用于遗传性血管性水肿的RNA生物标记的制作方法

背景技术：

1、血浆接触活化系统是涉及一组血浆蛋白酶的促炎症反应的且促凝血的系统。其通过暴露于外源物质或带负电的表面时被因子xiia或在内皮细胞表面上被脯氨酰羧肽酶活化(sainz i.m.等，thromb.haemost.(2007)98，77-83)。不适当的或未经调节的接触系统活化涉及多种疾病，包括遗传性血管性水肿(hae)。

2、hae是造成肿胀阵发性发作的疾病，其可影响身体的多个部分，比如面部、四肢、生殖器、胃肠道和上气道。因为hae症状通常与变态反应或肠绞痛的症状类似，所以通常难以确诊hae患者，直到他们显示严重的或威胁生命的症状。早期诊断将使得更好地管理与急性hae发作相关的紧急情况，并且也将有助于管理hae患者来预防或减少急性hae发作，例如，允许hae患者避免暴露于可能触发hae发作的刺激。

3、因此，非常感兴趣的是鉴定用于hae的生物标记，并且开发可靠的诊断和预后方法，用于鉴定患有某些类型的hae或处在遭受急性hae发作的风险中的受试者。这种生物标记也将有益于关于发病机理的研究，这可促进开发用于该疾病的有效的新疗法。

技术实现思路

1、本公开基于与从健康个体相比，在从患有与接触活化系统相关的疾病的受试者获得的生物样品中区别存在和/或在从在不同疾病状态下(例如，发作对基础)的受试者获得的生物样品中区别存在的rna生物标记的鉴定。

2、因此，本公开的一个方面提供了分析样品的方法，所述方法包括：(i)提供从患有与接触活化系统相关的疾病、疑似患有与接触活化系统相关的疾病或处在与接触活化系统相关的疾病的风险中的受试者，比如人受试者获得的生物样品(例如，血清样品或血浆样品)；和(ii)测量包括选自表1中的至少一种rna生物标记的rna生物标记组的水平，其中如果生物标记组由一种rna生物标记组成，则所述rna生物标记不是hsa-mir-16-5p、hsa-mir-17-5p、hsa-mir-19a-3p或hsa-mir-20a-5p。在一些实施方式中，与接触活化系统相关的疾病是遗传性血管性水肿(hae)，比如1型hae或ii型hae。

3、在一些实施方式中，生物标记组由选自表1中的2至10种rna生物标记组成。在一些实施方式中，rna生物标记是编码线粒体蛋白的信使rna，所述线粒体蛋白可为线粒体编码的细胞色素c氧化酶iii(mt-co3)或线粒体编码的氧化还原酶核心亚单位(mt-nd3)。在一些实施方式中，rna生物标记是微小rna(例如，hsa-mir-423-3p、hsa-mir-1307-3p、hsa-mir-355-3p、hsa-mir-485-5p、hsa-mir-16-5p、hsa-mir-19a-3p、hsa-mir-20a-5p、hsa-mir-17-5p、hsa-mir-885-5p、hsa-mir-335-3p、hsa-mir-485-5p)。

4、在一些实施方式中，可通过涉及聚合酶链式反应和/或核酸杂交的方法测量rna生物标记组的水平。

5、在一些实施方式中，方法进一步包括如果受试者的rna生物标记组的水平偏离对照受试者的相同rna生物标记组的水平，则将受试者鉴定为患有与接触系统相关的疾病。在一些实施方式中，方法进一步包括如果受试者被鉴定为患有疾病，则向受试者施用有效量的用于治疗疾病的治疗剂，比如血浆激肽释放酶(pkal)抑制剂、缓激肽2受体抑制剂和/或c1酯酶抑制剂。在一些实施方式中，pkal抑制剂是抗pkal抗体(例如，lanadelumab)或抑制性肽(例如，艾卡拉肽(ecallantide))。在一些实例中，缓激肽2受体抑制剂是抑制性肽(例如，艾替班特(icatibant))。在一些实例中，c1酯酶抑制剂是人血浆衍生的c1酯酶抑制剂。

6、在一些实施方式中，受试者是正在进行疾病治疗的人患者，并且其中方法进一步包括基于rna生物标记组的水平评估治疗的功效，受试者的rna生物标记组的水平偏离对照受试者的rna生物标记组的水平指示治疗功效。在一些实施方式中，方法进一步包括基于rna生物标记组的水平鉴定用于受试者的合适的治疗。在一些实施方式中，方法进一步包括基于rna生物标记组的水平，将受试者鉴定为用于疾病治疗的候选者。

