一种能够缓解腹泻和调节菌群的植物乳植杆菌及其应用的制作方法

本发明属于微生物，具体涉及一种能够缓解腹泻和调节菌群的植物乳植杆菌及其应用。

背景技术：

1、人体肠道内存在着数量种类众多和功能复杂的微生物。主要以拟杆菌属、普氏菌属、栖粪杆菌属、罗氏菌属、毛螺菌属、萨特菌属等为主，参与着人体的多种代谢、免疫、内分泌调节等生理活动，从营养吸收、能量供应、脂肪代谢等多方面影响着宿主的生理功能。在正常状态下，肠道菌群之间相互制约、协调，共同维持着复杂的肠道微生物生态平衡。腹泻作为一种常见的肠道疾病，主要临床表现为排便量的增加，症状起因包括肠道菌群的改变。

2、益生菌作为一种活菌微生态制剂，在维护肠道微生态平衡方面，起着不可忽视的作用。益生菌在肠道微环境中进行代谢活动，合成有益代谢物以及促进一些细胞因子的产生，从而抑制有害病原菌的生长繁殖。益生菌的功效机理取决于宿主的微生物系或者肠粘膜的免疫活性细胞之间的相互作用。目前已知作用于肠道微生物系的功效机理有：降低肠道ph，产生杀菌物质比如有机酸(乳酸，醋酸，丁酸)，h2o2和细菌素，致病微生物凝集，黏附在粘膜的细胞表面，竞争发酵基质或受体，增强肠道粘膜的屏障效果，释放保护肠道的代谢物质(精氨酸，谷氨酰胺，短链脂肪酸，共轭亚油酸)，结合代谢毒性代谢物质，免疫学机理，或者调控肠运动和粘液产生。目前本领域技术人员已尝试采用益生菌制剂调节肠道菌群以缓解腹泻。

3、中国专利申请202210665133.5公开了一种具有缓解和治疗腹泻功能的乳酸菌口服液及其制备方法，所述乳酸菌口服液是通过将鼠李糖乳杆菌发酵制备得到的，活菌量超过30亿cfu/ml，所述鼠李糖乳杆菌的保藏编号为cctcc no.m2022337，通过食用所述乳酸菌口服液，能显著提高人体肠道中乳酸菌和双歧杆菌的数量，优化菌群结构，提高机体免疫力，并且该乳酸菌口服液能有效缓解和治疗成人腹泻，效果明显。

4、中国专利申请202210089886.6公开了一种脆弱拟杆菌在改善和/或治疗腹泻中的应用，通过不同的小鼠腹泻模型试验证明，保藏编号为cgmcc no.10685的脆弱拟杆菌zy-312或其灭活菌，具有改善和治疗腹泻的作用；脆弱拟杆菌灭活菌粉在不同浓度配方下，对改善感染性腹泻或非感染性腹泻效果好，且对机体没有副作用，具有很好的食用和应用前景，提供了一种适合人体服食的保健和改善腹泻的良品。

5、目前本领域仍然需要更多的可缓解腹泻和调节肠道菌群的微生物或益生菌。

技术实现思路

1、生物保藏信息：

2、生物材料：rh03163

3、分类命名：植物乳植杆菌(lactiplantibacillus plantarum)

