一种靶向曲妥珠单抗的抗体及其用途的制作方法

本申请通常涉及抗体领域。更具体地，本申请涉及一种靶向曲妥珠单抗的抗体的制备和用途。

背景技术：

1、表皮生长因子受体家族 (epidermal growth factor receptor family, erbbfamily) 包括erbb1(egfr,her1)，erbb2(her2)，erbb3(her3)和erbb4 (her4)四个家族成员。her2蛋白具有酪氨酸蛋白激酶活性，与egfr家族其它成员异源二聚化发挥信号传导功能。her2过表达导致受体胞质内酪氨酸残基自磷酸化，启动信号通路，导致细胞异常增殖，在乳腺癌、胃癌、结肠直肠癌和肺癌等肿瘤的发生发展过程发挥重要作用，her2因而成为理想的肿瘤治疗靶点。

2、曲妥珠单抗是1990年开发的第一个抗her2单克隆抗体，通过抑制受体二聚化、受体内化和降解、抑制 pi3k-akt信号通路等多种机制干扰her2信号传导通路。临床试验证实化疗联合曲妥珠单抗可提高 her2阳性转移性乳腺癌女性的总生存期，因此曲妥珠单抗成为转移性和早期her2阳性乳腺癌的一线治疗药物。

3、随着曲妥珠单抗在临床肿瘤应用范畴的不断扩大，需要检测血液中抗体的含量，进行药物的药代动力学分析；监测抗药抗体(anti-drug antibody，ada)的产生情况，指导临床合理用药，因此制备出能够抗曲妥珠单抗的抗体非常有必要。抗曲妥珠单抗的抗体识别曲妥珠单抗的可变区，并产生特异性结合的抗体。抗曲妥珠单抗的抗体可以分为竞争型(抗原阻断型)和非竞争型(抗原非阻断型)两种。

技术实现思路

1、为满足临床患者曲妥珠单抗的检测需求，本文中提供一种靶向曲妥珠单抗的独特型抗体。具体而言，本申请提供了以下技术方案。

2、在第一方面，本申请提供了特异性结合曲妥珠单抗的抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含hcdr1、hcdr2和hcdr3，其中按照kabat编号系统，所述轻链可变区包含lcdr1、lcdr2和 lcdr3，其中所述hcdr1的氨基酸序列如seqid no:1所示，所述hcdr2的氨基酸序列如seq id no:2所示，所述hcdr3的氨基酸序列如seqid no:3所示，所述lcdr1的氨基酸序列如seq id no:4所示，所述lcdr2的氨基酸序列如seqid no:5所示，并且所述lcdr3的氨基酸序列如seq id no:6所示；或者按照imgt编号系统，所述hcdr1的氨基酸序列如seq id no:9所示，所述hcdr2的氨基酸序列如seq id no:10所示，所述hcdr3的氨基酸序列如seq id no:11所示，所述lcdr1的氨基酸序列如seq id no:12所示，所述lcdr2的氨基酸序列如seq id no:14所示，并且所述lcdr3的氨基酸序列如seqid no:13所示。

3、在第二方面，本申请提供了核酸分子，其编码第一方面所述的抗体或其抗原结合部分。

4、在第三方面，本申请提供了表达载体，其包含第二方面所述的核酸分子。

5、在第四方面，本申请提供了宿主细胞，其包含第二方面所述的核酸分子或第三方面所述的表达载体。

6、在第五方面，本申请提供了制备第一方面所述的抗体或其抗原结合部分的方法，其包括：

7、a) 培养第四方面所述的宿主细胞；和

8、b) 从所述宿主细胞中或所述宿主细胞的培养物上清中回收所述抗体或其抗原结合部分。

9、在第六方面，本申请提供了检测试剂或试剂盒，其包含第一方面所述的抗体或其抗原结合部分。

10、在第七方面，本申请提供了第一方面所述的抗体或其抗原结合部分用于检测受试者的生物样品中的曲妥珠单抗的用途。

11、在第八方面，本申请提供了第一方面所述的抗体或其抗原结合部分用于测定施用了曲妥珠单抗的患者的生物样品中的曲妥珠单抗的含量的用途。

12、本申请制备的特异性结合曲妥珠单抗的抗体不但可以为血液中药物浓度监测提供技术支持，而且还可以作为ada检测的阳性参照。

技术特征：

1.特异性结合曲妥珠单抗的抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述轻链可变区包含lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中按照kabat编号系统，所述hcdr1的氨基酸序列如seq id no:1所示，所述hcdr2的氨基酸序列如seq id no:2所示，所述hcdr3的氨基酸序列如seq id no:3所示，所述lcdr1的氨基酸序列如seq id no:4所示，所述lcdr2的氨基酸序列如seq id no:5所示，并且所述lcdr3的氨基酸序列如seq id no:6所示；或者按照imgt编号系统，所述hcdr1的氨基酸序列如seq id no:9所示，所述hcdr2的氨基酸序列如seq id no:10所示，所述hcdr3的氨基酸序列如seq id no:11所示，所述lcdr1的氨基酸序列如seq id no:12所示，所述lcdr2的氨基酸序列如seq id no:14所示，并且所述lcdr3的氨基酸序列如seq id no:13所示。

2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗原结合部分选自：fab片段、fab’片段、f(ab’)2片段、fv片段、scfv片段、fd片段或单域抗体。

3. 如权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体为鼠源抗体，并且所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no:7所示，和/或所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:8所示。

4.核酸分子，其编码权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合部分。

5.表达载体，其包含权利要求4所述的核酸分子。

6.宿主细胞，其包含权利要求4所述的核酸分子或权利要求5所述的表达载体。

7. 制备权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合部分的方法，其包括：

8.检测试剂或试剂盒，其包含权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合部分。

9.权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合部分用于检测受试者的生物样品中的曲妥珠单抗的用途。

10.权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合部分用于测定施用了曲妥珠单抗的患者的生物样品中的曲妥珠单抗的含量的用途。

技术总结
本申请提供了一种靶向曲妥珠单抗的抗体及其用途。本申请还提供了编码所述抗体的核酸、包含所述核酸的表达载体、包含所述核酸或所述表达载体的宿主细胞、检测曲妥珠单抗的检测试剂或试剂盒等。本申请制备的特异性结合曲妥珠单抗的抗体不但可以为血液中药物浓度监测提供技术支持，而且还可以作为ADA检测的阳性参照。

技术研发人员：欧伦,王雪莉,王变珍,谢新遥
受保护的技术使用者：军科正源（北京）药物研究有限责任公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16