7、在一些实施方式中，rna生物标记组包括选自由下述组成的组中的一种或多种rna生物标记：hsa-mir-1307-3p、hsa-mir-335-3p和hsa-mir-485-5p。在一些实施方式中，方法进一步包括基于rna生物标记组的水平，评估受试者的疾病发作的风险，受试者的rna生物标记组水平偏离对照受试者的rna生物标记组水平指示疾病发作的风险。

8、本公开提供了能够鉴定患有与接触活化系统相关的疾病(例如，hae)的患者的rna生物标记。测量生物标记组的水平也可用于这种疾病的评估和治疗。

9、在另一方面中，提供了用于分析患有与接触系统相关的疾病、疑似患有与接触系统相关的疾病或处在与接触系统相关的疾病的风险中的受试者的样品的试剂盒，所述试剂盒包括对于选自表1中的第一rna生物标记特异性的第一结合剂；和对于选自表1中的第二rna生物标记特异性的第二结合剂；其中第一rna生物标记和第二rna生物标记不同。在一些实例中，第一结合剂是与第一rna生物标记(完全或部分)互补的寡核苷酸和/或第二结合剂是与第二rna生物标记(完全或部分)特异性互补的寡核苷酸。第一结合剂和第二结合剂可固定在支撑元件上。在一些情况下，第一结合剂和/或第二结合剂缀合至标签(例如，荧光标签)。

10、下面描述中阐释了本公开的一个或多个实施方式的细节。本公开的其他特征或优势从下述附图和数个实施方式的详细描述中、并且也从所附的权利要求中将是显而易见的。

技术特征：

1.一种用于非诊断目的的分析样品的方法，所述方法包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其中生物标记组由2至10种rna生物标记组成。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中生物样品是血清样品或血浆样品。

4.根据权利要求1或权利要求2的方法，其中遗传性血管性水肿是i型遗传性血管性水肿或ii型遗传性血管性水肿。

5.根据权利要求1所述的方法，其中rna生物标记组进一步包括线粒体编码的细胞色素c氧化酶iii(mt-co3)。

6.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(ii)涉及聚合酶链式反应和/或核酸杂交。

7.根据权利要求1所述的方法，其中受试者是人。

8.根据权利要求7所述的方法，其中人具有遗传性血管性水肿的历史。

9.根据权利要求8所述的方法，其中rna生物标记组包括选自由下述组成的组中的一种或多种rna生物标记：hsa-mir-1307-3p、hsa-mir-335-3p和hsa-mir-485-5p。

10.对于第一rna生物标记是特异性的第一结合剂和对于第二蛋白生物标记是特异性的第二结合剂在制备用于分析患有遗传性血管性水肿、疑似患有遗传性血管性水肿或处在遗传性血管性水肿的风险中的受试者的样品的试剂盒中的用途，其中第一生物标记和第二生物标记选自由下述组成的组：线粒体编码的nadh:泛醌氧化还原酶核心亚单位3(mt-nd3)、hsa-mir-16-5p、hsa-mir-19a-3p、hsa-mir-20a-5p、hsa-mir-17-5p、hsa-mir-28-5p、hsa-mir-423-3p、hsa-mir-26a-5p、hsa-mir-1307-3p、hsa-mir-335-3p、hsa-mir-139-5p、hsa-mir-485-5p、hsa-mir-26b-5p、hsa-mir-885-5p、hsa-mir-361-3p、hsa-mir-769-5p、hsa-mir-140-5p、hsa-mir-485-3p、hsa-mir-889-3p、hsa-mir-941、rpl23、hsa-mir-328-3p和hsa-mir-484；并且其中第一生物标记和第二生物标记不同。

11.根据权利要求10所述的用途，其中第一结合剂是与第一rna生物标记互补的寡核苷酸或其片段，和/或第二结合剂是与第二rna生物标记互补的寡核苷酸或其片段。

12.根据权利要求10或权利要求11所述的用途，其中第一结合剂、第二结合剂或第一结合剂和第二结合剂两者缀合至标签。

13.根据权利要求10或权利要求11所述的用途，其中第一结合剂和第二结合剂被固定在支撑元件上。

14.根据权利要求12所述的用途，其中第一结合剂和第二结合剂被固定在支撑元件上。

技术总结
本文提供了用于分析从患有与接触活化系统相关的疾病、疑似患有与接触活化系统相关的疾病或处在与接触活化系统相关的疾病的风险中的受试者获得的生物样品的方法和试剂盒。

技术研发人员：D·J·塞克斯顿,M·维斯瓦纳坦,R·福塞特,T·伽尔
受保护的技术使用者：武田药品工业株式会社
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15