一种可用于防控芋头疫病的超敏多肽及其应用的制作方法

本发明属于新型农药研发领域，涉及一种可用于防控芋头疫病的超敏多肽及其应用。

背景技术：

1、化学农药在农业生产中发挥积极的作用，它能够有效防控作物病虫害的发生，保障作物产量的稳定。但是传统化学农药具有高毒性、高残留、对人畜及生态环境危害较大，目前被视为食品安全和环境污染的主要原因之一。因此，传统化学农药已经不能满足现代绿色农业的发展需要。随着当今人们对环境保护和食品安全的意识逐步增强，研发对人畜安全、环境影响小的绿色生物农药已成为世界各国农业病害防控领域发展的主流趋势。

2、harpin蛋白是由革兰氏阴性植物病原细菌通过三型分泌系统分泌的一类富含甘氨酸且具有热稳定性的蛋白。harpin蛋白典型作用特征是外源处理可以诱导植物叶片产生细胞死亡，即超敏反应，同时诱导植物的免疫抗性提高。因此，harpin蛋白也常被称为超敏蛋白。植物青枯菌popa1分泌蛋白于1994年被首次报道，其具有热稳定性且可以诱导烟草的超敏反应，因此被认定为一类harpin蛋白，但popa1的蛋白序列和结构特征与其他harpin蛋白具有明显区别。然而，popa1蛋白中能诱导超敏反应的具体肽段以及其在防控作物病害中的实际作用，至今仍不明确。

3、芋头疫病由芋疫霉菌(phytophthoracolocasiaeracib.)所引起的真菌性病害，主要为害叶片，也为害叶柄及球茎。受侵染的芋头植株，最先从叶片开始发病，导致叶片组织干枯、破裂和脱落，仅残留叶脉。病情发展后期可危害整个植株，严重时导致芋头球茎发病变褐。芋头疫病发病周期长、危害损失大，被视为影响芋头产量的主要病害之一。生产中芋头疫病的防控主要依赖化学农药，常用的化学药剂包括：嘧菌酯、氟醚烯酰、甲霜灵等。然而，目前少有针对芋头疫病所研发的有效绿色新型生物农药。本发明研发了一种植物青枯菌popa1蛋白多肽pa105，其具有诱导烟草超敏反应的功能并可以有效防控芋头疫病的发生。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种可诱导植物超敏反应并可用于防控芋头疫病的超敏多肽及其应用。

2、为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

3、一种可用于防控芋头疫病的超敏多肽，所述超敏多肽为1)或2)：

4、1)氨基酸序列如seq id no.3所示的多肽；

5、2)在氨基酸序列如seq id no.3所示的多肽的n端连接gst标签得到的融合多肽。

6、一种编码可用于防控芋头疫病的超敏多肽的核酸分子，其核苷酸序列如seq idno.2所示。

7、一种表达可用于防控芋头疫病的超敏多肽的重组载体，其是将核苷酸序列如seqid no.2所示的核酸分子插入骨架载体后得到，所述骨架载体为带有gst标签的pgex-4t-1载体。

8、一种表达可用于防控芋头疫病的超敏多肽的重组菌，其是将权利要求3所述的重组载体导入宿主菌后获得，所述宿主菌为大肠杆菌。

9、一种可用于防控芋头疫病的超敏多肽的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

10、(1)构建携带有核苷酸序列如seq id no.2所示的核酸分子的重组载体；

11、(2)将步骤(1)的重组载体导入大肠杆菌感受态细胞，获得重组菌；

12、(3)将步骤(2)的重组菌接种培养，iptg诱导其表达；

13、(4)收获步骤(3)的表达产物，并进行纯化，得到可用于防控芋头疫病的超敏多肽。

14、上述一种超敏多肽在诱导烟草超敏反应中的应用。

15、上述一种超敏多肽在防控芋疫病中的应用。

16、本发明的有益效果在于：

17、本发明通过简单快速的方法制备出一种超敏多肽，其可以预防性的降低芋疫病的发生，提高芋头的抗病能力。

技术特征：

1.一种可用于防控芋头疫病的超敏多肽，其特征在于：所述超敏多肽为1）或2）：

2.一种编码可用于防控芋头疫病的超敏多肽的核酸分子，其特征在于：其核苷酸序列如seq id no.2所示。

3.一种表达可用于防控芋头疫病的超敏多肽的重组载体，其特征在于：其是将核苷酸序列如seq id no.2所示的核酸分子插入骨架载体后得到。

4.根据权利要求3所述的重组载体，其特征在于：所述骨架载体为带有gst标签的pgex-4t-1载体。

5.一种表达可用于防控芋头疫病的超敏多肽的重组菌，其特征在于：其是将权利要求3所述的重组载体导入宿主菌后获得。

6.根据权利要求5所述的重组菌，其特征在于：所述宿主菌为大肠杆菌。

7.一种可用于防控芋头疫病的超敏多肽的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

8.如权利要求1所述的超敏多肽在诱导烟草超敏反应中的应用。

9.如权利要求1所述的超敏多肽在防控芋疫病中的应用。

技术总结
本发明公开了一种可用于防控芋头疫病的超敏多肽及其应用。所述超敏多肽为1）或2）：1）氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的多肽；2）在氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的多肽的N端连接GST标签得到的融合多肽。利用20μg/mL的超敏多肽溶液注射烟草叶片5天后可以观察到清晰的超敏反应出现。利用20μg/mL的超敏多肽溶液均匀喷施于芋头叶片上，24小时后喷雾接种芋头疫霉菌孢子，7天后统计发病指数表明，超敏多肽处理与对照处理相比可有效抑制芋头疫病的发生。

技术研发人员：时华,王莫,王宗华
受保护的技术使用者：福州市承肽农业生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15