用于调控细胞内m6A甲基化修饰的方法

本发明涉及分子修饰的调控，具体地涉及用于调控细胞内m6a甲基化修饰的方法。

背景技术：

1、目前已报道了关于细胞力学环境调控细胞的研究，例如通过单细胞测量法等方法研究m6a修饰与力学信号的相互作用。然而，这些技术往往需要大量手动操作，操作难度大、工作效率低，且精度和稳定性存在局限性。同时，现有技术也难以完全模拟组织力学异质性微环境对细胞m6a甲基化修饰的影响，其结果也难以在实际生物学研究中得到广泛应用。

2、背景技术中的信息仅仅在于说明本发明的总体背景，不应视为承认或以任何形式暗示这些信息构成本领域一般技术人员所公知的现有技术。

技术实现思路

1、为解决现有技术中的至少部分技术问题，本发明提供一种用于调控m6a甲基化修饰的方法。具体地，其包括以下步骤：

2、(1) 使细胞包裹于具有三维结构的水凝胶内部；

3、(2) 通过作用于所述水凝胶的外部压力使所述水凝胶变形，由此向所述细胞施加压力来模拟组织力学异质性微环境，并在所述组织力学异质性微环境中培养细胞；和

4、(3) 收集细胞并检测细胞的m6a甲基化修饰。

5、在某些实施方案中，根据本发明所述的用于调控m6a甲基化修饰的方法，其中，所述水凝胶的压缩模量为0.7-10kpa。

6、在某些实施方案中，根据本发明所述的用于调控m6a甲基化修饰的方法，其中，所述水凝胶包括天然的亲水性高分子或超分子水凝胶和人工合成的亲水性高分子或超分子水凝胶中的至少一种。

7、在某些实施方案中，根据本发明所述的用于调控m6a甲基化修饰的方法，其中，所述外部压力通过弹性材料作用于所述水凝胶。

8、在某些实施方案中，根据本发明所述的用于调控m6a甲基化修饰的方法，其中，所述弹性材料包括聚二甲基硅氧烷。

9、在某些实施方案中，根据本发明所述的用于调控m6a甲基化修饰的方法，其中，通过分析细胞内去甲基化酶和/或甲基化酶来检测m6a甲基化修饰。

10、在某些实施方案中，根据本发明所述的用于调控m6a甲基化修饰的方法，其中，通过单细胞测量来检测m6a甲基化修饰。

11、在某些实施方案中，根据本发明所述的用于调控m6a甲基化修饰的方法，其中，通过加压装置使外部压力作用于所述水凝胶。

12、在某些实施方案中，根据本发明所述的用于调控m6a甲基化修饰的方法，其中，所述水凝胶设置于细胞培养孔板的至少一个培养孔内。

13、在某些实施方案中，根据本发明所述的用于调控m6a甲基化修饰的方法，其中，所述加压装置包括底座和设置于所述底座的至少一个加压柱，所述加压柱设置为能够进出所述培养孔；优选地，所述加压装置的底座设置为能够盖住所述细胞培养孔板的上方，且设置有与培养孔数量和位置一致的加压柱；优选地，所述加压装置进一步包括夹具，其包括本体和紧固件。

14、现有技术公开了包括利用微流控技术制备细胞球，并通过荧光染色或其他方法对m6a修饰进行检测。然而，该技术的操作仍然较为繁琐，需要涉及多个步骤和仪器设备，且存在样本损失的问题。同时，该技术难以模拟组织力学异质性微环境对细胞m6a甲基化修饰的影响，其结果也存在偏差。相比之下，本发明通过弹性材料传导外力来模拟组织力学异质性微环境对细胞m6a甲基化修饰的影响，实现了对细胞的高通量处理和精确控制，具有更高的准确性和可靠性。

技术特征：

1.一种用于调控m6a甲基化修饰的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的用于调控m6a甲基化修饰的方法，其特征在于，所述水凝胶的压缩模量为0.7-10kpa。

3.根据权利要求1所述的用于调控m6a甲基化修饰的方法，其特征在于，所述水凝胶包括天然的亲水性高分子或超分子水凝胶和人工合成的亲水性高分子或超分子水凝胶中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的用于调控m6a甲基化修饰的方法，其特征在于，所述外部压力通过弹性材料作用于所述水凝胶。

5.根据权利要求4所述的用于调控m6a甲基化修饰的方法，其特征在于，所述弹性材料包括聚二甲基硅氧烷。

6.根据权利要求1所述的用于调控m6a甲基化修饰的方法，其特征在于，通过分析细胞内去甲基化酶和/或甲基化酶来检测m6a甲基化修饰。

7.根据权利要求1所述的用于调控m6a甲基化修饰的方法，其特征在于，通过单细胞测量来检测m6a甲基化修饰。

8.根据权利要求1所述的用于调控m6a甲基化修饰的方法，其特征在于，通过加压装置使外部压力作用于所述水凝胶。

9.根据权利要求8所述的用于调控m6a甲基化修饰的方法，其特征在于，所述水凝胶设置于细胞培养孔板的至少一个培养孔内。

10.根据权利要求9所述的用于调控m6a甲基化修饰的方法，其特征在于，所述加压装置包括底座和设置于所述底座的至少一个加压柱，至少所述加压柱由弹性材料制成，且设置为能够进出所述培养孔。

技术总结
本发明公开用于调控细胞内m<supgt;6</supgt;A甲基化修饰的方法。利用弹性柱的弹性柔韧性，改变加压柱的形变量，为体外三维培养在水凝胶中的各细胞球提供可控制和可重复的静态应力变化，模拟组织力学异质性微环境，为检测力学调控牙胚发育提供了重要手段。同时，通过模拟计算得到加压柱形变下压的不同高度对水凝胶中细胞球所受的压力数值，从而实现精确调节细胞球所受到的力。此外，本发明的加压装置在撤销后，细胞可继续培养，亦可进行后续的分子生物实验，通过显微摄像以及计算机图像处理技术对细胞生长及形态变化进行观测与分析。本发明可广泛应用于生物力学、细胞力学及生物学研究领域。

技术研发人员：杨玥,陈晨,邓旭亮,卫彦,李玲君,罗春雄,王淑静,高峥嵘,姚玮彤,周团锋
受保护的技术使用者：北京大学口腔医学院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15