一种与非洲猪瘟病毒CD2v胞内蛋白结合的单克隆抗体及其应用

本发明涉及分子免疫，尤其涉及一种与非洲猪瘟病毒cd2v胞内蛋白结合的单克隆抗体及其应用。

背景技术：

1、非洲猪瘟病毒(african swine fevervirus，asfv)感染猪，引起以出血和发热为主要特征的非洲猪瘟(african swine fever，asf)疾病。世界动物卫生组织(oie)列其为法定报告疫病。asfv主要感染家猪、野猪，也能感染软蜱。高致病性毒株感染可导致猪只4至15天死亡，病死率可达100％；中等毒力毒株引起的亚急性症状，死亡率较低(30-70％)，大部分出现出血性症状；而低毒力毒株病死率较低，导致无血管损伤的慢性疾病。

2、asfv属于非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属。其双股dna基因组长度在170至194kb之间，是由多基因家族(mgf)不同成员的获得或缺失部分基因所致，包含150多个开放阅读框，编码大约200种蛋白质，包括68个结构蛋白和超过100个非结构蛋白。在形态上，asfv病毒粒子是一个对称的二十面体粒子，直径约为260nm，具有复杂的多包膜结构，从内到外分别是类核、核壳、内部脂质包膜、二十面体衣壳和外包膜。ep402r基因编码一种与t细胞粘附分子cd2相似的蛋白质，称为cd2v。cd2v包含一个信号肽、胞外的2个免疫球蛋白样结构域、跨膜区及c端147个氨基酸的胞内结构域组装而成的糖蛋白，其中胞内结构域包含1个酸性结构域和1个富含脯氨酸的重复序列。cd2v的胞内结构域与细胞cd2胞质结构域的氨基酸序列没有明显的同一性，此外，共聚焦显微镜结果表明表达的cd2v蛋白结构大部分位于细胞内而不是细胞表面。有研究发现，cd2v通过脯氨酸重复区域与sh3p7相互作用，可能会调节蛋白质运输参与免疫调节。现有技术研究发现，ap-1与cd2v羧基末端(230-304aa)结合形成cd2v-ap-1复合物，对asfv毒力和免疫逃逸产生影响。因此，asfv cd2v蛋白是疫苗和相关诊断试剂研发相关的重要靶点。但现有技术中研究较多的均为胞外区和全长cd2v蛋白，并制备了多克隆和单克隆抗体，而缺乏对蛋白胞内区的研究。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种与非洲猪瘟病毒cd2v胞内蛋白结合的单克隆抗体及其应用。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示，其轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.3所示。

4、优选的，所述单克隆抗体与非洲猪瘟病毒cd2v胞内区蛋白b细胞线性表位特异性结合。

5、优选的，所述非洲猪瘟病毒cd2v胞内区蛋白b细胞线性表位的氨基酸序列如seqid no.1所示。

6、本发明还提供了编码所述单克隆抗体的核酸分子，编码重链可变区的核酸序列如seq id no.4所示，编码轻链可变区的核酸序列如seq id no.5所示。

7、本发明还提供了一种表达载体，包含所述核酸分子。

8、本发明还提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包含所述表达载体。

9、本发明还提供了一种药物组合物，包括所述单克隆抗体。

10、本发明还提供了包括所述单克隆抗体的检测试剂或试剂盒。

11、通过采用上述技术方案，本发明具有如下有益效果：本发明提供了一种单克隆抗体，其重链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq idno.3所示。本发明制备的单克隆抗体能够与cd2v胞内区蛋白b细胞线性表位特异性结合，具有良好的反应原性。在不同毒株与不同基因型毒株间，所述单克隆抗体识别表位高度保守，同源性达到100％，有助于进一步研究cd2v参与asfv致病和免疫的分子机制以及开发基因缺失疫苗。

技术特征：

1.一种单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如seqid no.2所示，其轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.3所示。

2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体与非洲猪瘟病毒cd2v胞内区蛋白b细胞线性表位特异性结合。

3.根据权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于，所述非洲猪瘟病毒cd2v胞内区蛋白b细胞线性表位的氨基酸序列如seq id no.1所示。

4.编码权利要求1所述单克隆抗体的核酸分子，其特征在于，编码重链可变区的核酸序列如seq id no.4所示，编码轻链可变区的核酸序列如seq id no.5所示。

5.一种表达载体，其特征在于，包含权利要求3所述核酸分子。

6.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包含权利要求4所述表达载体。

7.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求3所述的单克隆抗体。

8.一种包括权利要求1所述单克隆抗体的检测试剂或试剂盒。

技术总结
本发明提供了一种与非洲猪瘟病毒CD2v胞内蛋白结合的单克隆抗体及其应用，属于分子免疫技术领域。本发明的单克隆抗体，其重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明制备的单克隆抗体能够与CD2v胞内区蛋白B细胞线性表位特异性结合，具有良好的反应原性。在不同毒株与不同基因型毒株间，所述单克隆抗体识别表位高度保守，同源性达到100％，有助于进一步研究CD2v参与ASFV致病和免疫的分子机制以及开发基因缺失疫苗。

技术研发人员：孙爱军,庄国庆,靳家鑫,杜永坤,张改平
受保护的技术使用者：河南农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15