一株卷曲乳杆菌及其在预防或治疗女性阴道炎中的应用的制作方法

本发明涉及益生菌筛选与应用，具体涉及一株卷曲乳杆菌，其具有预防或治疗女性阴道炎的作用。

背景技术：

1、阴道菌群对维护阴道内环境的稳定和调节发挥着不可替代的作用。阴道菌群非常复杂，除原虫、真菌外，尚包括很多需氧菌及厌氧菌，如乳链球菌、肠杆菌、变形杆菌、加夫基球菌、韦永球菌等细菌，这些微生物可分为共栖的及病理性的，都生长在这个共同的环境内，各微生物之间可能有拮抗作用。在ph3.8～4.2时，有利于共栖益生菌的繁殖，尤其是乳酸杆菌，这是健康阴道中的主要益生菌种，阴道液中的密度可达105～108ml，当阴道被病原微生物感染后，假使乳酸杆菌占优势，仍能维持阴道内ph3.8～4.2的弱酸环境，并且有的乳酸杆菌还能产生h202，对其他微生物有毒性作用而抑制其繁殖，阴道则不会发生疾病。一旦病原微生物繁殖力超过益生菌，就会破坏乳酸菌的生长环境，进而破坏阴道内环境，最终导致妇科疾病发生。妇科疾病发生后，往往不能很有效的调节治疗，且顽固的炎症反复发作，严重影响女性生殖健康。其中细菌性阴道炎（bacterial vaginosis，bv）是由阴道菌群失调引起的疾病之一，多以乳杆菌下降及厌氧菌 (包括阴道加德纳菌和阴道阿托波氏菌)升高为特征。bv发病率介于5%–50%之间，可导致瘙痒、异味和白带异常，已成为全球范围内影响妇女日常生活、性生活质量及公共卫生安全的重要问题。当前，细菌性阴道炎以抗生素治疗为主（包括甲硝唑和克林霉素），但抗生素疗法治愈率低且复发率高，难以达到患者的预期。因此，我们迫切需要寻求一种安全、有效的治疗方法以减轻细菌性阴道炎患者生理和心理的负担。

2、益生菌最早由俄国微生物学家在20世纪初发现，发展至今已有一个多世纪。在这一个多世纪中，益生菌的概念以及功效已经被科学家和消费者所认同。益生菌不仅能够在人体肠道或皮肤上形成优势菌群而且能够紧密结合在肠粘膜或皮肤上构成一道天然生物屏障，使得整个人体肠道或皮肤处在“健康”状态。益生菌主要是通过细菌拮抗粘附或者产生抗菌肽等方式来调节肠道健康与身体健康。阴道中乳酸杆菌类型较为复杂，至今报道的阴道乳酸杆菌大约有25种，以卷曲乳酸杆菌、格氏乳酸杆菌、惰性乳酸杆菌、詹氏乳酸杆菌为优势菌居多。体外研究表明，从健康妇女阴道分离出来的乳杆菌可以抑制阴道加德纳氏菌的黏附，甚至能够代替已经黏附于阴道上皮的加德纳氏菌。kremleva等研究发现，产h2o2的乳酸杆菌可以刺激阴道上皮细胞分泌抗菌物质，增加已经合成的保护因子的活性，如溶菌酶、乳铁蛋白等。在患有细菌性阴道病的女性中，发现此种其乳酸杆菌严重缺乏，特别是孕妇。因此，利用从健康女性阴道分泌物中筛选的阴道优势菌株制成药剂或卫生用品，是一种安全、有效的预防和治疗细菌性阴道炎的方法。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一株卷曲乳杆菌（ lactobacillus crispatus）及其应用。所述卷曲乳杆菌从健康女性阴道分泌物中筛选得到，属于阴道正常菌株，能有效抑制加德纳氏菌、白色念球菌、金黄色葡萄球菌等多种阴道病原菌，可广泛应用于女性细菌性和霉菌性阴道炎的预防或辅助治疗。

2、本发明首先提供了一株卷曲乳杆菌（ lactobacillus crispatus）vhprobi e04株，已于2023年4月24日保藏于中国武汉 武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏号为cctcc no：m2023608。