4、保藏时间：2023年01月09日

5、保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心

6、保藏编号：cgmcc no.26430。

7、为实现以上技术目的，本发明提供的技术方案如下所示：

8、第一方面，本发明提供了一种微生物，所述微生物的16s rdna的核苷酸序列如seqid no:1所示。

9、在一些实施方式中，所述微生物为植物乳植杆菌。

10、第二方面，本发明提供了一种能够缓解腹泻和调节菌群的植物乳植杆菌，所述植物乳植杆菌的16s rdna的核苷酸序列如seq id no:1所示。

11、在一些实施方式中，所述植物乳植杆菌保藏于cgmcc，其保藏编号为cgmccno.26430。

12、第三方面，本发明提供一种微生物菌剂，所述微生物菌剂包括所述微生物或所述植物乳植杆菌的存活形式或死亡形式、及其分离物和/或分泌物。

13、在一些实施方式中，所述存活形式包括可以为一切具有生物活性的植物乳植杆菌，例如：培养液、培养液提取物、全菌、全菌提取物、发酵液、发酵液提取物中的活菌。

14、反之，则为死亡形式。

15、在一些实施方式中，所述微生物菌剂通过适合植物乳植杆菌生长的培养基培养而得。

16、第四方面，本发明提供了一种培养所述微生物或所述植物乳植杆菌的方法，所述方法包括以下步骤：

17、(1)将所述微生物或所述植物乳植杆菌、或其分离物，接种至基础培养基中进行一级培养，得到一级培养物；

18、(2)将所述一级培养物转接到基础培养基中进行二级培养，得到二级培养物；

19、(3)将所述二级培养物转接到优化培养基中进行三级培养，得到所述微生物或所述植物乳植杆菌的培养物。

20、在一些实施方式中，所述一级培养和二级培养的条件为36.5-37.5℃培养16-20h。

21、在一些实施方式中，步骤(2)中所述一级培养物和步骤(3)中所述二级培养物的接种量为4-6％(v/v，体积比)；和/或

22、在一些实施方式中，步骤(3)中所述培养物的ph值为3.8-4.2。

23、第五方面，本发明提供了所述微生物、所述植物乳植杆菌和/或所述微生物菌剂在制备缓解腹泻和/或调节菌群的产品中的应用。

24、在一些实施方式中，所述产品包括食品、药物、药物原料或食品原料。

25、在一些实施方式中，所述食品包括保健品、调味品、乳制品、饮料、饼干、冷冻饮品、糖果制品、酒类或食品添加剂。

26、与现有技术相比，本发明提供的植物乳植杆菌rh03163菌株至少具有以下有益效果：

27、(1)耐酸能力强，在ph 3.0条件下的耐酸延迟时间为2.0h，在ph 2.0条件下的耐酸延迟时间为2.22h；

28、(2)耐胆盐能力强，在0.3％-1.5％胆盐浓度下耐胆盐延迟时间均在1h以内，且在0.3％胆盐浓度条件下的耐胆盐延迟时间为0.34h；

29、(3)显著缓解腹泻症状，与模型对照组相比，腹泻次数减少了约7次，明显少于模型对照组，具有较好的抗腹泻功效；

30、(4)具有较佳的肠道菌群调节能力，与溶剂对照组相比，施用14天后肠道菌群中的肠杆菌和肠球菌显著减少，乳杆菌显著增加。

技术特征：

1.一种微生物，其特征在于，所述微生物的16s rdna的核苷酸序列如seq id no:1所示。

2.根据权利要求1所述的微生物，其特征在于，所述微生物为植物乳植杆菌。

3.一种能够缓解腹泻和调节菌群的植物乳植杆菌，其特征在于，所述植物乳植杆菌的16s rdna的核苷酸序列如seq id no:1所示。

4.根据权利要求3所述的植物乳植杆菌，其特征在于，所述植物乳植杆菌保藏于cgmcc，其保藏编号为cgmcc no.26430。

5.一种微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂包括根据权利要求1-2中任一所述的微生物或权利要求3-4中任一所述的植物乳植杆菌的存活形式或死亡形式、及其分离物和/或分泌物。

6.一种培养根据权利要求1-2中任一所述的微生物或权利要求3-4中任一所述的植物乳植杆菌的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述一级培养和二级培养的条件为36.5-37.5℃培养16-20h；和/或

8.根据权利要求1-2中任一所述的微生物、权利要求3-4中任一所述的植物乳植杆菌或权利要求5所述的微生物菌剂在制备缓解腹泻和/或调节菌群的产品中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述产品包括食品、药物、药物原料或食品原料。

10.根据权利要求9所述的应用，所述食品包括保健品、调味品、乳制品、饮料、饼干、冷冻饮品、糖果制品、酒类或食品添加剂。

技术总结
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种能够缓解腹泻和调节菌群的植物乳植杆菌及其应用。本发明提供了一种微生物，所述微生物的16S rDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明还提供了一种能够缓解腹泻和调节菌群的植物乳植杆菌，所述植物乳植杆菌保藏于CGMCC，其保藏编号为CGMCC No.26430。本发明提供的微生物或植物乳植杆菌，具有较强的耐酸能力和耐胆盐能力，可显著缓解腹泻症状，具有较佳的肠道菌群调节能力。

技术研发人员：王雅丽,宋佳,余萍,陈雪娇,汪海涛,彭永振
受保护的技术使用者：江西仁仁健康微生态科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16