绒山羊高繁基因INHA，RARG和PGR的分型应用

本发明涉及绒山羊繁育功能基因，具体为绒山羊高繁基因inha，rarg和pgr的分型应用。

背景技术：

1、研究辽宁绒山羊的产羔性状具有重要意义。山羊的产羔性状虽然是低遗传力性状，但其遗传基础最终还是由基因决定的。有些基因突变会引起排卵率和产仔数的变化。

2、随着人们生活水平的提高，对羊肉、羊毛等需求量不断提高，因此，提高山羊产羔数量是亟需解决的问题，目前的研究指出inha、rarg、pgr基因可能与繁殖性能有关，单核苷酸多态性(snp)作为一种分子标记技术，具有密度高、代表性强、遗传稳定性好、分析自动化程度高的特点，它可以在被研究基因附近或内部提供一系列标记，蛋白的结构和表达水平可能直接受到基因中某些snp的影响，从而改变动物体内某些性状的表达，目前虽然有研究证明inha、rarg、pgr基因可能调控产羔数量，但对产羔性状的影响尚不明确。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供绒山羊高繁基因inha，rarg和pgr的分型应用，以解决上述背景技术中提出的目前虽然有研究证明inha、rarg、pgr基因可能调控产羔数量，但对产羔性状的影响尚不明确的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案，绒山羊高繁基因inha，rarg和pgr的分型应用，包括：

3、绒山羊血样采集：

4、所述采血5ml于山羊颈静脉，置于-20℃含edta的抗凝血管中保存。

5、dna提取：

6、所述取1毫升全血，在离心管中离心(5000rpm，5min)，加入相同量的pbs，摇匀，放置5-10min，丢弃上清液，保留沉淀液，反复洗涤三次，将450ml的细胞裂解液和6ml的蛋白酶k加入到水浴中，放置4小时(55-66℃)，使用恒定体积的苯酚：氯仿(25：24)提取液体2次(12000rpm，5min)，双体积无水乙醇沉淀法(20℃，30min)，当发生絮凝沉淀(12000rpm，5min)时，弃上清液，用800ml70％乙醇(12000rpm，3min)清洗沉淀，弃上清液干燥，然后用紫外分光光度法测定od值，计算值为od260/od280，最后加入50mlte缓冲液溶解，-20℃保存。

7、产羔性能数据：

8、所述绒山羊的产羔数据由畜牧科学研究院进行采集与统计分析。

9、引物设计：

10、所述通过ncbi数据库查找山羊inha、rarg、pgr基因序列，用primerpremier5软件对其进行特异性引物设计，并生工合成引物。

11、产物扩增：

12、所述pcr反应体系的容量为50μl，按照pcr反应体系过程完成产物扩增。

13、优选的，所述混匀的5ul产物和1ul样品缓冲液内加入5ulmarker作为对照，电泳条件设置为120v，180w，15-20min，电泳结束之后观察是否存在靶基因条带，若存在将产物测序。

14、优选的，所述使用ezup柱式血液基因组dna抽提试剂盒提取绒山羊血液中的dna。

15、优选的，所述pcr产物扩增结束以后选择电泳出的目的条带单一、清晰的片段，将测序结果与inha、rarg、pgr基因序列比对，共发现6个突变位点，分别为inha基因上的g144a和t504c，rarg基因上的a56g、g144a、g490c，pgr基因上的g109519t。

16、优选的，所述inha、rarg、pgr基因的6个位点中inha的g144a、t504c、rarg的g144a、g490c位点替代效果相对较好。

17、优选的，所述inha基因g144a的aa基因型、t504c位点的tt基因型，rarg基因a56g的gg基因型、g144a和g490c的gg基因型，pgr基因g109519t的gg基因型产羔性能更好。

18、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

19、1、通过对inha、rarg、pgr基因的snp分析，找到了影响辽宁绒山羊产羔性状的基因型(inha基因g144a的aa基因型、t504c位点的tt基因型，rarg基因a56g的gg基因型、g144a和g490c的gg基因型，pgr基因g109519t的gg基因型)，单倍型(rarg基因的g144a和inha的t504c的单倍型组合agtt和aact)，为推进辽宁绒山羊选育，提高绒山羊产羔数量提供更多数据基础。

20、2、利用snp对辽宁绒山羊产羔性状基因inha、rarg、pgr进行基因分型，找到snp位点，对snp位点进行遗传多样性分析，并与生产性能进行相关性分析，确定影响产羔性状的基因型及单倍型组合，为辽宁绒山羊的选育提供参考。

技术特征：

1.绒山羊高繁基因inha，rarg和pgr的分型应用，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的绒山羊高繁基因inha，rarg和pgr的分型应用，其特征在于：所述混匀的5ul产物和1ul样品缓冲液内加入5ulmarker作为对照，电泳条件设置为120v，180w，

3.根据权利要求1所述的绒山羊高繁基因inha，rarg和pgr的分型应用，其特征在于：所述使用ezup柱式血液基因组dna抽提试剂盒提取绒山羊血液中的dna。

4.根据权利要求1所述的绒山羊高繁基因inha，rarg和pgr的分型应用，其特征在于：所述pcr产物扩增结束以后选择电泳出的目的条带单一、清晰的片段，将测序结果与inha、rarg、pgr基因序列比对，共发现6个突变位点，分别为inha基因上的g144a和t504c，rarg基因上的a56g、g144a、g490c，pgr基因上的g109519t。

5.根据权利要求4所述的绒山羊高繁基因inha，rarg和pgr的分型应用，其特征在于：所述inha、rarg、pgr基因的6个位点中inha的g144a、t504c、rarg的g144a、g490c位点替代效果相对较好。

6.根据权利要求4所述的绒山羊高繁基因inha，rarg和pgr的分型应用，其特征在于：所述inha基因g144a的aa基因型、t504c位点的tt基因型，rarg基因a56g的gg基因型、g144a和g490c的gg基因型，pgr基因g109519t的gg基因型产羔性能更好。

技术总结
本发明涉及绒山羊繁育功能基因技术领域，具体为绒山羊高繁基因INHA，RARG和PGR的分型应用，包括：绒山羊血样采集：所述采血5mL于山羊颈静脉，置于‑20℃含EDTA的抗凝血管中保存，DNA提取：所述取1毫升全血，在离心管中离心(5000rpm，5min)，加入相同量的PBS，摇匀，放置5‑10min，丢弃上清液。本发明为推进辽宁绒山羊选育，提高绒山羊产羔数量提供更多数据基础，对SNP位点进行遗传多样性分析，并与生产性能进行相关性分析，确定影响产羔性状的基因型及单倍型组合，为辽宁绒山羊的选育提供参考。

技术研发人员：王泽英,陈芮,孔令超,潘媛,孙迎港,吴彦智,乔艳军,李茜,汪小微,张秋,李帅彤,李思沂,刘一宁,刘庆坤,侯思冰,李嘉琪
受保护的技术使用者：沈阳农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15