；

4、s2、人工合成多肽抗原序列，并检测合成的多肽序列是否正确；

5、s3、选正确合成的多肽抗原序列与klh进行偶联；

6、s4、对小鼠进行基础免疫和加强免疫，检测效价符合要求时，取免疫小鼠全血，离心，获得抗血清。

7、优选的，所述步骤s1中的多肽抗原序列为crkisttfpcgkn。

8、优选的，所述步骤s1中确定多肽抗原序列的方法为：比对禽类动物、哺乳动物中的agrp蛋白的氨基酸序列，找到鸡中特异性高的序列，从上述特异性序列中选择亲水性评分高的序列作为多肽抗原序列。

9、优选的，所述步骤s2中人工合成多肽抗原采用固相合成法；对合成的多肽序列进行检测采用质谱分析和高效液相色谱仪检测相结合的方式。

10、优选的，在进行所述步骤s3中的偶联前需对klh进行活化。

11、优选的，所述步骤s4中基础免疫使用完全弗氏佐剂，加强免疫使用不完全弗氏佐剂；佐剂与抗原多肽混合时采用将抗原多肽原液快速推入佐剂中的方式，按每只注射40μg抗原的量进行多点肌肉注射免疫。

12、一种如上所述制备方法制备的鼠源鸡agrp多克隆抗体及多克隆抗体商品。

13、一种如上所述制备方法制备的鼠源鸡agrp多克隆抗体的应用。

14、因此，本发明提供的一种鸡agrp多克隆抗体及其制备方法和应用，其具体技术效果如下：

15、(1)应用本发明提供的制备方法首次成功制备了鼠源鸡agrp抗体，制备的抗体特异性强，效价高；

16、(2)本发明提供的制备方法简单有效，可以用于商业化生产；

17、(3)本发明提供的制备方法和鼠源鸡agrp抗体可以用于鸡下丘脑采食调控功能的相关研究。

18、下面通过附图和实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。

技术特征：

1.一种鸡agrp多克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤如下：

2.根据权利要求1所述的一种鸡agrp多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤s1中的多肽抗原序列为crkisttfpcgkn。

3.根据权利要求1所述的一种鸡agrp多克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤s1中确定多肽抗原序列的方法为：比对禽类、哺乳类、鱼类、两栖类动物中实验常用动物的agrp蛋白的氨基酸序列，找到鸡中特异性高的序列，从上述特异性序列中选择亲水性、抗原性以及二级结构综合评分高的序列作为多肽抗原序列。

4.根据权利要求1所述的一种鸡agrp多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤s2中人工合成多肽抗原采用固相合成法；对合成的多肽序列进行检测采用质谱分析和高效液相色谱仪检测相结合的方式。

5.根据权利要求1所述的一种鸡agrp多克隆抗体的制备方法，其特征在于：在进行所述步骤s3中的偶联前需对klh进行活化。

6.根据权利要求1所述的一种鸡agrp多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤s4中基础免疫使用完全弗氏佐剂，加强免疫使用不完全弗氏佐剂；佐剂与抗原多肽混合时采用将抗原多肽原液快速推入佐剂中的方式，按每只注射40μg抗原的量进行多点肌肉注射免疫。

7.一种如权利要求1-6任一项所述制备方法制备的鼠源鸡agrp多克隆抗体及多克隆抗体商品。

8.一种如权利要求1-6任一项所述制备方法制备的鼠源鸡agrp多克隆抗体的应用。

技术总结
本发明公开了一种鸡AGRP多克隆抗体及其制备方法和应用，其中一种鸡AGRP多克隆抗体的制备方法，步骤如下：S1、分析鸡AGRP蛋白，确定多肽抗原序列；S2、人工合成多肽抗原序列，并检测合成的多肽序列是否正确；S3、选正确合成的多肽抗原序列与KLH进行偶联；S4、对小鼠进行基础免疫和加强免疫，检测效价符合要求时，取免疫小鼠全血，离心，获得抗血清。应用本发明提供的制备方法首次成功制备了鼠源鸡AGRP抗体，制备的抗体特异性强，效价高；提供的制备方法简单有效，可以用于商业化生产；提供的制备方法和鼠源鸡AGRP抗体可以用于鸡下丘脑采食调控功能的相关研究。

技术研发人员：田亚东,乐雅馨,康相涛,李文婷,刘小军,李东华,张彦华,宫玉杰,李国喜,蒋瑞瑞,李红,孙桂荣,韩瑞丽,李转见,张自豪,任阳光,赵玉点,翟彬,吴星
受保护的技术使用者：河南农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16