用于区分类风湿关节炎寒证和热证的标志物及其应用的制作方法

本发明涉及中医和生物医药领域，具体涉及用于区分类风湿关节炎寒证和热证的标志物及其应用。

背景技术：

1、类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，ra)是一种高度异质性的、慢性、系统性自身免疫性疾病。其主要病理特征为关节受累、增生性滑膜炎、骨与软骨的破坏，最终导致关节畸形和功能障碍，致残率非常高。ra的发生与遗传、感染、激素、环境刺激以及免疫调节紊乱等多种因素有关，机制十分复杂，至今仍未完全清楚，主要涉及多种细胞、细胞因子、遗传物质和信号通路之间的相互作用。

2、本病以关节肿胀疼痛，晚期出现关节僵硬、畸形为主要表现，隶属于祖国医学“痹证”、“历节风”、“鹤膝风”范畴。现代医家亦称之为“尪痹”、“顽痹”等。ra属于中医的优势病种，辨证论治是中医治疗ra的特色。其中辨证分型是确定相应治疗原则和方法的前提，体现中医诊疗ra的理论特色与优势。临床实践中，不同医家对ra病因病机存在不同的认识，因而从不同的角度对ra进行了不同的分型论治或分期论治。多数医家根据病因病机进行辨证，尽管分型不完全一致，但寒、热证候是八纲辨证的基本证候类型，更是ra辨证论治所必须辨明的诊断要素。

3、rna甲基化作为表观遗传重要修饰方式，可在转录后水平精确调控基因转录。m6a作为mrna上最丰富的甲基化修饰，在机体内是一个动态可逆的过程。要维持m6a的动态稳定，需要多种酶的共同参与。以美国芝加哥大学何川教授为主的国内外研究团队发现了一系列m6a甲基转移酶、去甲基转移酶和结合蛋白，m6a修饰已被报道在调控rna的稳定性、定位等方面具有重要功能。m5c修饰也是一种常见且重要的rna修饰，在trna、rrna和mrna上广泛分布。m5c修饰可以调控rna结构稳定、rna加工和翻译效率以及mrna出核等，与人类疾病的发生密切相关。

4、目前，基于rna甲基化开展ra寒、热证候研究，以此探索ra寒、热证候生物学基础的研究尚未见报道。因此，基于临床样本，开展ra寒热证候rna甲基化特征研究，可为ra寒、热证候生物学基础研究提供新思路，也可为ra寒、热证候的分类提供新的理论依据。

技术实现思路

1、为了弥补现有技术的空白，本发明提供了一种用于区分类风湿关节炎寒证和热证的标志物及其应用。

2、本发明的第一方面，提供一种区分类风湿关节炎寒证和热证的标志物，所述标志物包括rna甲基化m6a修饰。m6a修饰是指rna的腺嘌呤第6号氮原子上的甲基化修饰，简称m6a，m6a修饰后的rna能够被m6a识别蛋白特异性识别并结合，进而介导rna的剪接、成熟、出核、降解和翻译等。目前国内外对于m6a修饰及其相关蛋白如何参与ra发生发展的研究较少。m6a修饰水平在ra患者的以及ra寒证患者的pbmc中异常升高，有望成为ra诊断和判断ra证型的潜在分子标志物。在本发明的一个优选实施方式中，所述标志物还包括m5c。rna的m5c修饰是指rna胞嘧啶的第5位c原子发生甲基化,该修饰过程是动态可逆的,主要以s-腺苷甲硫氨酸(sam)作为甲基供体,在甲基转移酶催化下形成。mrna m5c修饰与多种生物学过程有关，如mrna稳定、剪接和核质穿梭，dna损伤修复，扩散和迁移，干细胞发育、分化和重编程。m5c修饰水平在ra患者中升高，但在ra寒热组间差异不显著，体现了m6a水平在ra寒热组间差异表达的特异性。

3、在本发明的另一个优选实施方式中，所述标志物还包括rbc、hgb、plt、n(％)、l(％)、plr、nlr、lmr中的一种或者多种或者全部。

4、本发明另一方面还涉及上述标志物在制备诊断类风湿关节炎寒证和热证的诊断试剂中的应用。

5、在本发明的一个优选实施方式中，较低水平的m6a与湿热证、阴虚证相关，较高水平的m6a与风寒证、脾虚证、血瘀证、气滞证相关。

6、本发明至少获得了如下有益的技术效果：本发明基于rna甲基化开展ra寒、热证候研究，以此探索ra寒、热证候生物学基础，通过本发明的标志物，可以从生物学基础上区分风湿关节炎寒证和热证，有助于在临床上对症治疗。

技术特征：

1.一种区分类风湿关节炎寒证和热证的标志物，所述标志物包括m6a。

2.根据权利要求1所述的标志物，所述标志物还包括m5c。

3.根据权利要求1或2所述的标志物，所述标志物还包括rbc、hgb、plt、n(％)、l(％)、plr、nlr、lmr中的一种或者多种或者全部。

4.权利要求1-2任意一项所述标志物在制备诊断类风湿关节炎寒证和热证的诊断试剂中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，较低水平的m6a与湿热证、阴虚证相关，较高水平的m6a与风寒证、脾虚证、血瘀证、气滞证相关。

技术总结
本发明公开了一种区分类风湿关节炎寒证和热证的标志物及其应用，所述标志物包括m6A。本发明基于RNA甲基化开展RA寒、热证候研究，以此探索RA寒、热证候生物学基础，通过本发明的标志物，可以从生物学基础上区分风湿关节炎寒证和热证，有助于在临床上对症治疗。

技术研发人员：肖诚,徐愿,王星,王子涵
受保护的技术使用者：中日友好医院（中日友好临床医学研究所）
技术研发日：
技术公布日：2024/1/25