一种快速从鼻咽拭子中提取核酸的试剂盒及提取方法与流程

本发明涉及一种核酸提取，具体涉及一种快速从鼻咽拭子中提取核酸的试剂盒及提取方法。

背景技术：

1、随着分子生物学的快速发展，研究者们对核酸的关注日益增加。尤其是在分子诊断领域，进行病原体核酸检测或基因检测时，都对核酸的浓度、纯度有较高的要求，且涉及到人或动物基因组dna、病原体dna、病原体rna等。但传统的采血获取核酸样本的方式会对被采样者造成伤害，因此，一些采样方式利用无创的鼻咽拭子代替传统的采血检验。例如呼吸道感染疾病，常见的人呼吸道感染病原体，包括甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞体病毒、冠状病毒、腺病毒、支原体、衣原体等， 均可采用鼻咽拭子进行病原体检测。

2、目前对于鼻咽拭子常用提取核酸的方法主要有酚/氯仿法、柱提法、磁珠法等。酚/氯仿法毒性较大，且核酸的回收率较低，所需样本量大，不适合微量样本分析；柱提法需要较多的样本和耗材，且需要反复离心，不便于高通量、自动化操作；磁珠法更适用于高通量、自动化的快速核酸提取。但是现有的磁珠提取法往往只能针对病原体dna、病原体rna、基因组dna或rna中的部分核酸类型进行高效率提取，不能通用性的对样本中各类型总核酸进行无差别提取，且提取时间依然较长、提取效率有待提高。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种快速从鼻咽拭子中提取核酸的试剂盒及提取方法，其具有提取时间更短、操作更简便、提取效率更高的优点。

2、为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：

3、一种快速从鼻咽拭子中提取核酸的试剂盒，包括设置在盒体内的如下组分：保存液、裂解液、洗涤液、清洗液、洗脱液、蛋白酶k和磁珠；

4、保存液包含以下浓度的组分：1.8-2.2m 异硫氰酸胍，8-11mm edta，0.4-0.6%质量百分比的sds，18-22mm tris-hcl，所述edta的ph为7.0-8.0，tris-hcl的ph为6.6-7；

5、裂解液包含以下浓度的组分：0.8-1.1m 异硫氰酸胍，9-11mm edta，0.4-0.6%体积百分比的triton-x100，0.4-0.6%质量百分比的sds，35-45%体积百分比的异丙醇，0.09-0.11%质量百分比的磁珠，18-22mm tris-hcl，所述edta的ph为7.0-8.0，tris-hcl的ph为6.6-6.9；

6、洗涤液包含以下浓度的组分：0.8-1.2m 异硫氰酸胍，8-12mm edta，45-55%体积百分比的无水乙醇，18-22mm tris-hcl，所述edta的ph为7.0-8.0，tris-hcl的ph为7.0-8.0；

7、清洗液包含以下浓度的组分：75-85%体积百分比的无水乙醇，8-12mm tris-hcl，所述tris-hcl的ph为7.0-8.0；

8、洗脱液包含以下浓度的组分：8-12mm tris-hcl，所述tris-hcl的ph为7.0-8.0。

9、其中，保存液组分浓度如下：2m 异硫氰酸胍，10mm edta，0.5%质量百分比的sds，20mm tris-hcl，所述edta的ph为8.0，tris-hcl的ph为6.8。

10、进一步限定，裂解液组分浓度如下：1m 异硫氰酸胍，10mm edta，0.5%体积百分比的triton-x100，0.5%质量百分比的sds，40%体积百分比的异丙醇，0.1%质量百分比的磁珠，20mm tris-hcl，所述edta的ph为8.0，tris-hcl的ph为6.8。

11、进一步限定，洗涤液组分浓度如下：1m 异硫氰酸胍，10mm edta，50%体积百分比的无水乙醇，20mm tris-hcl，所述edta的ph为8.0，tris-hcl的ph为8.0。

12、进一步限定，清洗液组分浓度如下：80%体积百分比的无水乙醇，10mm tris-hcl，所述tris-hcl的ph为8.0。

13、进一步限定，洗脱液组分浓度如下：10mm tris-hcl，所述tris-hcl的ph为8.0；所述蛋白酶k浓度为20mg/ml。

14、进一步限定，磁珠为硅羟基磁珠。

15、本发明还公开了一种快速从鼻咽拭子中提取核酸的提取方法，包括使用上述的快速从鼻咽拭子中提取核酸的试剂盒，具体提取方法如下：

16、a.向提取容器中依次加入保存液、鼻咽拭子，涡旋混匀后，取液体部分；

17、b.在步骤a中得到的液体中依次加入蛋白酶k、裂解液、磁珠，涡旋混匀2min，分离磁珠后弃液体；

18、c.向步骤b中得到的磁珠中加入洗涤液，涡旋混匀后分离磁珠，弃液体；

19、d.向步骤c中得到的磁珠中加入清洗液，涡旋混匀后分离磁珠，弃液体；

20、e.向步骤d中得到的磁珠中加入洗脱液，涡旋混匀后弃磁珠，即得样本中总核酸溶液。

21、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

22、本发明提供了一种提取时间更短、操作更简便、提取效率更高，并且广泛适用于提取鼻咽拭子中病原体dna、病原体rna、基因组dna和基因组rna的提取方法和试剂盒；

