NAMPT在诊断或治疗复发性流产中的应用的制作方法

本发明涉及疾病诊断和治疗领域，具体地说，涉及nampt在诊断或治疗复发性流产中的应用。

背景技术：

1、成功妊娠是一个复杂的生理进程，母胎之间存在着复杂而精密的交互对话，涉及胚胎植入、蜕膜化形成、滋养细胞侵袭、胎盘构建和免疫调控。复发性流产被定义为在妊娠24周之前发生两次或两次以上临床认可的妊娠失败，包括胚胎和胎儿流产。早期流产的诊断相对简单，但由于缺乏标准化定义、发病机制的不确定性和高度可变的临床表现，阻碍了预测和预防复发性流产的进展。随着生殖免疫学研究的不断深入，临床上逐渐认识到免疫因素在生殖过程中的重要作用，事实上约60％以上的复发性流产是由免疫紊乱所致，80％的不明原因流产与免疫因素紧密相关。因此，揭示维持母胎界面免疫微环境动态稳定的调控机制，对维持正常妊娠、改善复发性流产患者妊娠结局具有重要的理论和临床实际意义。

2、蜕膜巨噬细胞是蜕膜组织中第二大类免疫细胞，具有独特的免疫学表型并发挥多种作用，参与调控整个孕期的关键事件包括滋养细胞侵袭、螺旋动脉重构、组织重建、母胎耐受、分娩发动等。巨噬细胞可以被lps和ifnγ诱导成经典激活的巨噬细胞(m1)，表达诱导型一氧化氮合酶(inos)、cd80、cd86、mhc-ii等特征分子，并释放tnf-α、il-1β、cxcl10等因子。巨噬细胞也可以被il-4、il-13等诱导成选择性激活的巨噬细胞(m2)，表达清道夫受体cd206、cd163等特征分子，并释放il-10、tgf-β等因子。正常妊娠蜕膜巨噬细胞作为在妊娠过程中含量最多的专职提呈细胞，在维持免疫耐受和炎症反应的平衡中有着重要的作用，其表型会随着妊娠阶段的改变而变化。在胚胎植入前，蜕膜巨噬细胞表现出m1的特征；在早孕期，蜕膜巨噬细胞呈现出m1/m2的混合表型，并一直持续到孕中期；在孕中期，蜕膜巨噬细胞表现为m2型的特征；在启动分娩阶段，需要足够数量的m1样的蜕膜巨噬细胞。成功妊娠需要适量的功能正常的巨噬细胞，蜕膜巨噬细胞功能障碍(数量的变化和m1表型偏差)可能导致不良妊娠结局，例如自发性流产、先兆子痫和胎儿生长受限。

3、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide，nad+)是参与机体内氧化还原反应的重要辅酶之一，对能量代谢至关重要。胞内nad+含量主要通过三种nad+合成和代谢通路维持相对稳定，分别是从头合成途径、preiss–handler途径和补救途径，其中nad+补救合成途径指烟酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamidephosphoribosyltransferase，nampt)催化烟酰胺(icotinamide,nam)生成烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,nmn)，nmn被进一步合成nad+的过程，nampt是nad+补救合成途径的限速酶。

4、目前关于蜕膜巨噬细胞发育分化的调控因素仍未被详细阐明。因此，探究正常妊娠过程中蜕膜巨噬细胞的分化机制对维持母胎界面免疫微环境稳态具有重要意义，从而为开发针对不良妊娠结局防治的药物和方案提供新思路，关于如本发明的将nampt用于诊断或治疗复发性流产中的应用还未见报道。

