一种岩藻多糖的制备方法及其在制备抗炎药物中的应用

本发明涉及生物化学，特别涉及一种岩藻多糖的制备方法及其在制备抗炎药物中的应用。

背景技术：

1、派氏结是一种位于肠道黏膜下方的淋巴结构，由b细胞聚集形成。它是肠道黏膜免疫系统的重要组成部分，主要参与调节肠道免疫应答和维持黏膜屏障功能。派氏结中的b细胞可以分化为转化中心b细胞、辅助b细胞和浆细胞等。

2、当小肠黏膜受到感染或其他刺激时，派氏结会成为炎症反应的重要场所之一。免疫细胞在派氏结中被激活，开始释放炎症因子，如细胞因子和趋化因子，来吸引更多的免疫细胞到达炎症部位。这些免疫细胞可以清除病原体，修复受损组织，并调节免疫反应的过程。

3、多糖可以调节免疫系统的功能，包括促进免疫细胞的活化和增强免疫应答。派氏结中存在多种免疫细胞，如淋巴细胞、树突状细胞等，这些细胞对于识别和抵御入侵的病原体至关重要。部分多糖成分被认为可以刺激派氏结中的免疫细胞，增强它们的免疫功能，从而增加对病原体的防御能力。

4、岩藻多糖是一种从岩藻中提取的天然多糖类化合物。岩藻多糖主要存在于海洋中的一种褐藻植物，被认为是一种生物活性成分。它的化学结构是由多种糖分子组成的，如葡萄糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖胺等，通常含有硫酸基团。岩藻多糖具有α-1,3-骨架或是由α-1,3连接的岩藻糖和α-1,4连接的岩藻糖的双糖组成的重复单元组成，分支连接在c2位置，硫酸化主要发生在o-2位置。

5、岩藻多糖因其独特的化学组成和生物活性而备受关注。一些研究表明，岩藻多糖具有多种生物活性，如抗氧化、抗肿瘤、抗病毒等，而岩藻多糖在派氏结中对免疫归巢效应的影响及其在抗炎中的应用尚未见报道。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种岩藻多糖的制备方法及其在制备抗炎药物中的应用，能够降低促炎因子ifn-γ、tnf-α、il-1β和il-6的水平和提高抗炎因子il-10、tgf-β的水平，具有抗炎作用。

2、本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

3、一种岩藻多糖的制备方法，包括以下步骤：

4、s1用粉碎机将裙带菜粉碎，裙带菜粉末备用；

5、s2称取裙带菜粉末于烧杯，加入蒸馏水并用玻璃棒搅拌均匀，把转子放入，将烧杯放入恒温磁力搅拌锅中，用热水浸提，并通过超声波辅助提取技术提取，提取液离心得到上清液；

6、s3将所述上清液放入旋蒸仪器中获得浓缩液，使用3％的cacl2·2h2o和浓缩液混合后放置在冰箱中静置过夜，使海藻酸盐沉淀完全，离心弃去粗多糖中海藻酸盐沉淀，取上清液；

7、s4将所述上清液与无水乙醇混合，静置沉淀，离心后得到沉淀；

8、s5将所述沉淀用无水乙醇洗涤2次后，加入水至沉淀溶解，得到溶解液；

9、s6将所述溶解液进行旋蒸获得浓缩液；

10、s7将所述浓缩液和sevage试剂混合，漩涡仪振荡后静置分层，取上清液；

11、s8将所述上清液置于冰箱中透析后，用真空冷冻干燥机干燥上清液获得岩藻多糖。

12、进一步优选的，步骤s2中，所述裙带菜与所述水的质量比为1:30；所述热水浸提温度为80℃，时间为3.5h；所述超声波辅助提取时间为30min；所述离心转速为4000r/min，离心的时间为10min。

13、进一步优选的，步骤s3中，所述浓缩液体积为250ml，所述cacl2·2h2o和浓缩液比为1:1，所述的静置过夜温度为4℃；所述离心转速为3000r/min，时间为20min。

14、进一步优选的，步骤s4中上清液与无水乙醇的体积比为1:4，终浓度为80％；所述沉淀时间为12h，所述离心转速为4000r/min，离心时间为10min。

15、进一步优选的，步骤s7中浓缩液和sevage试剂的体积比例为6:1，所述sevage试剂的配制比例为：氯仿:正丁醇＝4:1＝v:v，所述漩涡仪振荡时间为20min，所述分层为液体从上到下为水层-变性蛋白质层-有机层。

