一种丝素蛋白的层析分离纯化方法与流程

本发明涉及层析分离技术，特别是指一种丝素蛋白的层析分离纯化方法。

背景技术：

1、丝素蛋白是从蚕丝中提取的天然高分子纤维蛋白，含量约占蚕丝的70％～80％，含有18种氨基酸，其中甘氨酸(gly)、丙氨酸(ala)和丝氨酸(ser)约占总组成的80％以上。丝素本身具有良好的机械性能和理化性质，如良好的柔韧性和抗拉伸强度、透气透湿性、缓释性等，而且经过不同处理可以得到不同的形态，如纤维、溶液、粉、膜以及凝胶等。丝素蛋白作为一种天然高分子材料具有优良的生物相容性、可控的生物降解性，此外其加工条件温和，可被制备成薄膜、凝胶、多孔支架、微针、颗粒等多种形式，在组织工程和药物缓释领域内应用广泛。

2、对于丝素蛋白的分离纯化，可以采用层析法，但是由于丝素蛋白的分子量大，有一定粘稠度，层析过程中容易堵塞层析柱，产品收率较低。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种丝素蛋白的层析分离纯化方法，以解决现有技术中的丝素蛋白的层析分离纯化方法容易堵塞层析柱，且产品收率较低的问题。

2、为解决上述技术问题，本发明的技术方案如下：

3、一种丝素蛋白的层析分离纯化方法，包括如下步骤：

4、(1)取丝素蛋白原料、氯化钠溶液、乙醇，混合均匀，得到丝素蛋白溶液；

5、(2)将步骤(1)中得到的所述丝素蛋白溶液调节ph值至8-10，作为上柱液，采用层析柱吸附，再采用甘氨酸与尿素的水溶液进行洗脱，得到洗脱液；

6、(3)将步骤(2)中得到的洗脱液的ph值调节至2-5，使所述丝素蛋白沉淀，过滤后，得到丝素蛋白。

7、优选地，步骤(1)中，所述氯化钠溶液的浓度为2-4mol/l。

8、优选地，步骤(1)中，所述丝素蛋白原料、氯化钠溶液、乙醇的质量比为1:(3-4)：2。

9、优选地，步骤(2)中，所述层析柱为以磺酸基为功能配基的聚丙烯酸树脂。

10、优选地，步骤(2)中，所述甘氨酸与尿素的水溶液为甘氨酸、尿素、水以1：1：6的质量比混合得到。

11、优选地，步骤(2)中，所述吸附的流速为50-80ml/min；所述洗脱的流速为20-50ml/min。

12、优选地，步骤(2)中，调节ph值采用氢氧化钠。

13、优选地，步骤(3)中，调节ph值采用氯化氢溶液。

14、优选地，步骤(3)中，所述过滤为抽滤或离心过滤。

15、优选地，步骤(3)中，使所述丝素蛋白沉淀的温度为35-65℃。

16、本发明的上述方案至少包括以下有益效果：

17、本发明的丝素蛋白的层析分离纯化方法，包括如下步骤：取丝素蛋白原料、氯化钠溶液、乙醇，混合均匀，得到丝素蛋白溶液；将得到的所述丝素蛋白溶液调节ph值至8-10，作为上柱液，采用层析柱吸附，再采用甘氨酸与尿素的水溶液进行洗脱，得到洗脱液；将得到的洗脱液的ph值调节至2-5，使所述丝素蛋白沉淀，过滤后，得到丝素蛋白。本发明所述的丝素蛋白的层析分离纯化方法，不易堵塞层析柱，且产品收率较高。

技术特征：

1.一种丝素蛋白的层析分离纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的丝素蛋白的层析分离纯化方法，其特征在于，步骤(1)中，所述氯化钠溶液的浓度为2-4mol/l。

3.根据权利要求1所述的丝素蛋白的层析分离纯化方法，其特征在于，步骤(1)中，所述丝素蛋白原料、氯化钠溶液、乙醇的质量比为1:(3-4)：2。

4.根据权利要求1所述的丝素蛋白的层析分离纯化方法，其特征在于，步骤(2)中，所述层析柱为以磺酸基为功能配基的聚丙烯酸树脂。

5.根据权利要求1所述的丝素蛋白的层析分离纯化方法，其特征在于，步骤(2)中，所述甘氨酸与尿素的水溶液为甘氨酸、尿素、水以1：1：6的质量比混合得到。

6.根据权利要求1所述的丝素蛋白的层析分离纯化方法，其特征在于，步骤(2)中，所述吸附的流速为50-80ml/min；所述洗脱的流速为20-50ml/min。

7.根据权利要求1所述的丝素蛋白的层析分离纯化方法，其特征在于，步骤(2)中，调节ph值采用氢氧化钠。

8.根据权利要求1所述的丝素蛋白的层析分离纯化方法，其特征在于，步骤(3)中，调节ph值采用氯化氢溶液。

9.根据权利要求1所述的丝素蛋白的层析分离纯化方法，其特征在于，步骤(3)中，所述过滤为抽滤或离心过滤。

10.根据权利要求1所述的丝素蛋白的层析分离纯化方法，其特征在于，步骤(3)中，使所述丝素蛋白沉淀的温度为35-65℃。

技术总结
本发明提供一种丝素蛋白的层析分离纯化方法，其包括如下步骤：取丝素蛋白原料、氯化钠溶液、乙醇，混合均匀，得到丝素蛋白溶液；将得到的所述丝素蛋白溶液调节pH值至8‑10，作为上柱液，采用层析柱吸附，再采用甘氨酸与尿素的水溶液进行洗脱，得到洗脱液；将得到的洗脱液的pH值调节至2‑5，使所述丝素蛋白沉淀，过滤后，得到丝素蛋白。本发明所述的丝素蛋白的层析分离纯化方法，不易堵塞层析柱，且产品收率较高。

技术研发人员：吴学星,周衍机,高飞
受保护的技术使用者：苏州博进生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15