技术实现思路

1、本发明的目的是，针对现有技术中的不足，提供一种nampt在诊断或治疗复发性流产中的应用。

2、一方面，本发明提供了nampt作为诊断标志物在制备复发性流产的诊断试剂或试剂盒中的应用。

3、第二方面，本发明提供了检测nampt基因或蛋白表达水平的试剂在制备复发性流产的诊断试剂或试剂盒中的应用。

4、作为一个优选例，所述试剂或试剂盒用于检测蜕膜组织或蜕膜巨噬细胞中nampt基因或蛋白的表达水平。

5、更优选地，所述nampt在复发性流产患者的蜕膜组织或蜕膜巨噬细胞中的转录组水平和蛋白质水平明显降低。

6、作为一个优选例，所述蜕膜组织或蜕膜巨噬细胞中转录组水平和蛋白质水平明显降低的为m1标志物分子。

7、第三方面，本发明提供了一种用于复发性流产的诊断试剂，所述试剂用于检测nampt基因或蛋白的表达水平。

8、第四方面，本发明提供了一种复发性流产的诊断试剂盒，所述试剂盒包括检测nampt基因或蛋白表达水平的试剂。

9、第四方面，本发明提供了nampt的补充剂在制备预防/或治疗复发性流产药物中的应用。

10、作为一个优选例，所述补充剂通过调控蜕膜巨噬细胞m1-like表型维持正常妊娠的分子机制。

11、第五方面，本发明提供了一种针对不良妊娠结局防治的药物，所述药物包括nampt补充剂。

12、第六方面，本发明提供了一种筛选治疗复发性流产潜在物质的方法，包括以下步骤：

13、a)建立复发性流产动物模型；

14、b)给予复发性流产动物模型受试物质；

15、c)比较复发性流产动物模型给药前后动物蜕膜组织或蜕膜巨噬细胞中nampt基因或蛋白表达水平的变化，如升高，则表明所述受试物质为治疗复发性流产的潜在物质，反之则不是。

16、本发明优点在于：

17、nampt对巨噬细胞的调控具有鲜明的特点，在不同生理和病理条件下nampt可能决定巨噬细胞不同的结局，目前尚未有关于nampt调控蜕膜巨噬细胞以维持正常妊娠的报道。本发明旨在阐明nampt调控早孕期蜕膜巨噬细胞m1-like表型从而维持正常妊娠的分子机制，为开发针对不良妊娠结局防治的药物和方案提供新思路。

技术特征：

1.nampt作为诊断标志物在制备复发性流产的诊断试剂或试剂盒中的应用。

2.检测nampt基因或蛋白表达水平的试剂在制备复发性流产的诊断试剂或试剂盒中的应用。

3.根据权利要求1或2任一所述的应用，其特征在于，所述试剂或试剂盒用于检测蜕膜组织或蜕膜巨噬细胞中nampt基因或蛋白的表达水平。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述nampt在复发性流产患者的蜕膜组织或蜕膜巨噬细胞中的转录组水平和蛋白质水平明显降低。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述蜕膜组织或蜕膜巨噬细胞中转录组水平和蛋白质水平明显降低的为m1标志物分子。

6.一种用于复发性流产的诊断试剂，其特征在于，所述试剂用于检测nampt基因或蛋白的表达水平。

7.一种复发性流产的诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测nampt基因或蛋白表达水平的试剂。

8.nampt的补充剂在制备预防/或治疗复发性流产药物中的应用。

9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述补充剂通过调控蜕膜巨噬细胞m1-like表型维持正常妊娠的分子机制。

10.一种筛选治疗复发性流产潜在物质的方法，其特征在于，包括以下步骤：

技术总结
本发明涉及NAMPT在诊断或治疗复发性流产中的应用。本发明通过分析正常妊娠妇女和复发性流产患者蜕膜巨噬细胞中NAMPT的表达水平，证实了复发性流产患者蜕膜巨噬细胞中NAMPT在转录组水平和蛋白质水平表达量明显降低，且验证了NAMPT对蜕膜巨噬细胞M1‑like表型的调控作用，还通过动物实验证实了蜕膜巨噬细胞中NAMPT对维持正常妊娠具有重要作用。本发明阐明了NAMPT调控早孕期蜕膜巨噬细胞M1‑like表型从而维持正常妊娠的分子机制，为开发针对不良妊娠结局防治的药物和方案提供新思路。

技术研发人员：金莉萍,赵永博,陆芸,张怡君,孙嘉妮
受保护的技术使用者：上海市第一妇婴保健院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15