16、进一步优选的，步骤s8中所述透析所采用的材料为10-15kda截留分子量的透析膜，所述在冰箱中透析温度为4℃，时间为24h，所述透析期间更换蒸馏水次数为2次，其中第一次更换于4小时后，第二次更换于8小时后。

17、本发明还提供一种岩藻多糖在制备抗炎药物中的应用。

18、进一步优选的，所述抗炎包括抗炎症性肠病。

19、进一步优选的，所述抗炎症性肠病包括降低派氏结中整合素α4β7及黏膜地址粘附分子1的表达和调节炎症因子水平。

20、进一步优选的，所述炎症因子包括转化生长因子-β、干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α、白介素-1β、白介素-10和白介素-6。

21、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

22、本发明制备的岩藻多糖是一种功能性多糖，能够调节派氏结中对免疫归巢效应，降低派氏结中整合素α4β7及黏膜地址粘附分子1的表达。同时，还具有降低促炎因子ifn-γ、tnf-α、il-1β和il-6的水平和提高抗炎因子il-10、tgf-β的水平，具有抗炎作用。可为岩藻多糖在肠道屏障损伤的保护和修复提供理论依据。

技术特征：

1.一种岩藻多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种岩藻多糖的制备方法，其特征在于，步骤s2中，所述裙带菜与所述水的质量比为1:30；所述热水浸提温度为80℃，时间为3.5h；所述超声波辅助提取时间为30min；所述离心转速为4000r/min，离心的时间为10min。

3.根据权利要求1所述的一种岩藻多糖的制备方法，其特征在于，步骤s3中，所述浓缩液体积为250ml，所述cacl2·2h2o和浓缩液比为1:1，所述的静置过夜温度为4℃；所述离心转速为3000r/min，时间为20min。

4.根据权利要求1所述的一种岩藻多糖的制备方法，其特征在于，步骤s4中上清液与无水乙醇的体积比为1:4，终浓度为80％；所述沉淀时间为12h，所述离心转速为4000r/min，离心时间为10min。

5.根据权利要求1所述的一种岩藻多糖的制备方法，其特征在于，步骤s7中浓缩液和sevage试剂的体积比例为6:1，所述sevage试剂的配制比例为：氯仿:正丁醇＝4:1＝v:v，所述漩涡仪振荡时间为20min，所述分层为液体从上到下为水层-变性蛋白质层-有机层。

6.根据权利要求1所述的一种岩藻多糖的制备方法，其特征在于，步骤s8中所述透析所采用的材料为10-15kda截留分子量的透析膜，所述在冰箱中透析温度为4℃，时间为24h，所述透析期间更换蒸馏水次数为2次，其中第一次更换于4小时后，第二次更换于8小时后。

7.根据权利要求1-6任意一项所述的一种岩藻多糖在制备抗炎药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的一种岩藻多糖在制备抗炎药物中的应用，其特征在于，所述抗炎包括抗炎症性肠病。

9.根据权利要求8所述的一种岩藻多糖在制备抗炎药物中的应用，其特征在于，所述抗炎症性肠病包括降低派氏结中整合素α4β7及黏膜地址粘附分子1的表达和调节炎症因子水平。

10.根据权利要求9所述的一种岩藻多糖在制备抗炎药物中的应用，其特征在于，所述炎症因子包括转化生长因子-β、干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α、白介素-1β、白介素-10和白介素-6。

技术总结
本发明属于生物化学技术领域，具体公开了一种岩藻多糖的制备方法及其在制备抗炎药物中的应用。制备方法包括如下步骤：将裙带菜粉碎后进行水提取，过滤，向滤液中添加乙醇并静置，再次过滤，向沉淀中加水，冻干得到坛紫菜粗多糖。本发明制备的岩藻多糖是一种功能性多糖，能够降低派氏结中整合素α4β7(Integrinα4β7)及黏膜地址粘附分子1(MAdCAM‑1)的表达。同时，还具有降低促炎因子IFN‑γ、TNF‑α、IL‑1β和IL‑6的水平和提高抗炎因子IL‑10、TGF‑β的水平，具有抗炎作用。

技术研发人员：张杰良,李家康,黎光会,钟赛意
受保护的技术使用者：广东海洋大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15