23、本发明可高效率提取鼻咽拭子中包括病原体dna、病原体rna、基因组dna和基因组rna在内的总核酸，适用于各种需要不同核酸类型的提取场景；同时，本发明通过配方优化，能够快速从鼻咽拭子中提取核酸，操作简便，最快5min内即可完成从采样到获取总核酸溶液的全流程提取，且提取效率有所提高；更重要的是，本发明所需样本体积小、试剂量少、步骤简单，且能够轻松提取微量核酸，节省提取试剂，成本低廉。

技术特征：

1.一种快速从鼻咽拭子中提取核酸的试剂盒，其特征在于：包括设置在盒体内的如下组分：保存液、裂解液、洗涤液、清洗液、洗脱液、蛋白酶k和磁珠；

2.根据权利要求1所述的一种快速从鼻咽拭子中提取核酸的试剂盒，其特征在于：保存液组分浓度如下：2m 异硫氰酸胍，10mm edta，0.5%质量百分比的sds，20mm tris-hcl，所述edta的ph为8.0，tris-hcl的ph为6.8。

3.根据权利要求1所述的一种快速从鼻咽拭子中提取核酸的试剂盒，其特征在于：裂解液组分浓度如下：1m 异硫氰酸胍，10mm edta，0.5%体积百分比的triton-x100，0.5%质量百分比的sds，40%体积百分比的异丙醇，0.1%质量百分比的磁珠，20mm tris-hcl，所述edta的ph为8.0，tris-hcl的ph为6.8。

4.根据权利要求1所述的一种快速从鼻咽拭子中提取核酸的试剂盒，其特征在于：洗涤液组分浓度如下：1m 异硫氰酸胍，10mm edta，50%体积百分比的无水乙醇，20mm tris-hcl，所述edta的ph为8.0，tris-hcl的ph为8.0。

5.根据权利要求1所述的一种快速从鼻咽拭子中提取核酸的试剂盒，其特征在于：清洗液组分浓度如下：80%体积百分比的无水乙醇，10mm tris-hcl，所述tris-hcl的ph为8.0。

6.根据权利要求1所述的一种快速从鼻咽拭子中提取核酸的试剂盒，其特征在于：洗脱液组分浓度如下：10mm tris-hcl，所述tris-hcl的ph为8.0；所述蛋白酶k浓度为20mg/ml。

7.根据权利要求1所述的一种快速从鼻咽拭子中提取核酸的试剂盒，其特征在于：磁珠为硅羟基磁珠。

8.一种快速从鼻咽拭子中提取核酸的提取方法，其特征在于：包括使用权利要求1-7中任意一项所述的快速从鼻咽拭子中提取核酸的试剂盒，具体提取方法如下：

技术总结
本发明公开了一种快速从鼻咽拭子中提取核酸的试剂盒及提取方法，属于生物学中核酸提取技术领域，试剂盒包括设置在盒体内的如下组分：保存液、裂解液、洗涤液、清洗液、洗脱液、蛋白酶K和磁珠；保存液包含以下浓度的组分：1.8‑2.2M异硫氰酸胍，8‑11mM EDTA，0.4‑0.6%质量百分比的SDS，18‑22mM Tris‑HCl，所述EDTA的pH为7.0‑8.0，Tris‑HCl的pH为6.6‑7；裂解液包含以下浓度的组分：0.8‑1.1M异硫氰酸胍，9‑11mM EDTA，0.4‑0.6%体积百分比的Triton‑X100；本发明通过配方优化，能够快速从鼻咽拭子中提取核酸，操作简便，最快5min内即可完成从采样到获取总核酸溶液的全流程提取，且提取效率有所提高；更重要的是，本发明所需样本体积小、试剂量少、步骤简单，且能够轻松提取微量核酸，节省提取试剂，成本低廉。

技术研发人员：王丽娟,陶春妃,彭春芳,何密鼓,付文贵,喻瑞
受保护的技术使用者：成都斯马特科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15