3、所述的卷曲乳杆菌vhprobi e04株，其16s rdna序列为seq id no:1。

4、所述的卷曲乳杆菌vhprobi e04株，其maldi-tof-ms蛋白质指纹图谱如图3所示；其rep-pcr指纹图谱如图4所示；其rapd指纹图谱如图5所示。

5、本发明还提供了所述卷曲乳杆菌vhprobi e04株在制备抑菌剂中的应用。

6、本发明还提供了所述卷曲乳杆菌vhprobi e04株在制备用于预防或治疗由细菌或霉菌引发的阴道炎的药品中的应用。

7、所述细菌为加德纳氏菌或金黄色葡萄球菌。

8、所述霉菌为白色念珠菌。

9、本发明还提供了一种用于阴道炎症的组合物，包含所述卷曲乳杆菌vhprobi e04株的活菌、灭活菌体或其发酵产物。

10、所述组合物为非治疗性的阴道用健康产品，包括阴道保健用品、阴道清洁用品、阴道护理用品、阴道用化妆品及阴道卫生用品。

11、所述组合物为治疗性的阴道用健康产品，包括阴道用药品。

12、所述组合物为阴道用医疗器械。

13、本发明提供的卷曲乳杆菌vhprobi e04可以产抑菌物质h2o2，能够有效抑制阴道病原菌加德纳氏菌和金黄色葡萄球菌的生长，抑菌圈直径分别达到1.38±0.05cm和2.15±0.21cm；该菌株在混合培养条件下能高效抑制加德纳氏菌和白色念珠菌的生长，抑制率分别达到94%和100%，而且该菌株对人阴道上皮细胞具有一定的粘附性，可以定植在阴道内，因此可以广泛应用于细菌性阴道炎和霉菌性阴道炎的预防和辅助治疗。

14、本发明提供的卷曲乳杆菌vhprobi e04对常见抗生素敏感，生物安全性良好；能够耐受较高的盐度，最大耐受盐浓度为3%；能在45℃生长，具有一定的耐热性。该菌株具备较强的抗氧化功能，其中对dpph和hrs自由基的清除率分别为24.28%±1.03%和24.19%±4.63%；其上清液、菌体和胞内提取物的抗脂质过氧化抑制率分别为39.18%±0.17%、10.71%±0.19%和15.40%±0.19%，效果显著。

15、本发明提供的卷曲乳杆菌vhprobi e04可制成抑菌剂、药物或是女性卫生产品，将有助于缓解细菌性阴道炎和霉菌性阴道的不适症状和保持女性阴道的健康。

技术特征：

1.一株卷曲乳杆菌（lactobacillus crispatus），其特征在于，所述卷曲乳杆菌已于2023年4月24日保藏于中国武汉 武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏号为cctccno：m2023608。

2.如权利要求1所述的卷曲乳杆菌，其特征在于，所述卷曲乳杆菌的16s rdna序列为seq id no：1。

3.权利要求1所述的卷曲乳杆菌在制备抑菌剂中的应用。

4.权利要求1所述的卷曲乳杆菌在制备用于预防或治疗由细菌或霉菌引发的阴道炎的药品中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述细菌为加德纳氏菌或金黄色葡萄球菌。

6.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述霉菌为白色念珠菌。

7.一种用于阴道的组合物，其特征在于，包含权利要求1所述的卷曲乳杆菌活菌、灭活菌体或其发酵产物。

8.如权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述组合物为非治疗性的阴道用健康产品，包括阴道保健用品、阴道清洁用品、阴道护理用品、阴道用化妆品及阴道卫生用品。

9.如权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述组合物为治疗性的阴道用健康产品，包括阴道用药品。

10.如权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述组合物为阴道用医疗器械。

技术总结
本发明涉及功能微生物筛选与应用技术领域，具体提供了一株卷曲乳杆菌（Lactobacillus crispatus）及其应用。所述卷曲乳杆菌从健康女性阴道分泌物中筛选得到，属于阴道正常菌株，能有效抑制加德纳氏菌、白色念球菌、金黄色葡萄球菌等多种阴道病原菌。所述卷曲乳杆菌已于2023年4月24日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCC NO：M2023608，可广泛应用于女性细菌性和霉菌性阴道炎的预防或辅助治疗。

技术研发人员：张景燕,段治,张晓旭,程淑敏,步欣萍,李鑫萍,郭超群,王倩,倪海平,刘金
受保护的技术使用者：山东百沃生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/6